夏丽君
- 作品数：12 被引量：18H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学基础医学院神经科学研究中心更多>>
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- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 幽门螺杆菌重组vacA-ctxB蛋白的基因克隆与表达
- 2008年
- 目的构建幽门螺杆菌(H.pylori)vacA毒性片段与霍乱毒素B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,并诱导表达VCTB重组蛋白,为制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础。方法以H.pylori基因组DNA为模板,PCR扩增vacA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA。再以pET32(a)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因并插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB。克隆至大肠埃希菌Top10,并在DH5α中诱导表达。SDS-PAGE分析表达结果,Ni-NTA柱纯化后Western blot鉴定其抗原性,免疫家兔后ELISA法检测血清中VacA和CtxB抗体鉴定其免疫原性。结果vacA的DNA片段为723 bp左右。ctxB基因的DNA片段为372 bp左右,与预计长度相符合。测序结果vctB融合基因由1092 bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符。表达蛋白VCTB经SDS-PAGE分析,相对分子量为40 000,与预期的一致;表达量约占菌体总蛋白的20%,提纯后SDS-PAGE分析可见单一条带,纯度可达92%以上。Western blot鉴定能与抗VacA人血清发生特异性反应,ELISA测定能与抗ctxB兔血清发生特异性反应。结论含vctA和ctxB融合基因的表达载体构建成功,并在大肠埃希菌DH5α中表达了重组蛋白质VCTB,表达蛋白具有良好的抗原性和免疫原性,可用于制备口服疫苗。
- 张任飞杨致邦栗俊杰夏丽君李昌庆陈瀑
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素霍乱毒素B亚单位融合蛋白
- 抗重组VacA IgY体内抗幽门螺杆菌感染的实验研究被引量：2
- 2008年
- 目的在构建H.pylori的基因工程菌pQE30-v-DH5a的基础上,诱导表达VacA重组蛋白,以此为抗原,制备抗VacA的蛋黄抗体(VacA IgY)。通过小鼠口服试验,证实VacA IgY治疗H.pylori感染的作用,为进一步制备抗H.pylori感染的IgY制剂提供实验依据。方法用重组H.pylori VacA蛋白免疫母鸡,水稀释结合氯仿有机沉淀法提取IgY,ELISA法测定其针对VacA的效价。建立H.pylori感染的Balb/c小鼠动物模型,治疗组在小鼠灌喂菌液后灌喂不同剂量的VacA IgY。以H.pylori培养和病理切片观察胃黏膜H.pylori定植和炎症反应程度。结果制备了高效价的IgY(1∶12800)。动物实验阳性对照组H.pylori的总感染率为70.4%,12周后的感染率为88.9%。治疗组的感染率与同期阳性对照组相似,胃黏膜的炎症反应程度比阳性对照组弱,随IgY剂量的增加,炎症减弱明显,IgY剂量为4mg/ml时,能达到较理想的治疗效果。结论成功制备了高效价的特异性VacA IgY,小鼠体内实验证实了口服VacA IgY具有治疗H.pylori感染的作用,可用于制备口服制剂。
- 夏丽君田一玲杨致邦黄伟张任飞李昌庆
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素卵黄抗体
- 抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护剂的探讨被引量：1
- 2009年
- 目的比较硫糖铝和多种糖类对抗幽门螺杆菌重组VacA卵黄抗体保护作用,为制备能耐受胃酸和蛋白酶的IgY制剂奠定基础。方法诱导DH5-αvacA-pQE30大量表达VacA蛋白,制备纯化的VacA IgY。在不同酸性的IgY液中加入同浓度各种保护剂,在相同酸性的IgY液中加入不同浓度的各种保护剂,然后加入不同浓度硫糖铝和正常胃内浓度或高浓度的胃蛋白酶,以ELISA法测定试验组IgY的剩余抗体活性（AR）。结果在pH2.0和3.0条件下,各保护剂均能提高IgY抗体活性,且硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,在此条件下50%和40%硫糖铝均可完全保持IgY抗体活性。在pH2.0-3.0及正常或高胃蛋白酶浓度下,30%以上硫糖铝均可有效保护IgY的活性。结论低pH下硫糖铝对IgY抗体活性的保护作用优于糖类,且30%以上硫糖铝可增强VacA IgY对胃蛋白酶的耐受能力,是较理想的IgY保护剂。
- 郭丽媛杨致邦田一玲黄伟夏丽君范贵荣苏善平
- 关键词：幽门螺杆菌卵黄抗体硫糖铝抗体活性保护剂
- 幽门螺杆菌vacA-ctxB融合基因原核表达载体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:构建幽门螺杆菌(Helicobacterpylori,H.pylori)致细胞空泡毒素抗原(Vacuolating cytotoxin antigen A,vacA)毒性片段与霍乱毒素(Cholerae toxin,Ctx)B亚单位(ctxB)基因的原核表达载体,为进一步表达VCTB重组蛋白,制备防治H.pylori感染的口服疫苗奠定基础。方法:通过比较国内H.pylori代表株的vacA基因毒性亚单位,找出高度同源性片段,按基因文库中提供的vacA基因和ctxB基因序列设计引物。以H.pylori基因组DNA为模板,PCR扩增vacA毒性片段基因,克隆至质粒pQE30中,获得重组质粒pQE30-vacA。以pET32(α)+-ctxB质粒为模板PCR扩增ctxB目的基因。再将纯化的ctxB基因片段插入pQE30-vacA中,构建含双基因的表达质粒pQE-vctB,构建的表达质粒pQE-vctB转化大肠杆菌Top10,培养后,提取纯化重组质粒pQE-vctB,内切酶双酶切鉴定。结果:扩增的vacA DNA片段约为723bp,ctxB基因的DNA片段约为372bp,与预计长度相符合。构建的表达质粒pQE-vctB酶切鉴定,与插入pQE30的目的基因片段相符。测序结果vctB融合基因由1092bp组成,编码364个氨基酸残基的多肽,与基因文库相符。结论:含vacA和ctxB融合基因的原核表达载体构建成功,为进一步表达VCTB重组蛋白奠定了基础。
- 张任飞杨致邦周侠夏丽君李昌庆陈瀑
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素霍乱毒素B亚单位
- HpaA-VacA IgY对小鼠胃内感染幽门螺杆菌的预防作用被引量：6
- 2011年
- 目的 研究HpaA-VacA IgY对小鼠幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)胃内定植及引起炎症的预防作用,为制备集预防和治疗H.pylori感染为一体的IgY制剂奠定基础。方法将BALB/c小鼠随机分为阳性对照组、阴性对照组、感染预防组和炎症预防组,阳性对照组灌喂含108 cfu/ml H.pylori的菌液;阴性对照组灌喂布氏肉汤代替H.pylori菌液;感染预防组灌喂不同剂量的IgY后,再灌喂同等剂量的菌液;炎症预防组灌喂同等剂量的菌液后,再灌喂不同剂量的IgY。通过胃黏膜H.pylori培养和组织切片染色镜检观察H.pylori定植及炎症反应程度。结果 HpaA-VacA IgY剂量为6 mg/只时,对H.pylori感染的预防率为88.9%,预防效果较好,当HpaA-VacA IgY的剂量为8 mg/只时,能完全预防H.pylori感染及其所引起的胃黏膜炎症。结论小鼠口服HpaA-VacA IgY具有预防和治疗H.pylori感染的作用,可用于制备防治H.pylori感染的口服制剂。
- 夏丽君杨致邦黄伟张任飞蒋仁举蒋英
- 关键词：幽门螺杆菌细胞空泡毒素黏附素
- 渗透压对痢疾志贺菌水通道蛋白glpF基因表达的影响被引量：2
- 2010年
- 目的探讨细菌水-甘油通道蛋白(GlpF)的生理功能及其对生长繁殖的影响。方法将用简并PCR发现表达水通道蛋白glpF基因的痢疾志贺菌接种于不同渗透压的液体培养基和添加了GlpF功能抑制剂的相应培养基中,培养不同时间后取培养液检测其生长繁殖量,RT-PCR分析其GlpF的表达。结果痢疾志贺菌GlpF的表达随培养基渗透压的改变而变化,在低渗培养基中的表达低于在等渗环境中;在高渗透压的培养基中,其表达显著高于在等渗培养基中。在加入Hg2+抑制剂抑制GlpF的表达后,在低渗培养基中,未明显影响细菌的生长繁殖,但在较高渗透压的培养基中,细菌的繁殖量显著少于在未加Hg2+抑制剂的同样渗透压培养基中。结论在非等渗环境中,细菌GlpF的表达对细菌细胞内外水分的调节,维持胞内环境稳定起到重要作用,尤其在高渗透压环境中更为明显。
- 李昌庆杨致邦夏丽君张任飞苏善平吴敏
- 关键词：痢疾志贺菌渗透压RT-PCR
- KLOTHO基因表达产物的研究进展被引量：3
- 2006年
- Klotho基因是一种主要在肾脏和脑组织表达的基因,其表达产物有膜型和分泌型2种蛋白,二者分别是膜结合受体和体液因子,能通过如影响细胞结构,调节维生素D和钙、磷代谢,保护心血管系统,影响机体免疫功能等多种途径对衰老及衰老相关性疾病进行相应的调节。Klotho基因敲除后的小鼠过早出现和人类衰老相似的多种行为和病理生理改变,如寿命缩短、运动失调、肺气肿、动脉粥样硬化、骨质疏松和血管内皮功能障碍等。用Klotho基因进行遗传补救治疗后,这些症状得到缓解。因此Klotho基因的表达产物有望成为防治老年性疾病的有效药物,对其在血清中的含量进行检测还有望作为诊断衰老性疾病的指标。
- 夏丽君杨致邦
- 关键词：KLOTHO基因衰老性疾病基因表达
- 幽门螺杆菌感染与儿童相关性疾病的研究进展
- 2007年
- 自1983年Warren和Marshall从胃黏膜组织中发现幽门螺杆菌(Hp)以来,大量研究已经表明该菌是引起慢性胃炎和胃溃疡的重要致病因子,并与胃腺癌和胃淋巴瘤的发生密切相关[1].1994年,国际癌症研究机构已将Hp列为Ⅰ类致癌原,被认为是与致癌有关的第一种细菌.清除Hp感染已具有重要的临床意义.Hp的感染途径尚未完全明了,多认为人是唯一的传染源,主要通过消化道传播,唾液是传播媒介.母亲将食物嚼碎后再喂给孩子、共用食具、接吻等与高感染率有关.……
- 夏丽君杨致邦
- HpaA-VacA IgY体内抗H.pylori感染及生物利用度的研究
- 目的:用pQE30-HpaA-VacA-DH5a菌大量表达幽门螺杆菌/(Helicobfacter pylori H.pylori/)黏附素/(HpaA/)与细胞空泡毒素/(VacA/)的重组蛋白HpaA-VacA,以此...
- 夏丽君
- 关键词：H.PYLORI黏附素空泡毒素卵黄抗体H.PYLORI细胞空泡毒素黏附素卵黄抗体IGY生物利用度
- 文献传递
- 简并PCR检测细菌水通道蛋白基因的研究被引量：2
- 2009年
- 目的查找9种细菌和1种真菌的水通道蛋白基因,为进一步探讨细菌水通道蛋白的生理功能奠定基础。方法根据细菌水通道蛋白的保守氨基酸序列,设计合成简并核苷酸引物。提取目标菌DNA,简并PCR扩增细菌水通道蛋白基因。扩增产物回收纯化,DNA测序,推导其氨基酸序列并BLAST分析。结果10种目标菌中,大肠埃希菌和痢疾志贺菌扩增出所需的DNA片段。电泳分析其分子质量约为400 bp和370 bp,其序列与细菌水通道蛋白-甘油易化蛋白基因高度同源,相似性分别为97%和94%;推导氨基酸序列与细菌水通道蛋白氨基酸高度同源,相似性为83%和87%。结论利用简并PCR在大肠埃希菌中扩增出甘油易化蛋白基因,并发现痢疾志贺菌中存在甘油易化蛋白基因。
- 李昌庆杨致邦夏丽君张任飞陈瀑
- 关键词：水通道蛋白细菌真菌简并PCR
