韩学易
- 作品数：35 被引量：155H指数：6
- 供职机构：四川农业大学生命科学与理学院更多>>
- 发文基金：四川省科技厅科技支撑计划项目四川省教育厅自然科学科研项目四川省科技支撑计划更多>>
- 相关领域：生物学农业科学化学工程轻工技术与工程更多>>
- 纤维素酶基因工程菌pHBM-End培养条件的研究
- 2008年
- 对基因工程菌pHBM-End培养条件优化的研究结果表明:250mL三角瓶中装入50mLLB培养基(含有10μg/mLTet),按5%的接种量接种种龄为12h的液体种子,培养4h后加入终浓度为0.2%的木糖进行诱导,9h后上清液中酶活可达889U/mL,是出发菌株C-36(79.2U/mL)的11.22倍。
- 韩学易陈惠胥兵阮景军
- 关键词：巨大芽孢杆菌内切葡聚糖酶
- 定点突变技术提高内切葡聚糖酶基因F-10酶活性被引量：4
- 2014年
- 利用高酶活F-10突变株内切葡聚糖酶基因进行定点突变,对91位(K91E)和369位(K369R)氨基酸进行突变,构建突变质粒(K91E);(K369R)和(K91E/K369R),转化大肠杆菌BL21,经筛选获得突变内切葡聚糖酶基因工程菌株K91E,K369R和K91E/K369R。经IPTG诱导后,分离纯化酶学性质分析。结果表明:蛋白质相对分子质量为53 000;突变前后最适pH值未发生变化,为pH 6.8;突变体K369R和K91E/K369R的最适温度为50℃,而突变体K91E最适温度发生了很大的变化,为40℃;酶的比活力分别为202、162.8、77.9 U/mg,分别是原始酶(66U/mg)的3.0倍,2.4倍和1.2倍;三个突变酶的热稳定性有较大提高,70℃处理1 h后,原始酶的活性急剧下降,剩余活力为12%,而K91E的剩余活力为36%,K369R剩余活力为30%,K91E/K369R剩余活力为41%。当经80℃处理1 h后,K91E残余活力仍有22%。本研究获得了酶活性提高的内切葡聚糖酶菌株,为进一步在分子水平研究内切葡聚糖酶的功能及应用打下了基础,也为高酶活酶分子在其他高表达系统的表达提供了基础材料。
- 唐自钟刘默洋李雨霏孙蓉刘姗陈惠韩学易
- 关键词：内切葡聚糖酶定点突变酶学性质
- 一种利用SCAR技术鉴别金龙胆草及其混淆品的SCAR引物及其方法
- 本发明公开了一种利用SCAR技术鉴别金龙胆草及其混淆品的SCAR引物及其方法，提取混淆品植物的基因组DNA，将样品的基因组DNA进行SCAR-PCR扩增，其SCAR-PCR扩增体系为：25μL体系中含有Mg<Sup>2+...
- 陈惠刘姗孙蓉唐自钟高静雷李成磊韩学易吴琦黄晓燕
- 文献传递
- 米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2012年
- 【目的】克隆米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因并检测其在大肠杆菌中的表达。【方法】以自行分离筛选出的天然米曲霉giF-10的基因组DNA为模板,PCR高保真扩增,扩增产物连接到pMD19-T克隆载体上,并构建原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)。【结果】序列分析表明,其长度为1 251bp,编码417个氨基酸,序列比对发现与内切葡聚糖酶基因CelB序列相似性高达100%,将此基因注册GenBank(HQ739052)。刚果红水解圈筛选结果表明已成功表达。【结论】克隆了米曲霉giF-10内切葡聚糖酶基因,并在大肠杆菌成功表达,为纤维素酶工业化生产奠定基础。
- 韩学易王春梅陈惠
- 关键词：米曲霉内切葡聚糖酶基因克隆大肠杆菌
- 角蛋白酶产生菌的分离鉴定及其kerC的克隆表达被引量：4
- 2012年
- 以四川农业大学养鸡场堆砌废弃羽毛处土壤为样品,筛选出一株具有较强降解羽毛能力的细菌B-3菌株.经形态学、生理生化特性和16S rRNA基因序列分析,鉴定其为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis),命名为枯草芽孢杆菌B-3.并成功克隆到该菌株的角蛋白酶基因kerC(GenBank No.:JN021789),在大肠杆菌BL21(Escherichia coli BL21)中获得了高效表达.该基因全长1146bp,GC含量46.5%,编码381个氨基酸,与已报道的枯草芽孢杆菌YYW-1的kerC基因(GenBank No.:EU362730)同源性达到100%.重组菌株经IPTG诱导后角蛋白酶酶活力达14.8U/mL,经His-Tag纯化和SDS-PAGE分析表明,重组角蛋白酶分子量约为60kDa(融合了硫氧还蛋白,Trx).重组角蛋白酶最适反应温度和pH值分别为65℃与7.0.
- 侯晟琦王丽华赖欣陈惠吴琦韩学易
- 关键词：角蛋白酶原核表达HIS-TAG
- 产β-葡萄糖苷酶真菌的筛选鉴定、纯化及酶学性质分析被引量：20
- 2013年
- 经刚果红平板染色法从土样中筛选到3株产纤维素酶的真菌,通过对其β-葡萄糖苷酶活力的测定,选择一株相对活力较高的菌株进行菌种鉴定。在形态鉴定的基础上,通过内转录间隔区(ITS)序列构建系统发育树初步鉴定为米曲霉(Aspergillus oryzae),命名为giF-10。对米曲霉giF-10进行摇瓶发酵,经硫酸铵沉淀、Sephadex G-100凝胶层析、DEAE Cellulose 52离子交换层析进行纯化。得到纯化后的β-葡萄糖苷酶,比活力为40.84U/mg,分子质量约90kD;该β-葡萄糖苷酶最适温度为55℃;在30～50℃之间热稳定性好;最适pH值为4.5;pH4.0～6.0稳定性好;金属离子对酶活力具有一定的影响,Mn2+对酶具有较强的激活作用;Fe3+和Cu2+对β-葡萄糖苷酶活力有较强的抑制作用;该酶对水杨素和纤维二糖具有较强的底物特异性;β-葡萄糖苷酶对水杨素的动力学参数:Km为0.676mmol/L;对纤维二糖的动力学参数为:Km为2.906mmol/L。
- 陈静郝伟伟王春梅陈惠吴琦韩学易
- 关键词：米曲霉Β-葡萄糖苷酶纯化酶学性质
- 产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2014年
- 【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。
- 唐自钟刘姗韩学易晋海军陈惠刘默洋单志吴琦
- 关键词：毕赤酵母菌种鉴定
- 枯草芽孢杆菌纤维素酶产酶条件及酶学性质研究
- 以实验室自行筛选的一株产纤维素酶枯草芽孢杆菌C-36为研究对象，从碳源、氮源、接种量、培养基初始pH值、温度、培养时间几方面研究该菌株的产酶条件，结果表明该菌产酶的最适碳源为2％的CMC-Na，最适氮源为2.5％的蛋白胨...
- 韩学易
- 关键词：纤维素酶枯草芽孢杆菌产酶条件分离纯化酶学性质
- 文献传递
- 饲用木聚糖酶菌株的筛选及鉴定被引量：2
- 2010年
- 利用刚果红透明圈法,从采集的土样中筛选分离一株产木聚糖酶的菌株,根据其形态学和生理生化特征,结合16 SrDNA分子水平分析,鉴定该菌为短小芽孢杆菌。摇瓶发酵粗酶液的性质测定表明,该菌株酶活力可达132.53 IU/mL。
- 韩学易龚旭梅陈惠
- 关键词：木聚糖酶芽孢杆菌
- 促进载体和插入片段连接的方法
- 本发明公开了载体和插入片段连接的方法，包括如下步骤：(1)使用限制性内切酶处理插入片段，然后使用碱性磷酸酶处理酶切片段；(2)使用相应的限制性内切酶处理载体；(3)酶切载体以及碱性磷酸酶处理的插入片段通过DNA连接酶连接...
- 陈惠王德华廖燕吴琦韩学易单志唐自钟
- 文献传递
