谢晶莹
- 作品数：17 被引量：46H指数：4
- 供职机构：西北民族大学生命科学与工程学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金长江学者和创新团队发展计划中央高校基本科研业务费专项资金更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学化学工程更多>>
- 脑心肌炎病毒 TaqMan real-time PCR检测方法的建立及应用被引量：9
- 2013年
- 目的建立脑心肌炎病毒（ EMCV） TaqMan real-time PCR检测方法。方法根据GenBank中公布的EMCV 3D基因保守区段设计并合成1对引物和1条TaqMan 探针，建立EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，且对体系进行优化；对该法进行灵敏性、特异性验证；采用建立的方法对98份猪血清样本进行检测，并与ELISA结果进行比较。结果建立的EMCV TaqMan real-time PCR检测方法线性关系较好，以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0．995；灵敏性比普通PCR高100倍，且仅能特异性检出 EMCV；对猪血清样本的检测与 ELISA 法检测结果符合率为98．0％。结论已建立了EMCV TaqMan real-time PCR检测方法，该法灵敏性高、特异性好，可用于EMCV的检测及定量分析。
- 张海霞冯若飞王丹凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒实时荧光定量PCR
- 重组小鼠碱性成纤维细胞生长因子在CHO-K1-SFS细胞中的表达
- 2015年
- 目的构建小鼠碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,b FGF,亦称FGF-2)的真核表达质粒,并于无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中进行表达。方法以小鼠垂体组织总RNA为模板,PCR扩增b FGF基因,并克隆至真核表达载体p EGFP-C1,构建重组表达质粒p EGFP-C1-b FGF,经Lipofectamine 2000介导转染无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞,荧光显微镜观察CHO-K1-SFS细胞中EGFP的表达情况,普通光学显微镜观察CHO-K1-SFS细胞的生长状况和细胞形态,RT-PCR法检测CHO-K1-SFS细胞中b FGF基因的转录,Western blot法检测CHOK1-SFS细胞中b FGF蛋白的表达。结果重组表达质粒p EGFP-C1-b FGF经双酶切(BglⅡ/SalⅠ)鉴定证明构建正确;重组质粒p EGFP-C1-b FGF转染后24、48、72及96 h的CHO-K1-SFS细胞均可见特异性绿色荧光蛋白表达,重组质粒p EGFP-C1-b FGF转染对CHO-K1-SFS细胞形态和增殖速率不产生影响;p EGFP-C1-b FGF转染组CHO-K1-SFS细胞可扩增出510 bp的目的条带;p EGFP-C1-b FGF转染组可见相对分子质量约44 000的特异性条带,表达产物可与兔抗b FGF多克隆抗体发生特异性结合。结论构建的真核表达质粒p EGFP-C1-b FGF在无血清悬浮培养的CHO-K1-SFS细胞中成功的表达,为进一步实现小鼠b FGF在哺乳动物细胞中的分泌表达及药物开发奠定了基础。
- 李向茸冯若飞包晓婧张海霞谢晶莹徐雷马忠仁
- 关键词：碱性成纤维细胞生长因子真核细胞基因表达
- 我国不同地区猪脑心肌炎和细小病毒流行病学调查被引量：4
- 2014年
- 猪脑心肌炎病毒（Encephalomyocarditis virus,EMCV）属于小RNA病毒科、心病毒属成员,能引起猪以脑炎、心肌炎或心肌周围炎为主要特征的急性传染病[1-3]。EMCV感染的妊娠母猪则以流产、死胎、弱胎、木乃伊胎等繁殖障碍为主要特征,其他猪多呈隐性感染状态[4-6]。目前,多个国家和地区不时的报道了该病发生和流行[6-8]。猪细小病毒（Porcineparvovirus PPV）是引起猪繁殖障碍的一个非常重要的病原体之一。
- 王丹冯若飞马忠仁谢晶莹张海霞杨妍梅李向茸冯玉萍
- 关键词：猪脑心肌炎猪繁殖障碍猪细小病毒脑心肌炎病毒流行病学调查
- 脑心肌炎病毒环介导等温扩增快速检测方法的建立及初步应用被引量：2
- 2013年
- 为建立快速检测脑心肌炎病毒(EMCV)的环介导等温扩增方法(LAMP),参照GenBank中EMCV基因组序列(X74312.1),针对EMCV的3D基因保守区域设计并合成了4条引物,对建立的反应体系进行条件优化,并进行特异性、敏感性试验及临床样本的检测。结果显示,成功建立了EMCV LAMP检测方法,且当内、外引物浓度比例为5∶1(即内、外引物浓度分别为50μmol/L、10μmol/L),反应温度为64℃,反应时间为60min时反应体系可达最佳。特异性和敏感性试验表明,该方法能够特异性地检测EMCV,且敏感性比常规RT-PCR法高10倍。分别用建立的LAMP法与ELISA法对临床样本进行检测,结果二者的符合率为97%。表明建立的LAMP方法特异性强、敏感性高,可适用于EMCV临床样本的快速检测。
- 王丹冯若飞张海霞凡静静谢晶莹马忠仁冯玉萍
- 关键词：脑心肌炎病毒环介导等温扩增技术
- 猪β干扰素真核表达载体pEGFP-C1-IFN-β的构建及在CHO细胞中的表达被引量：4
- 2015年
- 为了获得重组猪β干扰素,并实现其在CHO-K1细胞中的表达,根据GenBank中登录的IFN(JN391525.1)核苷酸序列,设计并合成目的基因的检测引物,并将合成的目的基因克隆至pEGFP-C1载体上,构建重组真核表达质粒pEGFP-C1-IFN-β,通过PCR、酶切鉴定及测序确认,将重组质粒转染到CHO-K1细胞中。经SDS-PAGE检测,获得了约25ku的表达产物,与预期的猪β干扰素蛋白的分子质量大小一致。Western-blot分析表明,表达产物与抗β干扰素阳性血清发生反应,证实表达产物具有良好的反应原性。本试验成功地在CHO-K1细胞上表达了猪β干扰素,为猪β干扰素的后续研究及生产提供了技术支持。
- 徐雷冯若飞李向茸张海霞谢晶莹包晓婧马玉梅马忠仁
- 关键词：真核表达免疫活性
- 与脑心肌炎病毒衣壳蛋白相互作用宿主蛋白的筛选
- 2019年
- 应用Dual hunter酵母双杂交系统,以脑心肌炎病毒(Encephalomyocarditis virus,EMCV)衣壳蛋白VP1、VP2和VP3为诱饵,通过对BHK-21细胞cDNA文库的筛选,共得到24个互作蛋白。经过生物信息学分析,发现其功能包括蛋白结合、催化活性、转运活性和结构分子活性;参与生物调节、细胞形成、细胞代谢、发育过程、细胞定位和免疫反应等多个生理过程,并参考文献资料分析这些蛋白在病毒复制中可能起到的作用,为研究EMCV感染及其致病机理提供参考。
- 谢晶莹邓盈盈韩玉梅张海霞李向茸李琼毅冯若飞
- 关键词：脑心肌炎病毒衣壳蛋白宿主蛋白
- 无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系的建立及其生物学特性被引量：1
- 2014年
- 目的建立无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系,并检测其生物学特性。方法将CHO-K1贴壁细胞通过逐步降低血清浓度,获得低血清CHO-K1贴壁细胞,以3×105个/ml接种于含无血清培养基SFM4CHO的150 ml三角瓶中,摇床无血清适应培养,获得CHO-K1-SFS细胞。对该细胞进行生长曲线绘制、微生物污染检测、代谢分析及外源基因表达检测。结果所获得的CHO-K1-SFS细胞系可无血清悬浮培养,以3×105个/ml的初始密度接种,最大增殖浓度可达3.8×106个/ml,平均倍增时间为29.7 h;无细菌、真菌、病毒和支原体污染;对葡萄糖利用率较高,乳酸产生较多;能较好地表达外源基因。结论成功建立了无血清悬浮培养CHO-K1-SFS细胞系,为建立高效的外源基因表达平台奠定了基础。
- 杨妍梅冯若飞谢晶莹李向茸王丹马忠仁
- 关键词：CHO-K1细胞无血清培养生物学特性
- 膜连蛋白A2基因实时荧光定量PCR检测方法的建立及应用被引量：4
- 2015年
- 为建立膜连蛋白A2(AnxA2)基因SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法,根据GenBank中公布的AnxA2基因序列设计并合成引物,经过条件优化,建立了AnxA2SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法。该方法线性关系较好,以质粒标准品构建的标准曲线相关系数R2为0.999;灵敏性好,比普通PCR灵敏100倍。应用建立的方法对随机选取的几种哺乳动物细胞进行检测。结果表明,建立的方法能成功检出不同细胞中AnxA2含量。表明本研究建立的AnxA2SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR检测方法灵敏性高,重复性好,可用于AnxA2的检测及定量分析。
- 张海霞马玉梅包晓婧徐雷李向茸谢晶莹马忠仁冯若飞
- 人血白蛋白的原核表达及应用被引量：2
- 2013年
- 旨在构建人血白蛋白(HSA)基因的原核表达载体pGEX-4T-1-rHSA,诱导表达后纯化重组HSA蛋白,制备多克隆抗体并对其进行鉴定。根据GenBank发表的HSA(NM_000477.5)的核苷酸序列设计合成1对特异性引物,以人胚肺二倍体细胞的总RNA为模板,利用RT-PCR扩增HSA基因,将其克隆至pGEX-4T-1载体,构建重组原核表达质粒pGEX-4T-1-rHSA,经PCR、酶切及测序鉴定正确后转化大肠杆菌BL21(DE3),进行IPTG诱导表达,表达产物经变性、复性、亲和层析纯化后作为免疫原制备多克隆抗体,应用间接ELISA和Western-blot方法对所得抗体进行检测。结果表明,重组蛋白主要以包涵体的形式存在,分子质量为92 kD;重组蛋白具有良好的反应原性和免疫原性;应用其制备的抗血清效价达到1∶100 000;纯化的多克隆抗体与血源人血清白蛋白和重组人血白蛋白均能产生特异性结合,具有良好的生物学活性。
- 李向茸冯若飞谢晶莹田伟杨妍梅王丹马忠仁
- 关键词：人血清白蛋白原核表达包涵体多克隆抗体
- 脑心肌炎病毒VP1蛋白酵母双杂交诱饵载体的构建及验证被引量：2
- 2015年
- 为筛选与脑心肌炎病毒VP1蛋白相互作用的靶细胞cDNA文库蛋白,构建VP1蛋白的诱饵载体pDHB1-VP1。扩增EMCV的VP1基因并克隆至pMD18-T载体中,经测序验证正确后定向克隆至酵母双杂交诱饵载体pDHB1。将重组pDHB1-VP1载体进行酶切验证和测序分析,并转化酵母报告菌株NMY51,检测其在酵母细胞中有无表达和自激活作用。结果表明,构建的p DHB1-VP1基因可以在酵母细胞中正确表达,产物大小约66 kD,而且可以与兔抗EMCV血清发生特异性结合,有较好免疫原性。成功构建了诱饵载体pDHB1-VP1,可以在酵母细胞中表达且其对报告基因无自激活作用,可以应用于酵母双杂交筛选试验中。
- 谢晶莹冯若飞徐雷张海霞李向茸侯兰新马忠仁
- 关键词：脑心肌炎病毒VP1蛋白酵母双杂交诱饵蛋白
