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张杰林
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新乡医学院
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相关领域:
医药卫生
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合作作者
金壮
新乡医学院
程远
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李多多
新乡医学院第一附属医院
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巨细胞病毒临床分离株感染血管内皮细胞伴肾素基因表达
2009年
目的探讨巨细胞病毒(Cytomegalovirus,CMV)是否感染血管内皮细胞伴肾素表达。方法①用10^7pfu(空斑形成单位)/mLCMV临床分离株BI-5和实验室型CMVA D169分别与10^6腹主动脉内度细胞和人脐静脉内皮细胞共同孵育,在23h后、d3、d7、d10和d14分别收集培养上清200μL,d14用PBS缓冲液洗细胞3次,收获细胞。每组实验均设培养液代替病毒液的无感染对照;②COBAS定量PCR检测培养上清中CMV DNA拷贝数;③PCR检测感染细胞中CMVpol基因;@RT-PCR、Real time RT-PCR和Western blot检测肾素在感染细胞内的表达。结果①BI-5和AD169感染静脉和动脉细胞后,其形态学变化相似,无细胞裂解病理效应;②AD169感染细胞不同时间培养上清中CMVDNA拷贝数无明显增加,BI-5呈增殖趋势;③BI-5感染动脉细胞CMVDNA拷贝数和肾素表达量均大于静脉细胞。结论临床分离株CMV以非裂解形式在血管内皮细胞持续存在并诱导肾素基因表达,血管内皮细胞分泌肾素可能是CMV感染引起心血管疾病的新机制。
李多多
程远
程计林
程新
刘宝玲
王海滨
金壮
张杰林
Crumpacker Clyde
关键词:
巨细胞病毒
血管内皮细胞
肾素
巨细胞病毒感染对细胞肾素基因表达的影响及其生物学意义
2009年
目的探讨巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)感染肾球旁细胞肾素基因表达的变化及其意义。方法用病毒感染复数(MOI)为10、0.1和0的鼠CMV分别与鼠肾球旁细胞模型As4.1细胞共育5d作为实验组;用紫外线灭活病毒的假感染(mock感染)对照组。RT—PCR检测感染细胞中CMV即刻早期基因1(IE1)的表达;免疫荧光观察肾素阳性细胞和肾素阳性颗粒在细胞的分布;双色免疫荧光染色观察肾素阳性颗粒是否出现在CMV阳性细胞;RT—PCR和Westernblot检测。肾素基因在感染细胞内的表达。结果CMV感染As4.1细胞后出现典型的病毒空斑;病毒感染细胞CMV IE RT—PCR产物阳性;肾素阳性细胞集中在病毒空斑周围CMV新感染细胞区,肾素阳性荧光颗粒主要以块状和环状存在于病毒感染细胞质中;双色免疫荧光染色显示肾素阳性颗粒和CMV阳性颗粒出现在同一细胞;CMV感染细胞肾素基因的表达随病毒感染量增加而增加。结论CMV感染并导致其宿主细胞肾素基因表达,可能涉及CMV加速心血管疾病发生发展的新机制。
李多多
程远
程计林
程新
刘宝玲
王海滨
金壮
张杰林
Crumpacker Clyde
关键词:
巨细胞病毒
肾素
生物学
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