王丹
- 作品数：13 被引量：34H指数：3
- 供职机构：西北民族大学更多>>
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- 相关领域：农业科学医药卫生生物学轻工技术与工程更多>>
- 我国不同地区猪脑心肌炎和细小病毒流行病学调查被引量：4
- 2014年
- 猪脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科、心病毒属成员,能引起猪以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染病[1-3]。EMCV感染的妊娠母猪则以流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主要特征,其他猪多呈隐性感染状态[4-6]。目前,多个国家和地区不时的报道了该病发生和流行[6-8]。猪细小病毒（Porcineparvovirus PPV）是引起猪繁殖障碍的一个非常重要的病原体之一。
- 王丹冯若飞马忠仁谢晶莹张海霞杨妍梅李向茸冯玉萍
- 关键词：猪脑心肌炎猪繁殖障碍猪细小病毒脑心肌炎病毒流行病学调查
- 脑心肌炎病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2013年
- 为建立快速检测脑心肌炎病毒(EMCV)的环介导等温扩增方法(LAMP),参照GenBank中EMCV基因组序列(X74312.1),针对EMCV的3D基因保守区域设计并合成了4条引物,对建立的反应体系进行条件优化,并进行特异性、敏感性试验及临床样本的检测。结果显示,成功建立了EMCV LAMP检测方法,且当内、外引物浓度比例为5∶1(即内、外引物浓度分别为50μmol/L、10μmol/L),反应温度为64℃,反应时间为60min时反应体系可达最佳。特异性和敏感性试验表明,该方法能够特异性地检测EMCV,且敏感性比常规RT-PCR法高10倍。分别用建立的LAMP法与ELISA法对临床样本进行检测,结果二者的符合率为97%。表明建立的LAMP方法特异性强、敏感性高,可适用于EMCV临床样本的快速检测。
- 王丹冯若飞张海霞凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒环介导等温扩增技术
- 脑心肌炎病毒的体外细胞增殖培养及其冻干保存试验被引量：3
- 2012年
- 为了解脑心肌炎病毒在Vero细胞不同培养方式下的增殖效果和用不同冻干保护剂的冻干效果,分别采用方瓶、转瓶来培养Vero细胞并接种脑心肌炎病毒,测定收获病毒毒液的效价,比较病毒的增殖效果;配制了10组冻干保护剂,分别与病毒混合后真空冻干,通过测定冻干前后的病毒效价,以期筛选最佳的保护剂配方。结果显示,脑心肌炎病毒在Vero细胞转瓶培养中增殖效果较好,第Ⅷ组保护剂对脑心肌炎病毒的冻干保护效果最好,冻干后效价下降低于1.5(lg)TCID50/mL。表明Vero细胞转瓶培养方式可用于脑心肌炎病毒的体外大规模培养;含有50g/L蔗糖、2.2g/L牛血清白蛋白、5.0g/L明胶和6.0g/L谷氨酰胺的保护剂对脑心肌炎病毒冻干具有较好的保护作用。
- 张海霞冯若飞王丹凡静静李向茸杨妍梅马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒增殖培养效价冻干保护剂
- 脑心肌炎病毒 TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用被引量：8
- 2013年
- 目的建立脑心肌炎病毒（ EMCV） TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针，建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，且对体系进行优化；对该法进行灵敏性、特异性验证；采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测，并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好，以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0．995；灵敏性比普通PCR高100倍，且仅能特异性检出 EMCV；对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98．0％。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，该法灵敏性高、特异性好，可用于EMCV的检测及定量分析。
- 张海霞冯若飞王丹凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒实时荧光定量PCR
- 山花更烂漫—对东乡刺绣艺术发展的探寻与研究
- 刺绣在中国有着悠久的历史,东乡刺绣作为中国刺绣的一支具有深厚的艺术文化内涵。但由于东乡刺绣所处的地理环境以及东乡经济发展的滞后,使得东乡刺绣发展缓慢,对传统刺绣没有更好的继承和开发。近些年来,国家开始重视文化产业,对中国...
- 王丹
- 关键词：传统艺术
- 文献传递
- 无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系的建立及其生物学特性被引量：1
- 2014年
- 目的建立无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系,并检测其生物学特性。方法将CHO-K1贴壁细胞通过逐步降低血清浓度,获得低血清CHO-K1贴壁细胞,以3×105个/ml接种于含无血清培养基SFM4CHO的150 ml三角瓶中,摇床无血清适应培养,获得CHO-K1-SFS细胞。对该细胞进行生长曲线绘制、微生物污染检测、代谢分析及外源基因表达检测。结果所获得的CHO-K1-SFS细胞系可无血清悬浮培养,以3×105个/ml的初始密度接种,最大增殖浓度可达3.8×106个/ml,平均倍增时间为29.7 h;无细菌、真菌、病毒和支原体污染;对葡萄糖利用率较高,乳酸产生较多;能较好地表达外源基因。结论成功建立了无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系,为建立高效的外源基因表达平台奠定了基础。
- 杨妍梅冯若飞谢晶莹李向茸王丹马忠仁
- 关键词：CHO-K1细胞无血清培养生物学特性
- 盖他病毒重组E2蛋白间接ELISA检测方法的建立被引量：8
- 2012年
- 参照GenBank中盖他病毒株E2蛋白氨基酸序列并进行密码子优化后,人工合成该基因,并将其定向克隆到表达载体pGEX-4T-1中,经酶切及测序鉴定均正确后,转化宿主菌BL21(DE3)进行IPTG诱导表达。以该表达蛋白作为诊断抗原,建立了检测猪盖他病毒抗体的E2-ELISA方法,并对临床血清样品进行检测。结果显示,重组表达的E2蛋白具有良好的抗原性和特异性。用建立的间接ELISA检测471份临床血清样品,检出抗体阳性119份,阳性率为25.27%。结果表明,本研究制备的重组E2蛋白具有良好的免疫原性,可应用于ELISA等相关检测方法的建立。
- 李向茸冯若飞刘俊林王丹杨妍梅凡静静张海霞马忠仁
- 关键词：E2蛋白原核表达间接ELISA
- 人脑心肌炎病毒IgM捕获ELISA方法的建立及初步应用
- 脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)是一种能引起急性传染病的人畜共患病原体,主要引起人和动物发生脑炎、心肌炎及心肌周围炎,一般人感染EMCV后,出现呕吐、头疼、发热、精神不振、颈...
- 王丹
- 关键词：脑心肌炎病毒IGM
- 文献传递
- 脑心肌炎病毒VP1基因真核表达载体的构建及表达被引量：3
- 2013年
- 为构建脑心肌炎病毒(EMCV)VP1基因的真核表达载体,并在CHO细胞中进行表达,通过RT-PCR扩增目的基因,酶切连接后将VP1基因克隆入真核表达载体pEGFP-C1中,通过脂质体法转染重组质粒pEGFP-C1-VP1,提取CHO细胞的总RNA,用RT-PCR检测目的基因的转录情况,并利用免疫组织化学和Western-blot分析检测目的基因表达情况、VP1蛋白在细胞中的定位及其抗原性。PCR、酶切验证及测序结果证实,重组质粒构建成功,绿色荧光蛋白正常表达。提取试验组细胞的总RNA,进行RT-PCR,在900bp处扩增出了目的条带。免疫组织化学结果显示,VP1主要分布在CHO细胞的细胞膜中,少量存在于胞浆中。Western-blot分析结果证实,VP1能与兔抗EMCV抗体特异性结合。表明VP1蛋白在CHO细胞中表达良好,表达的蛋白具有反应原性。
- 凡静静冯若飞杨妍梅张海霞李向茸王丹谢晶莹马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒VP1基因真核表达免疫组织化学
- 感染脑心肌炎病毒小鼠的脑组织病理损伤及体内病毒分布被引量：2
- 2013年
- 为探讨脑心肌炎病毒对小鼠的致病性及体内病毒分布、复制情况,选用脑心肌炎病毒VR129B株进行小鼠接种,观察其临床症状,并将死亡小鼠脑组织进行病理切片,同时利用PCR及real-time PCR方法对各组织中病毒含量进行测定。结果显示,感染小鼠出现典型的神经性临床症状,感染后第4天开始死亡,第5~9天死亡达到高峰;脑组织切片可见血管镶边现象、卫星化、噬神经细胞现象及胶质细胞结节等典型的组织病理学现象,脑、心、脾、肝及胸腺均存在病毒复制子,其中脑组织病毒含量最高。表明,小鼠对脑心肌炎病毒较为敏感,感染后出现脑炎症状和病理变化,且病毒集中在小鼠脑组织中。
- 张海霞冯若飞王丹凡静静李向茸杨妍梅马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒组织切片病理学变化
