周侠
- 作品数：7 被引量：17H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺炎链球菌pbp2b和pbp1a基因突变与青霉素耐药的相关性研究被引量：8
- 2010年
- 目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(M IC),套式聚合酶链反应(nPCR)扩增pbp2b和pbp1 a基因,扩增产物直接DNA测序,所测序列与青霉素敏感株(SPN R6)的基因序列进行比较,并分析其氨基酸结构的改变。结果 163株肺炎链球菌中检出青霉素敏感菌75株,中度敏感17株,青霉素耐药菌71株(44%)。耐药菌中58株存在pbp2b突变(81.7%),其中,56株为点突变,2株为CCT插入突变;在27株有pbp2b基因突变的B型和C型耐药菌中,21株出现了不同程度的pbp1 a基因突变。PBP2B氨基酸结构改变以苏氨酸变为丙氨酸、精氨酸变为赖氨酸为主,PBP1A以丙氨酸变为苏氨酸、谷氨酸变为天门冬氨酸为主。结论肺炎链球菌的pbp2b和pbp1 a基因突变与对青霉素的耐药性密切相关,PBP2b突变导致低水平耐药;PBP2b和PBP1A突变导致高水平耐药。
- 周侠杨致邦栗俊杰栗俊杰苏善平于拽拽
- 关键词：肺炎链球菌突变
- 肺炎链球菌phps突变后引起耐药的机制研究进展
- 2006年
- 肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)是常见的引起化脓性感染的病原菌.该菌的第一次被记载为"双球菌的轻微延伸"是在1870年,命名肺炎双球菌.直到1881年,Louis Pasteur(France)和George Sternberg(United States)才从人痰中鉴定出该菌,现归入链球菌属,更名为肺炎链球菌.S.pneumoniae是导致各种年龄的社区获得性肺炎的最主要的病原菌,同时还是引起成人中耳炎、急性鼻窦炎、脑膜炎和慢性阻塞性肺病恶化的主要病原菌[1].该菌的致病率和致死率主要由两个方面的因素决定:即由荚膜构成的侵袭力和在治疗过程中细菌对抗生素的耐受力.据WHO报道,全球范围内每年有超过100万的五岁以下儿童因感染肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae)而死亡[1],严重威胁着人们的健康.同时,S.pneumoniae的耐药情况越来越严重,并且还有逐年上升的趋势.本文就目前国内外对该菌在耐药性方面的研究综述如下:……
- 周侠杨致邦
- 幽门螺杆菌vacA-ctxB融合基因原核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)致细胞空泡毒素抗原(Vacuolating cytotoxin antigen A,vacA)毒性片段与霍乱毒素(Cholerae toxin,Ctx)B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,为进一步表达VCTB重组蛋白,制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础。方法:通过比较国内H.pylori代表株的vacA基因毒性亚单位,找出高度同源性片段,按基因文库中提供的vacA基因和ctxB基因序列设计引物。以H.pylori基因组DNA为模板,PCR扩增vacA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA。以pET32(α)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因。再将纯化的ctxB基因片段插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB,构建的表达质粒pQE-vctB转化大肠杆菌Top10,培养后,提取纯化重组质粒pQE-vctB,内切酶双酶切鉴定。结果:扩增的vacA DNA片段约为723bp,ctxB基因的DNA片段约为372bp,与预计长度相符合。构建的表达质粒pQE-vctB酶切鉴定,与插入pQE30的目的基因片段相符。测序结果vctB融合基因由1092bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符。结论:含vacA和ctxB融合基因的原核表达载体构建成功,为进一步表达VCTB重组蛋白奠定了基础。
- 张任飞杨致邦周侠夏丽君李昌庆陈瀑
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素霍乱毒素B亚单位
- 幽门螺杆菌HpaA重组蛋白的表达及免疫效果检测被引量：3
- 2008年
- 目的表达幽门螺杆菌hpaA基因的重组蛋白,并检测其抗原性和免疫原性。方法用PCR方法从H.pylori DNA中扩增hpaA基因片段,插入原核表达载体pQE-30,转化大肠杆菌DH5α,进行诱导表达,SDS-PAGE分析表达蛋白的相对分子质量和表达形式,Ni2+-NTA树脂纯化后,用Westernblot鉴定其反应原性。用重组蛋白免疫家兔,检测其免疫原性。用重组蛋白免疫小鼠,分别检测胃黏膜、PP细胞悬液及小肠黏液中的IgG和sIgA的含量。结果重组表达质粒pQE30-hpaA构建正确,所得序列完整,插入的基因片段全长783bp,与基因文库中的hpaA基因同源性达97.3%。表达产物相对分子质量为30000,目的蛋白表达量占全菌总量的31.67%,主要存在于碎菌后上清中,纯度在90%以上。Westernblot显示该蛋白可与病人血清特异性结合,免疫血清能与重组蛋白反应,双扩散效价为1:16。小鼠体内IgG、IgA、sIgA含量明显高于PBS对照组。结论已获得高纯度的HpaA重组蛋白,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于研制幽门螺杆菌疫苗。
- 栗俊杰杨致邦张任飞周侠夏丽君
- 关键词：幽门螺杆菌免疫效果
- 肺炎链球菌pbp1a基因重组原核表达质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定。方法化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a,转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性;SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达。结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变;青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合。结论成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础。
- 周侠唐紫薇杨致邦蒋仁举熊玉霞于拽拽
- 关键词：肺炎链球菌原核细胞基因表达耐药性
- pbp1a基因与肺炎链球菌对青霉素耐药的关系探讨
- 目的： 探讨pbpla和pbp2b基因突变与肺炎链球菌对青霉素耐药的关系，进一步阐明肺炎链球菌耐药性变异的机制。探讨从基因水平解决肺炎链球菌耐青霉素等β-Lactam类抗生素变异的途径，为临床防治耐青霉素类抗生素的肺炎链...
- 周侠
- 关键词：肺炎链球菌青霉素耐药性
- 文献传递
- 青霉素结合蛋白PBP1a的克隆表达和对肺炎链球菌耐药性的影响被引量：4
- 2012年
- 目的克隆并表达肺炎链球菌青霉素结合蛋白PBP1a,探讨其对青霉素耐药的影响。方法化学合成肺炎链球菌含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后进行1.0%琼脂糖凝胶电泳鉴定。将扩增的pbp1a基因连接pUC19载体,构建重组质粒pUC19-pbp1a,转化DH5α,PCR扩增后进行1.5%琼脂糖电泳分析和DNA测序鉴定。将pUC19-pbp1a转化对青霉素敏感、中度敏感和耐药,并存在不同的pbp1a、pbp2b突变的肺炎链球菌,SDS-PAGE分析PBP1a的表达,并测定青霉素对转化菌的MIC。结果 pbp1a基因扩增产物经琼脂糖凝胶电泳为330bp,大小与预期一致。重组质粒基因全长为360bp,扩增产物约330bp,测序无碱基缺失、插入等突变。重组质粒转化存在不同的pbp1a、pbp2b突变和对青霉素不同敏感性的肺炎链球菌后,大量表达约110ku蛋白,其中对青霉素敏感和中度敏感的无pbp1a突变株MIC无变化,对中度敏感菌中的pbp1a突变株MIC略有变化,对存在pbp1a突变的耐药菌株MIC显著降低(P<0.01)。结论在肺炎链球菌中成功表达了青霉素结合蛋白PBP1a,可使其对青霉素的耐药性显著降低。
- 潘玲周侠杨致邦邓西川
- 关键词：肺炎链球菌克隆表达耐药性
