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提高内切葡聚糖酶活力及其在毕赤酵母中的表达研究被引量：4: 2015年; 以中性内切葡聚糖酶基因EG和真菌Corticium rolfsii的碳水化合物结合模块（FCBM）为模块，构建融合基因重构体EG-FCBM和CD-FCBM，并利用高效表达载体在毕赤酵母中对其进行高效表达。酶活及性质分析显示，EG-FCBM和CD-FCBM在诱导表达84～96h后，其对微晶纤维素的活力分别为951和676U·mL^-1，较原始基因EG（526U·mL^-1）提高81％、28％，而酶学性质两者间无较大差异。这一结果表明，FCBM在催化水解纤维素的过程中有着极为重要的作用，通过增加FCBM来提高纤维素酶活性方法可行。; 唐自钟刘姗晋海军孙蓉陈惠韩学易; 关键词：内切葡聚糖酶融合基因酶学性质

产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达被引量：8: 2014年; 【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。; 唐自钟刘姗韩学易晋海军陈惠刘默洋单志吴琦; 关键词：毕赤酵母菌种鉴定

籽粒苋根系蛋白的提取与双向电泳体系的建立被引量：2: 2015年; 本研究以籽粒苋根为试验材料,比较3种不同蛋白提取方法对蛋白质双向电泳的影响,并对其中的蛋白上样量和等电点聚焦时间进行了优化。结果表明:与酚抽提法和TCA-丙酮法相比,Tris-Hcl法提取籽粒苋根系蛋白效果较好;上样量800μg和聚焦时间70 000 Vh的条件下会得到理想的双向电泳图谱。采用优化后的条件,可以得到蛋白点数量多、背景清晰的双向电泳图谱,将为下一步镉胁迫下籽粒苋根系蛋白质组学研究及利用分子育种技术培育耐镉的籽粒苋新品种提供技术资料。; 晋海军秦俊丽陈惠张世熔吴琦孙蓉唐自钟; 关键词：籽粒苋蛋白提取双向电泳

四川道地中药金龙胆草叶片转录组特性研究被引量：10: 2015年; 本研究以道地药材金龙胆草叶片为研究对象,利用Illumina Hi Seq 2500高通量测序技术构建了金龙胆草转录组数据库,获得了42 903 527条Reads数据,通过与Nr、GO、COG、KOG、KEGG等数据库比对,最终获得了38 199个具有注释信息的Unigenes。其中以KEGG数据库为参考,依据代谢通路将Unigenes分成117类,包括萜类骨干合成、二萜类合成、黄酮类化合物生物合成及聚糖生物合成等路径,分别有99,23,161及70个Unigenes映射到上述途径,这些Unigenes可能参与金龙胆草主要活性成分三萜皂苷、特征成分苦蒿素、金龙胆草黄酮及金龙胆草多糖的生物合成。金龙胆草转录组测序工作的完成,极大地扩充了金龙胆草的基因资源,为药用功能基因的发掘与利用、遗传改良及有效成分含量的提高等研究奠定基础。; 孙蓉刘姗唐自钟晋海军李成磊陈惠; 关键词：金龙胆草代谢途径生物合成

共表达纤维素酶菌株发酵条件研究: 2015年; 目的:为了解决在发酵过程中酶活较低、成本高等问题,加快纤维素酶工业化生产。方法:采用PlackettBurman进行实验设计,对影响基因工程菌p ET30b-BGL产酶因素:接种量(A)、培养温度(B)、装液量(C),诱导时间(D)、初始p H(E)、IPTG诱导浓度(F)进行筛选,进行方差分析,结果表明,培养温度、初始p H和装液量对产酶有重要影响。进一步用Box-Behnken的响应面方法,对这3个因素进行优化,结果:当温度为35℃,初始p H7.5,装液量为25m L(容积为100m L),p ET30b-BGL产酶的酶活最高达到2080.5U/m L,较优化前的1196.8U/m L提高了将近一倍。结论:本研究为进一步研究纤维素酶提供了依据。; 刘默洋唐自钟晋海军孙蓉陈惠韩学易; 关键词：纤维素酶大肠杆菌发酵条件响应面分析法

DDRT-PCR技术分析籽粒苋镉胁迫下相关基因的差异表达被引量：2: 2015年; 以镉污染修复植物籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)的根、叶、果为实验材料,利用DDRT-PCR技术分析籽粒苋Cd胁迫下基因表达水平的变化。结果表明:回收差异片段获得镉处理诱导的4个差异表达序列(EST-1、EST-2、EST-3和EST-4),经Blastn比对,EST-1与土人参26S核糖体RNA基因部分序列(GB|HQ843466.1)一致性为99%,EST-2与虎耳草26S核糖体RNA大亚基基因部分序列(GB|AF036498.1)一致性为93%,EST-3与大肠杆菌菌株TW14359 DNA聚合酶Ⅲα亚基基因(ECs0186)完整CDS(GB|EU906049.1)一致性为97%,EST-4与米曲霉RIB40β-葡萄糖苷酶基因(XM_001816779.2)一致性为99%;经Blastx比对,EST-1与假定蛋白MTR_5g051030[苜蓿](XP_003614386.1)氨基酸序列相似性为26%,EST-2与假定衰老相关蛋白[柏杉](GB|ACA30301.1)氨基酸序列一致性为98%,EST-3与DNA聚合酶Ⅲα亚基[大肠杆菌OP50](ZP_06935700.1)氨基酸序列一致性为100%,EST-4与β-葡萄糖苷酶[黄曲霉NRRL3357](XP_002383240.1)氨基酸序列一致性为99%;4个差异表达基因通过调控蛋白质代谢、DNA复制和糖代谢等途径来应答镉胁迫。; 晋海军胡洪利陈惠张世熔吴琦孙蓉唐自钟; 关键词：籽粒苋镉胁迫

易错PCR技术提高中性内切葡聚糖酶活性被引量：6: 2013年; 近年来随着纤维素酶在食品加工工业中具有广阔应用前景,而纤维素酶的工业应用一直受酶活性低,成本高的限制。为了提高中性内切葡聚糖酶的活性,作者利用易错PCR技术对来自枯草芽胞杆菌（Bacillus subtilis）C-36的内切葡聚糖酶基因进行定向进化研究,构建了在大肠杆菌中的突变体库。通过刚果红平板筛选,获得了酶活性提高的突变株F-10,活力比亲本酶提高4.2倍。序列分析表明：F-10有5个碱基发生突变,两个氨基酸突变：D212V和T307S。SDSPAGE条带,表明基因表达正确,而表达量较原始菌株显著增加。酶学性质分析,表明该酶的最适反应pH为5.6,最适反应温度为45℃,在pH 4.5~10.0范围内50℃保温30 min可保持80%的剩余酶活,在60~75℃酶活力相对稳定,可保持在最高酶活的80%以上,当温度高于75℃时,酶开始变性失活,酶活力迅速下降。研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能和其应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。; 唐自钟刘姗韩学易姚友旭刘默洋陈惠晋海军吴琦单志; 关键词：枯草芽胞杆菌内切葡聚糖酶易错PCR 酶学性质

火焰原子吸收法检测籽粒苋根中镉含量影响因素的响应面优化被引量：3: 2015年; 采用响应面法优化籽粒苋(Amaranthus hypochondriacus)根中镉元素的火焰原子吸收检测条件。在单因素试验的基础上,本研究利用Design Expert V 8.0.5b软件中的Box-Benhnken试验设计,研究灯电流、狭缝宽度、乙炔/空气流量比和燃烧器高度4个因素对籽粒苋根系中镉吸光度值的影响。用响应面分析法得出最优的测定条件为:灯电流5.67 m A;狭缝宽度0.62 nm;乙炔/空气流量比0.17(1/6);燃烧器高度5.14 mm,此时的理论预测吸光度值为0.209 4。通过验证实验证实:吸光度的理论预测值与真实测定值接近,样品检测中的相对标准偏差0.94%,加标回收率在96.3%~103.7%之间,说明该检测方法重现性好,数据准确可靠。本实验将为下一步准确检测籽粒苋不同部位(根,茎,叶和果实)镉含量和筛选优良的籽粒苋耐镉新品种提供技术资料。; 晋海军徐铭键陈惠张世熔布同良唐自钟孙蓉刘默洋; 关键词：籽粒苋响应面法火焰原子吸收

热稳定性高的重组产植酸酶工程菌及其制备方法: 本发明公开了一种热稳定性高的重组产植酸酶工程菌及其制备方法，本发明采用突变菌株和经点突变改造得到的突变菌株的植酸酶工程菌为模板进行DNA改造，构建植酸酶工程菌突变体库，获得重组的基因工程菌，其酶活及热稳定性均有所提高。; 陈惠刘姗廖燕孙蓉李成磊吴琦韩学易唐自钟郑天润晋海军刘默洋杨毅; 文献传递

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