陈惠
- 作品数：160 被引量：947H指数：17
- 供职机构：四川农业大学生命科学与理学院更多>>
- 发文基金：四川省科技攻关计划国家科技重大专项四川省应用基础研究计划项目更多>>
- 相关领域：生物学农业科学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 产外切葡聚糖酶真菌的筛选鉴定及毕赤酵母中的表达被引量：8
- 2014年
- 【目的】外切葡聚糖酶是纤维素酶组分中一类对结晶纤维素有降解作用的酶类,如何提高外切葡聚糖酶活力是研究的关键问题。【方法】从筛选鉴定得到的一株产外切葡聚糖酶酶活较高的黑曲霉Asp-524菌株出发,通过PCR技术克隆得到外切葡聚糖酶基因序列,生物学信息分析后,构建了毕赤酵母诱导型表达载体,实现了该基因在毕赤酵母中的成功表达。【结果】抗性筛选得到的阳性转化子,用终浓度为1%甲醇诱导5 d后,酶活达到4.74 U/mL。酶学性质分析显示重组外切葡聚糖酶最适pH为5.0,pH稳定性分析显示在pH为4.0-6.0范围内相对稳定,酶活能保持在最高酶活力的80%以上,最适反应温度为50°C,经60°C保温1 h后,酶活仍能保持80%以上。【结论】结果说明该外切葡聚糖酶具有较好的热稳定性和pH稳定性,这一研究为纤维素酶的实际应用奠定了一定基础。
- 唐自钟刘姗韩学易晋海军陈惠刘默洋单志吴琦
- 关键词：毕赤酵母菌种鉴定
- 籽粒苋根系蛋白的提取与双向电泳体系的建立被引量：2
- 2015年
- 本研究以籽粒苋根为试验材料,比较3种不同蛋白提取方法对蛋白质双向电泳的影响,并对其中的蛋白上样量和等电点聚焦时间进行了优化。结果表明:与酚抽提法和TCA-丙酮法相比,Tris-Hcl法提取籽粒苋根系蛋白效果较好;上样量800μg和聚焦时间70 000 Vh的条件下会得到理想的双向电泳图谱。采用优化后的条件,可以得到蛋白点数量多、背景清晰的双向电泳图谱,将为下一步镉胁迫下籽粒苋根系蛋白质组学研究及利用分子育种技术培育耐镉的籽粒苋新品种提供技术资料。
- 晋海军秦俊丽陈惠张世熔吴琦孙蓉唐自钟
- 关键词：籽粒苋蛋白提取双向电泳
- 苦荞类异黄酮还原酶基因(FtIRL)的克隆及序列分析被引量：3
- 2012年
- 利用RT-PCR技术,从苦荞(Fagopyrum tatarium)中克隆得到类异黄酮还原酶基因(IRL)的开放阅读框序列(ORF),命名为FtIRL。序列分析表明:FtIRL含一个长942bp的ORF,编码313个氨基酸,其氨基酸序列与金荞异黄酮还原酶FcIFR(GenBank登录号ABV02071)同源性最高,达到97%;与其他植物IRL同源性为44%～73%。生物信息学分析表明:FtIRL推导的蛋白质含有典型的底物结合口袋和保守的NADPH结合位点,符合短链脱氢酶家族的结构特征。构建基于氨基酸的系统发育树表明,苦荞FcIFR虽然在氨基酸序列上与其他植物的异黄酮还原酶(IFR)有较高的同源性,但其生物学功能可能更接近落叶松脂醇还原酶(PLR)。
- 赵海霞李成磊白悦辰陈惠吴琦
- 关键词：苦荞基因克隆
- 一种金龙胆草染色体制片的方法
- 本发明提供一种金龙胆草染色体制片的方法,包括以下步骤：(1)于下午5点至7点之间采集金龙胆草幼苗根尖1cm，于3～5℃下用饱和对二氯苯浸泡幼苗根尖3～5h；(2)将浸泡好的根尖依次用90％乙醇、清水漂洗，再用卡诺氏液固定...
- 陈惠郑天润孙文君詹俊义汪茂佳金露萍刘默洋马招堂金伟琼张彦君
- 文献传递
- 角蛋白酶kerC基因的克隆及序列分析被引量：6
- 2017年
- 为克隆分析角蛋白酶ker C基因,本研究以羽毛为底物从11株实验室保存的芽孢杆菌中筛选角蛋白酶产生菌。得到了一株具有高效降解羽毛能力的枯草芽孢杆菌BS10,该菌株3 d即可降解一根完整的羽毛,以羽毛粉、天青角蛋白为底物测定其酶活力,分别达(1.88±0.10)U/mL、(1.79±0.49)U/mL。以同源克隆的方法克隆ker C基因,获得了一条全长1 149 bp的kerC基因(Gen Bank登录号:KX108888),编码383个氨基酸。利用BLAST、ProtParm、SOPMA和MEGA等生物信息学工具对其理化性质、二级结构及系统进化树等进行分析,发现其与NCBI中的角蛋白酶基因相似性达到85%;相对分子质量为39.095 kD,等电点为9.23;该基因蛋白为亲水性蛋白;系统进化树分析结果与菌株信息相吻合。羽毛降解菌的获得可促进废弃羽毛资源化利用;角蛋白酶基因的获得及其分子特征的分析,为进一步通过基因工程手段提高角蛋白酶活性提供了一定的理论依据。
- 孙蓉何周凤陈惠唐自钟布同良
- 关键词：角蛋白酶枯草芽孢杆菌基因克隆
- 植酸酶phyA^m基因结构延伸突变改善酶的热稳定性被引量：13
- 2005年
- 将来源于黑曲霉N25的植酸酶基因phyAm重组于大肠杆菌表达载体pET30b(+),以重组表达载体pET30bFphyAm为模板经PCR扩增获得结构延伸突变植酸酶基因phyAe(在植酸酶基因C端增加了来源于pET30bFphyAm载体上13氨基酸残基)。含突变基因的重组表达载体pPIC9kphyAe在GS115酵母中表达。纯化的突变酶PPNPe与野生型酶PPNPm8相比:PPNPAe的最适反应温度上升了3℃,75℃处理10min,热稳定性提高21%,比活力略有提高。最适反应pH为5.6,有效pH范围pH4.6到pH6.6。比未突变酶扩大了0.4单位。
- 陈惠王红宁杨婉身赵海霞吴琦单志
- 关键词：植酸酶毕赤酵母热稳定性
- 植酸酶基因中稀有密码子的改造提高其在毕赤酵母中的表达量被引量：30
- 2005年
- 对来源于黑曲霉N2 5(AspergillusnigerChinaStrain)的植酸酶基因phyA进行PCR介导的定点突变 ,不改变其所编码氨基酸 ,选用毕赤酵母偏爱的密码子对该基因保守序列中第 81位和第 85位的Arg密码子进行同义突变 .构建了含正确突变的克隆载体pUC18 phyAm 和酵母表达载体pPIC9k phyAm,电击转化毕赤酵母 ,经MM、MD平板筛选和产物的酶活性测定 ,筛选出突变与未突变高酶活酵母转化子各 2株 .这 4株转化子的Southern印迹结果表明 ,phyA基因以单交换方式单拷贝整合到酵母染色体DNA中 .表达产物的SDS PAGE分析表明 ,重组酵母中的植酸酶能有效分泌和表达 ,蛋白质分子大小为 70 15kD .转化子酶活测定结果表明 ,经密码子优化的突变重组酵母酶活力明显高于未进行优化的重组酵母转化子 .经密码子优化的突变重组酵母株PP NPm 8于麦芽汁培养基中诱导 36h后酶活力可达 4 76 0 0U/ml,其活力比未优化重组酵母株PP NP 2 (2 36 6 7U/ml)提高了约 1倍 ,且重组转化子遗传稳定性良好 .
- 陈惠赵海霞王红宁杨婉身吴琦倪燕
- 关键词：黑曲霉植酸酶PHYA基因定点突变毕赤酵母
- 内切葡聚糖酶基因在巨大芽孢杆菌中的表达及其酶学性质研究被引量：18
- 2008年
- 通过PCR方法将已克隆的内切葡聚糖酶基因(GenBank No.DQ782954)信号肽编码序列去除,然后与表达载体pHIS1525连接后转化大肠杆菌DH5α,筛选出阳性转化子DH5α-pHIS1525-G7并提取质粒进一步转化巨大芽孢杆菌WH320原生质体,获得基因工程菌WH320-pHIS1525-G7。刚果红染色和SDS-PAGE分析表明该基因在巨大芽孢杆菌中得到了有效表达。基因工程菌经优化培养后,胞外上清液中的酶活力可达889U,是出发菌株(即枯草芽孢杆菌C-36)的11.22倍。酶学性质研究表明:该酶的最适反应温度与pH值分别为65℃与pH6.0,在pH4.5～10.0范围内50℃保温30min可保持在最高酶活的80%以上。
- 陈惠胥兵廖俊华官兴颖吴琦
- 关键词：巨大芽孢杆菌内切葡聚糖酶基因表达酶学性质
- 苦荞和甜荞二氢黄酮醇4-还原酶基因(dfr)的克隆及序列分析被引量：8
- 2010年
- 采用同源基因克隆的方法,以苦荞和甜荞叶片为材料,提取总RNA,经RT-PCR扩增获得其二氢黄酮醇4-还原酶基因(dfr)cDNA序列,并通过T载体克隆后测序。序列分析表明,获得了苦荞和甜荞dfr的全长cDNA编码序列,其1026bp的全长开放阅读框(ORF)均编码341个氨基酸,并具典型的dfr结构特征和功能模块。同源性分析显示,苦荞和甜荞与其他植物的dfr基因核苷酸相似性为71%～98%;根据氨基酸序列构建系统进化树表明,二者与豆科、桑科和蔷薇科聚为一类。
- 祝婷李成磊吴琦蒙华陈惠邵继荣
- 关键词：苦荞甜荞克隆
- 荞麦中的蛋白质被引量：10
- 2008年
- 荞麦蛋白质因其富含赖氨酸而具有很高的营养价值,可能由于含有单宁、植酸和蛋白酶抑制剂,而使得荞麦蛋白质具有很低的消化率,而蛋白酶抑制剂还可能导致人的过敏反应。发芽可以提高荞麦蛋白质的可消化率、营养价值、生理功能而提高荞麦蛋白质的营养水平和功能特性。本文主要讨论了荞麦蛋白质的含量、结构、组成、营养价值、功能特性、生理功能和加工特性,并指出荞麦蛋白质作为一种药食兼用的天然活性成分,具有广泛的应用前景。
- 阮景军陈惠吴琦邵继荣杨婉身
- 关键词：荞麦蛋白质
