何彰华
- 作品数：9 被引量：27H指数：3
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项国家重点实验室开放基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 过表达热休克蛋白70提高CHO细胞表达抗体的能力被引量：3
- 2011年
- 通过在中国仓鼠卵巢细胞(CHO)中过表达热休克蛋白70以提高其表达抗体的能力。首先从中国仓鼠基因组DNA中扩取HSP70基因,构建真核表达质粒pcDNA3.1-HSP70,再将重组质粒稳定转染到CHO/dhfr-细胞中,筛选获得稳定的细胞系,运用RT-qPCR检测和Western blot分析HSP70基因的过表达。在过表达HSP70的CHO细胞组和对照细胞组(转染空载体pcDNA3.1的CHO细胞组)中分别转染表达抗-HBs的质粒,应用ELISA检测两组细胞表达抗-HBs的能力。RT-qPCR结果显示实验组CHO细胞中HSP70基因的表达量明显高于对照组细胞;ELISA检测结果表明过表达HSP70的CHO细胞组抗-HBs表达量高于对照组细胞(P<0.05)。研究揭示HSP70能有效促进细胞内分泌性蛋白的表达。
- 黄芬安小平李存何彰华张宝中米志强王娟童贻刚
- 关键词：CHO细胞HSP70抗体
- 基于荧光强度快速判断蛋白可溶性方法的建立
- 2012年
- 目的:建立一种通过观察荧光强度,快速、直观地判断蛋白可溶性的方法。方法:选择抗辐射蛋白CBL502-AA及其突变体CBL502-ΔAA′作为目的蛋白,增强型绿色荧光蛋白作为报告分子,分别构建融合蛋白表达载体;通过SDS-PAGE和荧光观察两种手段检测和比较融合蛋白的可溶性。结果:荧光观察融合蛋白的可溶性与SDS-PAGE检测结果一致。结论:建立了一种基于荧光强度,快速、简单、直观的比较蛋白可溶性的方法。
- 肖丽霞叶丙雨王洋师明磊何彰华张乐之赵玉军赵志虎
- 关键词：荧光绿色荧光蛋白
- 红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建
- 天然小分子药物一直是人类抵御疾病的重要手段,抗生素的发现及其使用,拯救了成千上万人的生命,但是大量抗性致病菌如耐万古霉素、甲氧西林抗性等“超级细菌”的出现,极大地威胁着人类生命健康。因此.如何建立组合性生物合成平台,更加...
- 何彰华
- 关键词：红霉素生物合成糖基化
- 文献传递
- 红霉素链霉菌聚酮合成酶基因eryAIII的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2010年
- 目的:在大肠杆菌中异源表达红霉素链霉菌聚酮合成酶eryAIII基因。方法:构建表达载体pET-m28a,PCR扩增高GC含量长片段基因eryAIII及分子伴侣GroELS的基因,并插入该载体,每个基因都能够独立启动和终止表达;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3),用IPTG进行诱导表达。结果:NdeⅠ、HindⅢ分别酶切质粒pET-m28a/eryAIII-GroELS,琼脂糖凝胶电泳显示获得与预期大小相同的DNA片段;SDS-PAGE结果表明,重组大肠杆菌表达了由eryAIII编码的相对分子质量为348×103的蛋白;与GroELS共表达后,目的蛋白在上清中的表达量明显增加。结论:GroELS提高了eryAIII编码蛋白的可溶性,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。
- 张丽华王洋何彰华刘晓洁师明磊何建勇赵志虎
- 关键词：聚酮合成酶红霉素链霉菌异源表达
- 应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体被引量：1
- 2011年
- 目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。
- 何彰华师明磊王洋叶丙雨黄芬张彦范秋声王东肖丽霞张乐之李德彬闫兴赵志虎
- 关键词：RED重组质粒红霉素
- 预防和治疗辐射损伤的蛋白CAA′及其应用
- 本发明公开了一种预防和治疗辐射损伤的蛋白CAA′及其应用。本发明提供了一种环化蛋白(命名为蛋白CAA′)，是如下(a1)或(a2)或(a3)或(a4)：(a1)序列7自N末端第11至305位氨基酸残基组成的环化蛋白；(a...
- 赵志虎叶丙雨王洋沈文龙师明磊张彦何彰华王政
- 文献传递
- 热激蛋白70的研究进展被引量：11
- 2011年
- 热激蛋白(HSP70)作为分子伴侣参与细胞内许多重要反应,从而对生物体起着重要的作用。随着研究的深入,其生物学功能不断被发现和利用的同时,HSP70的应用前景也变得越来越广泛。已有研究者对HSP70的生物学功能做了详细介绍,我们主要对近年来HSP70在医学及环境监测等方面的应用进行综述。
- 黄芬何彰华李存米自强李力童贻刚
- 关键词：热激蛋白70分子伴侣
- 一种多基因串联共表达载体的构建被引量：11
- 2011年
- 为了构建一种可用于串联共表达多个基因的原核表达载体,通过PCR引入点突变,对商业载体pET-22b的酶切位点进行定向改造,设计独特的XbaⅠ/SpeⅠ模块。获得改造成功的载体pET-m22b,测序结果显示启动子、核糖体结合位点、多克隆位点及终止子均位于XbaⅠ和SpeⅠ两酶切位点间。选取不同来源的基因进行串联组合及表达鉴定,四个基因成功组合于同一载体中,表达效果良好,各基因表达效率不受明显影响。研究构建的载体pET-m22b,使多基因的共表达更加便捷,为蛋白复合物的表达与纯化、代谢通路的异源重建及其优化等研究奠定了良好的基础。
- 何彰华王洋赵珺刘晓杰张丽华王东师明磊黄芬尤平赵志虎
- 关键词：共表达串联组合
- 红霉素大环内酯合成通路在大肠杆菌中的重建被引量：1
- 2012年
- 研究在大肠杆菌中重建了红霉素大环内酯(6-脱氧-红霉内酯B,6dEB)合成通路。先将参与6dEB合成所必需的基因分别克隆于多基因串联共表达载体中,获得单基因重组质粒;再利用载体中XbaⅠ/SpeⅠ互为同尾酶的特性实现相关基因的串联组合,获得多基因重组质粒pBJ130和pBJ144。将多基因重组质粒共转化BAP1,获得含6dEB合成通路的工程菌株BAP1(pBJ130/pBJ144),SDS-PAGE检测结果显示通路中各基因均有明显的表达;进行低温发酵,产物粗提后质谱检测到6dEB,其产量约10 mg/L。表明成功实现了6dEB合成通路在大肠杆菌中的重建,为红霉素大环内酯的改造和修饰提供了平台,也为红霉素合成通路在大肠杆菌中的完整重建以及聚酮类抗生素的组合性生物合成提供了参考。
- 何彰华王洋叶丙雨师明磊王东范秋声黄芬赵志虎
- 关键词：共表达SDS-PAGE质谱
