左绍志
- 作品数：7 被引量：12H指数：3
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- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1的原核表达及鉴定被引量：4
- 2014年
- 目的原核表达旋毛虫与肝癌细胞相关基因CK-1,并进行鉴定。方法以旋毛虫cDNA为模板,PCR扩增CK-1基因,克隆至原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-CK-1,转化感受态大肠埃希菌(E.coli)BL21(DE3),IPTG分别诱导表达3、4、5 h,表达产物进行12%SDS-PAGE分析。以纯化的旋毛虫肌幼虫免疫小鼠制备鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清,以H7402细胞免疫小鼠制备鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清,以重组CK-1蛋白免疫小鼠制备鼠抗CK-1蛋白阳性血清,分别以其作为一抗,进行Western blot鉴定。结果重组表达质粒pET-28a(+)-CK-1经双酶切及测序鉴定证明构建正确;IPTG最佳诱导时间为4 h,表达的重组CK-1蛋白以包涵体形式存在,表达量占菌体总蛋白的37.5%;重组CK-1蛋白可被鼠抗旋毛虫肌幼虫阳性血清和鼠抗H7402全细胞蛋白阳性血清识别,鼠抗CK-1蛋白阳性血清可识别旋毛虫肌幼虫蛋白和H7402全细胞蛋白,在相对分子质量38 500处均可见特异性条带,表明重组CK-1蛋白是一个交叉抗原,且具有良好的反应原性。结论原核表达了旋毛虫CK-1基因,为进一步研究旋毛虫的抗肿瘤效应奠定了基础。
- 左绍志张桐嘉常乐杨滨僮宫鹏涛李建华杨举李赫张国才张西臣
- 关键词：旋毛虫肝癌细胞原核细胞
- 旋毛虫与乳腺癌相关抗原基因TS498抗体制备方法
- 本发明提供了旋毛虫与MCF-7乳腺癌相关抗原基因TS498抗体制备方法，分别制备旋毛虫和MCF-7乳腺癌细胞的抗血清，利用间接ELISA方法确定肿瘤细胞抗原与旋毛虫阳性血清、旋毛虫抗原与肿瘤细胞阳性血清间是否存在相关抗原...
- 张西臣李建华任保彦宫鹏涛杨举张国才张楠左绍志李赫陈玉江
- 文献传递
- 旋毛虫与H7402肝癌细胞相关抗原单克隆抗体抗肿瘤效应研究
- 旋毛虫(Trichinella spiralis)，是袋形动物门(Aschelminthes)、线虫纲(Nematoda)的寄生线虫，能够感染包括人在内的多种哺乳动物。已有研究表明旋毛虫对肿瘤具有抑制作用。本实验室前期研...
- 左绍志
- 关键词：旋毛虫免疫筛选单克隆抗体抗肿瘤效应
- 文献传递
- 刚地弓形虫RH株SAG3蛋白抗体检测的ELISA方法建立
- 马亮任保彦宫鹏涛左绍志李建华张国才张西臣
- 与乳腺癌细胞MCF-7相关的旋毛虫TS498基因的克隆与表达被引量：5
- 2012年
- 目的克隆与乳腺癌MCF-7细胞相关的旋毛虫TS498基因,并进行原核表达。方法从含TS498基因的噬菌体文库中PCR扩增TS498基因,亚克隆入原核表达载体pET-28a(+)中,构建重组表达质粒pET-28a-TS498,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDS-PAGE和Western blot分析表达产物。结果扩增的旋毛虫TS498基因与GenBank中登录的基因序列同源性为100%,重组表达质粒pET-28a-TS498经双酶切和测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约23 000,表达量约占菌体总蛋白的20%,能够被兔抗旋毛虫肌幼虫阳性血清识别。结论成功克隆并在大肠杆菌中表达了与MCF-7细胞相关的旋毛虫TS498基因,为进一步研究其特性和功能奠定了基础。
- 任保彦左绍志高江明付成福张旭宫鹏涛李建华张西臣
- 关键词：旋毛虫克隆原核细胞基因表达乳腺癌
- 刚地弓形虫RH株SAG3蛋白抗体检测的ELISA方法建立被引量：2
- 2012年
- [目的]利用纯化的刚地弓形虫RH株表面蛋白SAG3的原核重组蛋白为基础,建立抗体间接ELISA检测方法。[方法]采用棋盘滴定法,确定间接ELISA的最佳条件。采用鼠抗新孢子虫阳性血清、鼠抗安氏隐孢子虫阳性血清、鼠抗柔嫩艾美尔球虫阳性血清、鼠抗蓝氏贾第虫阳性血清以及鼠抗微小隐孢子虫阳性血清和健康小鼠阴性血清作对照,检测血清之间是否有交叉反应。[结果]最佳包被条件为:抗原包被浓度0.25μg/孔,被检血清稀释度1∶400,酶标二抗稀释度1∶3 000,封闭剂5%脱脂奶粉的PBST溶液;血清之间没有交叉反应。该方法的灵敏度为1∶1 600。[结论]该方法灵敏度高,特异性较强,可重复性较好,可用于对弓形虫感染的检测及流行病学调查。
- 马亮任保彦左绍志宫鹏涛李建华张国才杨举张西臣
- 关键词：刚地弓形虫表面蛋白间接ELISA
- 肺癌细胞A549抗原相关旋毛虫Tsp06172基因的克隆及原核表达被引量：3
- 2013年
- 目的克隆旋毛虫(Trichinella spiralis)与肺癌细胞A549相关抗原Tsp06172基因,并进行原核表达。方法采用RT-PCR方法扩增Tsp06172基因,连接原核表达载体pET-28a,转化入感受态细胞BL21,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot鉴定表达产物。结果重组表达质粒经双酶切及测序鉴定正确。表达分子质量单位约为16ku的融合蛋白。Western blot检测融合蛋白能被抗A549细胞的多克隆抗体识别。结论构建的原核表达载体pET-28a-Tsp06172表达具有A549细胞反应原性的蛋白,为旋毛虫Tsp06172重组蛋白功能的研究了奠定基础。
- 高江明徐晓芳吕萌左绍志宫鹏涛杨举李赫李建华张国才张西臣
- 关键词：旋毛虫原核表达肺癌细胞A549
