熊玉霞
- 作品数：9 被引量：13H指数：1
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院病原生物学教研室更多>>
- 发文基金：海口市重点科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 肺炎链球菌pbp2b和pbp1a基因突变与青霉素耐药的相关性研究被引量：8
- 2010年
- 目的探讨耐青霉素肺炎链球菌pbp2b和pbp1 a基因的突变与青霉素耐药的关系,为明了肺炎链球菌的耐药性变异机制,防治其感染提供实验依据。方法从呼吸道感染患儿痰标本中分离肺炎链球菌163株,液体培养基连续稀释法测定其对青霉素的最小抑菌浓度(M IC),套式聚合酶链反应(nPCR)扩增pbp2b和pbp1 a基因,扩增产物直接DNA测序,所测序列与青霉素敏感株(SPN R6)的基因序列进行比较,并分析其氨基酸结构的改变。结果 163株肺炎链球菌中检出青霉素敏感菌75株,中度敏感17株,青霉素耐药菌71株(44%)。耐药菌中58株存在pbp2b突变(81.7%),其中,56株为点突变,2株为CCT插入突变;在27株有pbp2b基因突变的B型和C型耐药菌中,21株出现了不同程度的pbp1 a基因突变。PBP2B氨基酸结构改变以苏氨酸变为丙氨酸、精氨酸变为赖氨酸为主,PBP1A以丙氨酸变为苏氨酸、谷氨酸变为天门冬氨酸为主。结论肺炎链球菌的pbp2b和pbp1 a基因突变与对青霉素的耐药性密切相关,PBP2b突变导致低水平耐药;PBP2b和PBP1A突变导致高水平耐药。
- 周侠杨致邦栗俊杰栗俊杰苏善平于拽拽
- 关键词：肺炎链球菌突变
- 分支杆菌噬菌体D29裂解酶gp10的克隆表达及抗菌活性鉴定
- 研究目的：克隆表达分支杆菌噬菌体D29裂解酶gp10，观察该重组裂解酶对脓肿分支杆菌等多重耐药菌的抑菌作用，为开发治疗多重耐药菌感染的药物打下基础。
方法：以噬菌体D29基因组DNA为模板，用PCR扩增gp10基因...
- 熊玉霞
- 关键词：分支杆菌裂解酶克隆表达脓肿表达蛋白
- 脓肿分支枝杆菌embB基因耐乙胺丁醇的分析被引量：1
- 2012年
- 目的分析脓肿分支枝杆菌的embB基因,以探讨其耐乙胺丁醇的分子机制。方法用16S rRNA基因序列分析法鉴定5株脓肿分枝杆菌临床株,测定乙胺丁醇对临床株及标准株(ATCC 19977)的最低抑菌浓度(MIC)。PCR扩增embB基因的全序列,将所测序列进行生物信息学分析。结果乙胺丁醇对5株脓肿分支杆菌标准株和临床株的MIC均为128μg/mL,属高度耐药。从脓肿分支枝杆菌的标准株和临床株均扩增出约3 200 bp片段,与GenBank中脓肿分支枝杆菌标准株的embB基因大小一致。5株临床株与标准株比较,其核苷酸序列存在9个点突变,在突变位点所编码的氨基酸序列中,仅第18位、87位、770位密码子编码与标准株不同的氨基酸。6株脓肿分支枝杆菌的embB基因与对EMB敏感的结核分支杆菌标准株(H37RV)的相应基因序列比较,第303-305位密码子的核苷酸序列存在差异,但仅第303、304位核苷酸编码的氨基酸序列不同,第306位密码子的核苷酸序列无差异。结论脓肿分支杆菌对乙胺丁醇的耐药并非embB基因的突变所致,为embB基因天然存在结构的不同,属于天然耐药。结构的差异与第306位密码子无关,可能与第303、304密码子有关。
- 吴正吉杨致邦于拽拽熊玉霞张渝成邓西川
- 关键词：乙胺丁醇耐药性EMBB基因
- 肺炎链球菌pbp1a基因重组原核表达质粒的构建与鉴定被引量：1
- 2012年
- 目的构建肺炎链球菌(Streptococcus pneumoniae,S.pneumoniae)pbp1a基因重组的原核表达质粒,并进行鉴定。方法化学合成S.pneumoniae含STMK区的pbp1a基因片段,PCR扩增后,与pUC19载体连接,构建重组表达质粒pUC19-pbp1a,转化耐青霉素的pbp1a基因突变的S.pneumoniae,测定青霉素对转化菌的最低抑菌浓度(Minimum inhibitory concentration,MIC),以鉴定PBP1a的活性;SDS-PAGE和Western blot分析重组PBP1a蛋白的表达。结果 pbp1a基因扩增产物可见约330 bp的特异条带,大小与预期一致,测序表明重组质粒全长360 bp,无碱基的缺失、插入等突变;青霉素对转化菌的MIC从8μg/ml下降为2μg/ml;表达的重组PBP1a蛋白相对分子质量约为11 000,可与抗S.pneumoniae青霉素敏感株兔血清特异性结合。结论成功构建了S.pneumoniae pbp1a基因重组原核表达质粒,其能在S.pneumoniae中表达有活性的PBP1a蛋白,为进一步研究PBPs在细菌耐药变异中的作用提供了实验材料,也为进一步探讨消除细菌耐药性变异的措施奠定了基础。
- 周侠唐紫薇杨致邦蒋仁举熊玉霞于拽拽
- 关键词：肺炎链球菌原核细胞基因表达耐药性
- 具有高效降解地塞米松能力的伯克霍尔德菌CQ001株的分离及功能基因组学分析被引量：1
- 2017年
- 目的研究细菌对地塞米松类甾体激素的降解作用及其分子机制,为构建清除水环境医源性地塞米松类药物污染的工程菌奠定基础。方法采用富集培养法从医院废水中分离降解地塞米松的细菌,采用固相萃取-高效液相色谱(HPLC)法检测细菌对地塞米松的降解效能,通过16S r DNA序列测定进行鉴定。用Illumina Hiseq4000结合第三代测序技术对降解菌的全基因组测序,并进行序列组装、注释和分析,对降解地塞米松相关基因进行RT-q PCR验证。结果分离到1株对地塞米松有较高降解作用的细菌,经鉴定属于伯克霍尔德菌属(Burkholderia),命名为Burkholderia sp.CQ001。该菌对地塞米松磷酸钠及地塞米松的降解率分别为84.8%和77.11%。全基因组测序表明Burkholderia sp.CQ001包含2条染色体和4个巨型质粒,与代谢相关基因大部分集中在2号染色体上,共3 260 157 bp。生物信息学分析表明,该菌含有甾体代谢通路中许多重要酶类的编码基因,其中与地塞米松降解相关的有ABC转运子,3-甾酮-9α-脱氢酶等,这些基因在以地塞米松磷酸钠为碳源的培养条件下表达量不同程度地高于以蔗糖为碳源的培养条件。结论 Burkholderia sp.CQ001是一株具有强大的代谢功能和代谢途径丰富的细菌,具有降解地塞米松类甾体激素的性能,该菌株为后续研究甾体激素的降解机制和构建清除水环境医源性地塞米松类药物污染的工程菌提供了菌种。
- 斯丹杨致邦蒋任举张进熊玉霞马廉举王毅
- 关键词：地塞米松降解全基因组
- 分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10的原核表达及抗脓肿分枝杆菌活性被引量：1
- 2011年
- 目的克隆并原核表达分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10基因,观察重组蛋白对脓肿分枝杆菌的抑菌作用。方法以噬菌体D29基因组DNA为模板,PCR扩增gp10基因片段,克隆至pET-32a(+)载体上,构建重组原核表达质粒pET-32a-gp10,转化E.Coli BL21(DE3),IPTG诱导表达。表达的重组蛋白经SDS-PAGE分析,亲和层析纯化后,采用杯碟法检测其抑菌活性。结果 PCR扩增获得长1 454 bp的gp10基因片段,重组表达质粒pET-32a-gp10经PCR、双酶切及测序证明构建正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为54 800,表达量占菌体总蛋白的97.4%,破菌上清及破菌沉淀中均可见目的蛋白的表达,纯化后纯度可达90%,浓度为0.5 mg/ml;重组蛋白对脓肿分枝杆菌有抑菌作用。结论已成功表达重组分枝杆菌噬菌体D29裂解酶gp10,其对脓肿分枝杆菌具有抑菌作用,为抗脓肿分枝杆菌及其他非结核分枝杆菌感染新药物的研制提供了依据。
- 熊玉霞杨致邦于拽拽戴维蒋任举蒋英
- 关键词：分枝杆菌细菌噬菌体裂解酶抗菌活性
- 肠产毒性大肠埃希菌F4ac菌毛蛋白FaeG亚单位的原核表达及免疫学鉴定
- 于拽拽杨致邦周裕珍熊玉霞胡洪铭蒋任举
- 关键词：肠产毒性大肠埃希菌抗原性免疫原性
- 肠产毒性大肠埃希菌F4ac菌毛蛋白FaeG亚单位的原核表达及免疫学鉴定被引量：1
- 2011年
- 目的克隆并表达肠产毒性大肠埃希菌(ETEC)F4ac菌毛蛋白亚单位FaeG,为制备预防幼畜ETEC感染的疫苗奠定基础。方法以ETEC(C83902)基因组DNA为模板,PCR扩增faeG基因,插入原核表达质粒pGEX-6P-1,构建重组质粒pGEX-faeG。将pGEX-faeG转化大肠埃希菌BL-21I,PTG诱导表达。SDS-PAGE分析表达蛋白的相对分子质量和表达形式,Western blot鉴定其抗原性。将表达菌超声破碎后离心提取包涵体制备抗原,经口灌喂免疫小鼠,检测小鼠血清中抗FaeG的IgGI、gA,鉴定其免疫原性。结果扩增的faeG基因全长786 bp,与基因文库中的faeG基因同源性达96%。重组质粒pGEX-faeG经PCR及双酶切鉴定确有插入片段,且序列完整。表达产物FaeG相对分子质量约53 kD,主要存在于碎菌后的沉淀中,以包涵体形式表达。Western blot显示该蛋白可与ETEC F4ac阳性血清特异性结合,免疫后小鼠血清抗FaeG IgGI、gA明显高于PBS和GST对照组。结论成功构建了ETEC F4ac菌毛蛋白亚单位FaeG的重组质粒pGEX-faeG,表达了重组蛋白FaeG,该蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于研制预防幼畜ETEC感染的疫苗。
- 于拽拽杨致邦周裕珍熊玉霞胡洪铭蒋任举
- 关键词：肠产毒性大肠埃希菌抗原性免疫原性
- 幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501蛋白的原核表达与纯化
- 2011年
- 目的原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC11637株Hp1501蛋白。方法 PCR扩增H.pylori NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化E.coli XL1-blue,IPTG诱导表达,并分析重组蛋白的表达形式。用Ni-NTA His柱对重组蛋白进行纯化。结果重组表达质粒pQE30-Hp1501a经双酶切鉴定构建正确,测序分析表明插入基因序列完全正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,表达量约占菌体总蛋白的21%,主要以包涵体形式存在,可与兔抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度达91%。结论成功原核表达并纯化了H.pylori NCTC11637株Hp1501蛋白,为H.pylori外膜蛋白的生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。
- 杨继文杨致邦敬保迁于拽拽熊玉霞王朝丽冯莉
- 关键词：幽门螺杆菌生物信息学原核细胞基因表达纯化
