朱晓宇
- 作品数：9 被引量：22H指数：4
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金全球变化研究国家重大科学研究计划国家高技术研究发展计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学医药卫生更多>>
- P53亚细胞定位变化对POLD1基因启动子活性的影响被引量：11
- 2006年
- POLD1基因编码DNA聚合酶δ(pol δ)的催化亚基．体外实验表明p53能够抑制POLD1 基因启动子活性．文中探讨p53是否在细胞内直接与POLD1启动子结合调节POLD1基因表达．在瞬时转染pEGFP-p53重组质粒的人乳腺癌MCF7细胞中,p53表达增强;RT-PCR结果显示 POLD1基因mRNA表达受到抑制．染色体免疫共沉淀和荧光素酶报告基因实验证明p53在细胞内与POLD1启动子直接结合抑制其启动子活性．荧光显微镜观察发现EGFP-p53在G1期进入细胞核而在S期和G2期则被转运至细胞质．在稳定表达的pEGFP-p53细胞系中,细胞周期同步化后POLD1启动子活性在细胞周期各时相均处于较低水平．证明了细胞内p53高表达后通过直接与 POLD1启动子结合而抑制POLD1基因表达,且这种抑制作用不受细胞周期进程的影响．
- 朱晓宇徐恒李莉张海江宋楠萌孙建华石磊桑建利
- 关键词：启动子P53细胞周期CHIP
- POLD1基因启动子中CDE/CHR元件的鉴定及功能分析被引量：3
- 2009年
- POLD1基因编码真核生物DNA聚合酶δ的催化亚基,其表达调控与细胞周期密切相关.为了探讨POLD1基因表达的调控机理,本研究首次在POLD1基因启动子中鉴定出CDE/CHR元件,随后通过分析元件序列定点突变对其转录活性的影响,以及与细胞周期相关的转录因子E2F和CDK及抑制因子p21WAF1/Cip1对其转录活性的调控作用,对此元件的功能进行了分析.结果显示,CDE/CHR元件序列突变后POLD1基因启动子转录活性明显升高,其转录活性不再受到E2F和p21WAF1/Cip1的调控,转录活性的细胞周期依赖性调控消失.与此同时本研究对直接参与CDE/CHR元件调控的蛋白进行了初步检测,结果显示,至少存在3种蛋白复合体能够与POLD1基因启动子中的CDE/CHR元件结合.由此证实,POLD1基因启动子中存在CDE/CHR元件,此元件与POLD1基因转录的细胞周期依赖性调控直接相关.
- 宋楠萌朱晓宇石磊安婧武彦威桑建利
- 关键词：启动子活性定点突变
- p21 cip1抑制POLD1基因启动子活性的研究
- 已知 DNA 聚合酶δ(polδ)催化亚基 POLD1的表达受到细胞周期调控,p21 cip1是最早发现的细胞周期抑制因子,除抑制 CDK 活性外,还可对 polδ产生抑制作用。本研究首先将荧光素酶报告基因载体转入人乳腺...
- 宋楠萌朱晓宇石磊桑建利
- 关键词：细胞周期E2F1
- 文献传递
- 细胞周期调控基因与POLD1基因转录活性的相关性研究
- 本研究运用细胞周期同步化及荧光素酶报告基因测定了人乳腺癌MCF7细胞中POLD1启动子在细胞周期不同时相的活性。结果显示启动子活性随着细胞周期进程而变化，在早S期最高。瞬时共转染实验发现，随着E2F1的积累，POLD1启...
- 朱晓宇
- 关键词：细胞周期E2FP53P21
- 增强p53、p21及抑制c-myc表达对MCF-7细胞增殖的协同抑制作用被引量：2
- 2005年
- 为了探讨增强p53、p21基因表达水平和降低c-myc基因表达水平对乳腺癌细胞MCF-7增殖的协同抑制作用,以及这些基因对细胞产生效应时的相互关系,本研究中首先构建了正义的p53、p21和反义的c-myc3种真核细胞表达载体,并根据析因实验设计三种载体不同剂量组合。按照组合用质粒转染细胞,然后对转染细胞的增殖抑制率进行检测,并采用金正均Q值法、单因素方差分析中的LSD法、聚类分析法等统计学方法对结果进行统计分析。结果显示,不同量的p53、p21反义c-myc对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,抑制的程度各基因间存在差异。在各基因组合中,p21与反义c-myc,p53与反义c-myc联用具有协同作用,对MCF-7细胞的增殖产生更强的抑制,而p53与p21之间未显示出协同作用。对三基因协同结果进行聚类分析后,发现第一类组合协同作用最明显,第九类组合的抑制率最高。由此推测,作为抑癌基因的p53或CDK抑制基因p21高表达,同时原癌基因c-myc表达受到抑制,可相互协同显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制作用。
- 张海江王楠朱晓宇桑建利何大澄
- 关键词：MCF-7细胞增殖真核细胞表达载体转染细胞
- G1期细胞周期相关蛋白对POLD1基因启动子活性的调控被引量：4
- 2007年
- POLD1基因编码DNA聚合酶δ的催化亚基.然而作为最重要的复制蛋白,目前并不清楚其表达的细胞周期调控机制.研究中运用细胞周期同步化及荧光素酶报告基因测定了POLD1启动子在细胞周期不同时相的活性,结果显示启动子活性随着细胞周期进程而变化,在早S期最高.为进一步确定调控POLD1表达的细胞周期相关因子,应用不同质粒转染MCF7细胞,分别筛选得到稳定细胞系.荧光素酶实验表明增强p53或p21的表达,抑制CyclinE或CDK2的表达都能抑制POLD1启动子活性;而抑制CDK4或Cyclin D1的表达对启动子活性没有明显影响.瞬时共转染实验进一步验证Cyclin E或CDK2受到抑制后能够降低POLD1启动子活性.研究初步探讨了POLD1基因表达的细胞周期调控通路,进一步了解细胞周期因子对DNA复制体调控的复杂机制.
- 徐恒朱晓宇张海江石磊李莉宋楠萌桑建利
- 关键词：细胞周期调控启动子
- p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响被引量：4
- 2005年
- 目的探讨抑癌基因p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长以及周期相关基因cyclinD1、cyclinE、CDK2和CDK4表达的影响。方法将正义的p53真核表达载体导入MCF-7细胞,获得稳定表达正义p53的细胞模型,并经PCR和Western blot鉴定。分析了细胞的各种生长特性包括生长曲线、血清依赖、单细胞克隆形成、软琼脂成集落等;利用TdR双阻断法同步化细胞,流式细胞术分析了细胞周期;Western blot检测了其他周期相关基因的表达。结果p53的高表达可以使细胞的生长速度减慢、血清依赖性增加、单细胞克隆成集落能力降低、非锚定依赖性生长能力减弱,S期的进程减缓,一定程度上抑制cyclinD1和CDK2的表达,cyclinE和CDK4的表达未见明显变化。结论抑癌基因p53的表达能够抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,并可能通过阻抑cyclinD1和CDK2的表达而阻抑细胞周期S期进程,实现其调节功能。
- 张海江孙建华朱晓宇桑建利何大澄
- 关键词：乳腺癌细胞周期抑癌基因P53
- G1期cyclin和CDK对pold1基因启动子活性的调控作用
- DNA聚合酶δ在DNA复制过程中合成前导链与滞后链。POLD1基因编码了DNA聚合酶δ的催化亚基,具有5’-3’聚合酶活性和3’-5’外切酶活性。将含有POLD1启动子全长的1758bp片段连接在荧光素酶报告基因的5’上...
- 朱晓宇桑建利
- 文献传递
- p21对DNA聚合酶δ表达的抑制及其对MCF7细胞增殖和恶性表型的影响被引量：4
- 2006年
- 细胞周期抑制因子p21能影响G1／S期转换和G2／M期进程,进而抑制细胞增殖．p21表达增高可以抑制多个DNA复制相关基因表达．DNA聚合酶δ是DNA复制中最为重要的复制酶, p21是否抑制它的表达,并通过这种作用影响细胞增殖及细胞恶性表型的变化,至今还没有报道．本研究观察到p21表达增强的MCF7-p21细胞生长速率变慢,血清依赖性增强,细胞的锚定和非锚定依赖性增殖都受到抑制,表明p21表达增加对细胞增殖和细胞恶性表型的产生有重要作用．而Western blot检测发现在p21表达增高的MCF7-p21细胞中,聚合酶δ(p125亚基)表达下降． p21高表达抑制POLD1启动子活性,这种抑制作用具有p21剂量依赖效应．这表明p21表达增高对细胞增殖的抑制和细胞恶性表型的影响可能是通过抑制在DNA复制中最重要的聚合酶δ(p125) 的表达来实现的．这可能是p21对细胞增殖及恶性表型影响的一个新的调控机制．
- 石磊徐恒朱晓宇孙建华宋楠萌李莉桑建利
- 关键词：P21细胞增殖DNA聚合酶Δ
