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人ZP3基因在毕赤酵母中表达: 目的:建立表达人卵透明带ZP3基因的Pichia potarios酵母系统,为研究受精机理和发展透明带避孕疫苗提供材料。方法:用PCR方法扩增出大小约为1.3kb的hZP3 DNA片断,用EcoR Ⅰ酶和Xbal Ⅰ酶双...; 曹佐武陆进丽李文星丰一兴; 关键词：酵母基因表达; 文献传递

重组人卵透明带蛋白及其多克隆抗体对精子-透明带结合的影响被引量：1: 2006年; 为了探讨毕赤酵母表达的重组人卵透明带ZP3蛋白(recombinant human zona pellucida-3 protein,rhZP3)及其多克隆抗体对小鼠和人精卵结合的影响,采用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理小鼠精子,然后再与小鼠卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附及体外受精率的影响;用rhZP3以及空白培养液分别处理人精子,然后再与人卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子对透明带黏附的影响;用抗rhZP3抗体与阴性血清分别处理小鼠和人卵子,再与精子进行结合实验,观察多克隆抗体对精子粘附以及小鼠体外受精率的影响。实验结果表明,rhZP3和抗rhZP3多克隆抗体既能抑制人的体外精卵结合,也能抑制小鼠体外精卵结合,提示rhZP3具有天然透明带的特性,有发展成避孕疫苗和作为检测透明带抗体检测试剂的可能。; 谢琪璇马丽潘善培张韫张春雪肖銮娟史卫卫李文星; 关键词：卵透明带多克隆抗体避孕疫苗

人卵透明带蛋白3差异表达菌的鉴定及比较: 2009年; 目的:研究重组人卵透明带ZP3蛋白的差异表达情况。方法:构建8个重组rhZP3的差异表达质粒在毕赤酵母中进行诱导表达,研究跨膜区保留与否、潜在酶切位点突变与否及多聚组氨酸纯化标签设计的位置是否影响rhZP3的表达情况。结果:保留跨膜区会影响重组蛋白泌出胞外而使表达量降低,潜在酶切位点存在会导致重组蛋白被不完全降解,而多聚组氨酸纯化标签设计位置对表达也有一定影响。结论:从表达量和产物完整性综合考虑,以突变型成熟肽为佳,含跨膜区的蛋白则应选用pPICZaA质粒,以便富集得到完整的表达蛋白。; 周文燊熊波李文星谢琪璇肖銮娟张春雪潘善培; 关键词：跨膜区

巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHC MVp的研究被引量：1: 2005年; 目的:提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法:将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS -PAGE结果分析不同条件、不同诱导时间对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响,并依据优化条件进行高密度发酵。结果:摇瓶培养时,转化子在体积分数1%的甲醇pH 6 0的条件下诱导72h ,A6 0 0 (菌体密度)为4 5 2 ,目的蛋白表达量达到10 2mg/L。2L发酵罐进行了高密度发酵,经体积分数1%甲醇诱导4 8h ,最终A6 0 0 (菌体密度)达到12 4 ,每升发酵液中含目的蛋白5 7 2 1mg。结论:通过条件优化,进行高密度发酵,获得大量的rHCMVp。; 余巍谢琪璇潘善培肖銮娟熊波李文星董志炜; 关键词：巴斯德毕赤酵母发酵

重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用被引量：1: 2005年; 目的:观察重组人卵透明带蛋白(rhZP3)对人精子顶体反应的诱导作用。方法:正常生育力人精子经过获能后,分别用BSA、孕酮和含不同浓度的重组人ZP3蛋白的培养液共孵育,诱导精子顶体反应,对实验组和对照组的精子的顶体发生状态用考马斯亮蓝染色法进行评价。结果:精子与培养液共孵育30 min后,rhZP3组与BSA组之间差异有显著性(P<0.05),顶体反应率随rhZP3质量浓度增加而升高。结论:重组人ZP3蛋白对人精子顶体反应有显著的诱导效应,且在一定范围内与质量浓度成正相关,重组人ZP3蛋白具有发展精子顶体反应试剂盒的潜能。; 谢琪璇史卫卫张韫李文星张春雪肖銮娟潘善培; 关键词：精子顶体反应

重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性研究被引量：2: 2005年; 为了研究毕赤酵母表达的重组人卵透明带蛋白(rhZP3)的生物活性,分别用空白培养液,含孕酮或rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价;用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理精子,然后再与卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子在精卵结合中的情况;用抗rhZP3抗血清与阴性血清分别处理卵子,再与精子进行结合实验,观察经过不同处理后的卵子在精卵结合中的情况。rhZP3诱发顶体反应实验结果显示,rhZP3处理组与空白对照组之间差异显著(P<0.01);精卵结合实验结果显示,各实验组和对照组之间存在显著性差异(P<0.01),rhZP3、抗rhZP3抗体均能抑制精卵结合。实验结果表明,rhZP3具有天然人卵透明带蛋白相似的活性。; 谢琪璇李文星潘善培张春雪肖銮娟马丽史卫卫; 关键词：重组蛋白生物活性顶体反应精卵结合

重组猪卵透明带抗原pZP3α在毕赤酵母中的分泌表达: 2006年; 为制备rpZP3a蛋白供发展避孕疫苗研究，将编码天然提取pZP3a上的DNA序列（446—1423）插入至毕赤酵母分泌型表达载体pPICZaA上，重组质粒pPICZaA—pZP3a线性化后通过电穿孔转入毕赤酵母GS115，经抗生素Zeoein筛选获得工程菌。在2L发酵罐中，用甲醇诱导工程菌进行高密度发酵生产rpZP3a。分离浓缩发酵上清液，通过螯合铜离子的亲和柱纯化rpZP3a，用SDS-PAGE和Westernblot进行鉴定，以Quantity One软件对rpZP3a进行定量分析并计算纯度和回收率。用rpZP3a免疫家兔，以ELISA法和间接免疫荧光法检测抗血清对rpZP3a和猪卵透明带的抗体反应。获得了分泌表达rpZP3a的工程菌，其高密度发酵产物经分离纯化后获得能与抗pZP3抗体反应的46kD成分，命名为rpZP3a，平均产量为8mg／L，纯度达92％。回收率为63％。用其免疫家兔获得抗rpZP3a抗血清，ELISA测定显示能与rpZP3a和天然提取pZP3反应。间接免疫荧光法分析显示抗rpZP3a抗血清能与猪卵透明带反应，产生亮绿荧光。用酵母表达系统成功表达了rpZP3a，该蛋白保留有天然pZP3的免疫活性。; 高彦茹潘善培谢琪璇肖銮娟柯琼李文星史卫卫

重组人透明带蛋白3的高密度发酵表达及食蟹猴的免疫研究: 卵透明带(zona pellucida，ZP)，是哺乳动物卵子外包裹的一层半透明的糖蛋白基质，是精子与卵细胞识别和结合的部位，同时对卵子起保护作用。卵透明带的生理特性极具研究价值，ZP蛋白的特性使之具有开发成避孕疫苗的潜...; 李文星; 关键词：卵透明带巴斯德毕赤酵母高密度发酵避孕疫苗食蟹猴; 文献传递

我国猪周期下生猪期货价格发现功能研究: 2023年; 我国生猪期货于2021年1月8日在大连商品交易所正式挂牌上市,对生猪产业稳健发展、熨平猪周期具有重要意义。本文采用2001年1月-2023年9月猪肉月均价格,对我国猪周期进行分析,然后结合生猪期货上市后猪价波动特征,细分上涨下跌阶段,选取2021年1月8日-2022年9月30日这个时间段的生猪期货和猪肉现货的日度和周度价格数据构建VAR模型,对不同阶段下生猪期货价格发现作用进行检验。结果表明:我国生猪期货具有价格发现作用,但作用较小,且在价格发现作用中生猪期货占主导地位;在整个样本区间和猪价上涨阶段,生猪期货单向引导猪肉现货价格,而在猪价下跌阶段,生猪期货与猪肉现货之间具有双向引导作用。因此,推进我国生猪规模化养殖、提高生猪养殖企业在生猪期货市场中的参与度,对进一步完善期货市场价格发现功能、稳定生猪产业和平抑猪肉价格波动具有重要意义。; 李文星张欢; 关键词：生猪期货价格发现 VAR模型格兰杰因果检验

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