张海江
- 作品数：9 被引量：25H指数：4
- 供职机构：北京师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划教育部重点实验室基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生农业科学更多>>
- G1期细胞周期相关蛋白对POLD1基因启动子活性的调控被引量：4
- 2007年
- POLD1基因编码DNA聚合酶δ的催化亚基.然而作为最重要的复制蛋白,目前并不清楚其表达的细胞周期调控机制.研究中运用细胞周期同步化及荧光素酶报告基因测定了POLD1启动子在细胞周期不同时相的活性,结果显示启动子活性随着细胞周期进程而变化,在早S期最高.为进一步确定调控POLD1表达的细胞周期相关因子,应用不同质粒转染MCF7细胞,分别筛选得到稳定细胞系.荧光素酶实验表明增强p53或p21的表达,抑制CyclinE或CDK2的表达都能抑制POLD1启动子活性;而抑制CDK4或Cyclin D1的表达对启动子活性没有明显影响.瞬时共转染实验进一步验证Cyclin E或CDK2受到抑制后能够降低POLD1启动子活性.研究初步探讨了POLD1基因表达的细胞周期调控通路,进一步了解细胞周期因子对DNA复制体调控的复杂机制.
- 徐恒朱晓宇张海江石磊李莉宋楠萌桑建利
- 关键词：细胞周期调控启动子
- P53亚细胞定位变化对POLD1基因启动子活性的影响被引量：11
- 2006年
- POLD1基因编码DNA聚合酶δ(pol δ)的催化亚基．体外实验表明p53能够抑制POLD1 基因启动子活性．文中探讨p53是否在细胞内直接与POLD1启动子结合调节POLD1基因表达．在瞬时转染pEGFP-p53重组质粒的人乳腺癌MCF7细胞中,p53表达增强;RT-PCR结果显示 POLD1基因mRNA表达受到抑制．染色体免疫共沉淀和荧光素酶报告基因实验证明p53在细胞内与POLD1启动子直接结合抑制其启动子活性．荧光显微镜观察发现EGFP-p53在G1期进入细胞核而在S期和G2期则被转运至细胞质．在稳定表达的pEGFP-p53细胞系中,细胞周期同步化后POLD1启动子活性在细胞周期各时相均处于较低水平．证明了细胞内p53高表达后通过直接与 POLD1启动子结合而抑制POLD1基因表达,且这种抑制作用不受细胞周期进程的影响．
- 朱晓宇徐恒李莉张海江宋楠萌孙建华石磊桑建利
- 关键词：启动子P53细胞周期CHIP
- 皮肤T细胞淋巴瘤的T细胞受体基因克隆性重排被引量：4
- 2003年
- 目的研究皮肤T细胞淋巴瘤(CTCL)早期诊断。方法利用PCR方法,设计TCRVγ1-8、Vγ9、Jγ1/γ2特异引物,分析24例各类型CTCL,2例可疑CTCL及4例非特异性红皮病患者的33份皮肤和6份淋巴结石蜡标本的TCRγ鄄GR克隆性,30例炎性皮疹石蜡标本为阴性对照。结果39份标本中38份示TCRVγ1-8,37份示Vγ9呈MCGR、BCGR或OCGR。尤其是13例早期蕈样肉芽肿,2例可疑CTCL和4例非特异性红皮病均呈TCRγ鄄GR克隆性扩增带。6例炎性病变标本示TCRγ鄄GR克隆性,提示他们为“克隆性皮炎”,需长期随访。结论用PCR发现早期CTCL的TCRγ鄄GR克隆性,为诊断提供依据。
- 汪晨桑建利张海江
- 关键词：皮肤T细胞淋巴瘤T细胞受体基因CTCL聚合酶链反应
- 增强p53、p21及抑制c-myc表达对MCF-7细胞增殖的协同抑制作用被引量：2
- 2005年
- 为了探讨增强p53、p21基因表达水平和降低c-myc基因表达水平对乳腺癌细胞MCF-7增殖的协同抑制作用,以及这些基因对细胞产生效应时的相互关系,本研究中首先构建了正义的p53、p21和反义的c-myc3种真核细胞表达载体,并根据析因实验设计三种载体不同剂量组合。按照组合用质粒转染细胞,然后对转染细胞的增殖抑制率进行检测,并采用金正均Q值法、单因素方差分析中的LSD法、聚类分析法等统计学方法对结果进行统计分析。结果显示,不同量的p53、p21反义c-myc对MCF-7细胞的增殖均有抑制作用,抑制的程度各基因间存在差异。在各基因组合中,p21与反义c-myc,p53与反义c-myc联用具有协同作用,对MCF-7细胞的增殖产生更强的抑制,而p53与p21之间未显示出协同作用。对三基因协同结果进行聚类分析后,发现第一类组合协同作用最明显,第九类组合的抑制率最高。由此推测,作为抑癌基因的p53或CDK抑制基因p21高表达,同时原癌基因c-myc表达受到抑制,可相互协同显著增强对MCF-7细胞增殖的抑制作用。
- 张海江王楠朱晓宇桑建利何大澄
- 关键词：MCF-7细胞增殖真核细胞表达载体转染细胞
- POLD1基因在MCF-7细胞中转录调控的研究
- 在该论文中,利用构建的POLD1启动子序列的重组质粒,研究了POLD1基因启动子不同区域的转录活性.利用构建的POLD1启动子全长序列的重组质粒pGL2-δ(-1758)和TdR双阻断法获得处于不同周期时相的MCf-7细...
- 张海江
- 关键词：DNA复制细胞周期因子细胞周期调控反义RNA
- MCF-7细胞瞬时基因表达转染模式的建立
- 2005年
- 目的 建立一种高效、简便、低毒、价廉的瞬时基因表达细胞转染模式。 方法 选择人乳腺癌细胞 系MCF 7,采用Polyethylenimine(PEI)作为转染剂,对细胞密度、载体DNA量、PEI氮与DNA磷的比率(PEI N∶DNA P) 以及PEI DNA混合物与细胞共存的无血清培养时间等对转染效率的影响进行了比较分析。 结果 转染时的24 孔板每孔接种的细胞以2×105为宜,PEI N∶DNA P的最优比率不是固定的,它与转染时DNA的量有关,每孔转染1 μgDNA时其最优PEI N∶DNA P比率为33∶1左右,而每孔转染4μgDNA时其最优PEI N∶DNA P比率为9∶1左右。 另外,PEI DNA混合物与细胞共存的无血清培养时间至少需要3h,最佳时间为5～7h。 结论 利用转染剂PEI, 控制合适的细胞密度、DNA质量、PEI N∶DNA P比率和无血清培养的时间,可成为一种高效、简便、低毒、价廉的瞬时 基因表达的细胞转染模式。
- 张海江韩世炜桑建利何大澄
- 关键词：细胞转染
- p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长及周期相关基因的影响被引量：4
- 2005年
- 目的探讨抑癌基因p53对人乳腺癌细胞MCF-7生长以及周期相关基因cyclinD1、cyclinE、CDK2和CDK4表达的影响。方法将正义的p53真核表达载体导入MCF-7细胞,获得稳定表达正义p53的细胞模型,并经PCR和Western blot鉴定。分析了细胞的各种生长特性包括生长曲线、血清依赖、单细胞克隆形成、软琼脂成集落等;利用TdR双阻断法同步化细胞,流式细胞术分析了细胞周期;Western blot检测了其他周期相关基因的表达。结果p53的高表达可以使细胞的生长速度减慢、血清依赖性增加、单细胞克隆成集落能力降低、非锚定依赖性生长能力减弱,S期的进程减缓,一定程度上抑制cyclinD1和CDK2的表达,cyclinE和CDK4的表达未见明显变化。结论抑癌基因p53的表达能够抑制人乳腺癌细胞MCF-7的生长,并可能通过阻抑cyclinD1和CDK2的表达而阻抑细胞周期S期进程,实现其调节功能。
- 张海江孙建华朱晓宇桑建利何大澄
- 关键词：乳腺癌细胞周期抑癌基因P53
- POLD1启动子转录活性的初步分析
- DNA聚合酶δ(pol delta)在真核细胞DNA复制以及DNA的修复中均起重要作用。DNA合成是细胞周期进程中的关键事件,它标志着细胞完成了G1/S期的转换。已克隆的DNA聚合酶δ催化亚基p125的基因POLD1启动...
- 张海江桑建利
- 文献传递
- 真核细胞DNA聚合酶δ的结构与功能被引量：3
- 2004年
- DNA聚合酶δ(Polδ)在真核细胞的DNA复制过程中具有核心酶的作用,同时还参与DNA的修复。Polδ是一种由多个亚基组成的复合体,目前已从哺乳动物、裂殖酵母和芽殖酵母等多种真核生物细胞中分离出,并对它们的亚基组成进行了分析,但还未得到确切一致的结果。Polδ在DNA复制中的具体作用已基本了解,它参与催化整个前导链的复制以及一些或大部分滞后链的复制。此外,Polδ还参与DNA的修复,此酶的这一功能可减少DNA的变异,但目前对其作用机理还知之较少。在Polδ活性调控方面,主要研究了一些相关蛋白因子对Polδ活性的调控作用以及转录因子对催化亚基表达的调控作用。
- 张海江韩世炜桑建利
- 关键词：真核细胞DNA聚合酶DNA
