伊远学
- 作品数：12 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中国人民武装警察部队更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金广东省自然科学基金广东省医学科学技术研究基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 人T-bet基因的体外扩增及克隆和鉴定
- 2007年
- 目的:克隆人T-bet基因,构建其真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。方法:实验于2005-07/2006-07在北京大学深圳医院中心实验室完成。①根据Genebank的人T-bet基因的全长cDNA序列,设计合成一对附加BglⅡ和SalⅠ两个限制性内切酶酶切位点的特异性引物。②分离人外周血单个核细胞,提取RNA,用反转录-聚合酶链反应方法将T-bet的编码序列cDNA扩增,装入pMD18-T载体并送去测序。③BglⅡ+SalⅠ双酶切质粒pMD18-T-bet,经琼脂糖电泳切胶回收T-bet片段,将T-bet插入载体pEGFP-C1构建成重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet。④用双酶切和聚合酶链反应对插入片段进行分析和验证。结果:①反转录-聚合酶链反应产物经琼脂糖电泳结果显示在预期位置有相对分子质量为1608bp的特异性扩增带。②测序结果证实,T-bet的编码序列和Genbank中T-bet mRNA序列相同。③双酶切和聚合酶链反应结果证实插入片段序列正确。结论:实验成功扩增出人T-bet基因,构建了基因重组真核表达载体pEGFP-C1-T-bet,为探索T-bet基因对免疫细胞的调节作用和肿瘤基因治疗奠定了基础。
- 郝颖刘晓平徐勤魏小勇李宝金伊远学陶剑平张超张立兵
- 关键词：T淋巴细胞转录因子
- 紫芪方对IEC-6小肠上皮细胞缺氧复氧损伤后细胞凋亡及线粒体膜电位的影响被引量：5
- 2005年
- 目的:观察缺氧复氧对IEC-6肠上皮细胞凋亡和线粒体膜电位的影响,探讨保护肠道屏障功能的复方中药——紫芪方对IEC-6 肠上皮细胞缺氧复氧损伤的保护作用及机制。方法:建立IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤模型。采用血清药理学方法,在细胞培养液中加入不同给药剂量(间隔1h,两次给药,20 g/kg)获取的紫芪方药物血清、参附药物血清及生理盐水血清(S)。应用流式细胞仪检测细胞凋亡率,采用激光共聚焦显微镜测定线粒体膜电位变化。结果:IEC-6肠上皮细胞缺氧复氧损伤后细胞凋亡率明显升高(P<0.01),线粒体膜电位明显降低(P<0.01);与损伤模型对照组比较,紫芪方药物血清能明显抑制IEC-6肠上皮细胞凋亡(P<0.05).并具有保护IEC-6 肠上皮细胞线粒体膜电位的作用(P<0.05)。结论:缺氧复氧可导致IEC-6肠上皮细胞凋亡数量明显升高和线粒体膜电位降低。紫芪方含药血清可减少细胞凋亡数量及保护细胞线粒体膜电位。紫芪方保护肠道的机制可能与抑制细胞异常凋亡有关。
- 史成和陆松敏刘建仓龙在云伊远学李萍
- 关键词：缺氧复氧细胞凋亡线粒体膜电位
- KDR启动子介导胸苷激酶体外靶向杀伤血管内皮细胞
- 2007年
- 目的构建含以KDR为启动子的HSV-tk重组腺病毒,体外评估其对血管内皮细胞的特异性杀伤效能。方法采用pAdeasy系统,构建受KDR启动子或巨细胞病毒(CMV)启动子调控并可表达HSV-tk基因的AdKDR-tk和AdCMV-tk,在293细胞中包装、扩增后,体外分别感染表达KDR的人脐静脉血管内皮细胞系(HUVEC)和不表达KDR的肝癌细胞系HepG2,用丙氧鸟苷(GCV)处理受染细胞,并以MTT法检测其细胞增殖情况。结果病毒滴度均为1×1010pfu/mL。在感染复数(MOI)为100的条件下,当细胞培养液中加入的GCV浓度由0增至50μg/mL时,感染含AdKDR-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞其存活率由100%分别下降至(28.94±5.67)%和(75.45±2.91)%(P<0.01),而感染含AdCMV-tk的HUVEC细胞和HepG2细胞其存活率分别下降至(17.56±2.48)%和(23.15±5.72)%(P>0.05)。结论KDR启动子介导的HSV-tk具有特异性杀伤血管内皮细胞的作用。
- 李宝金张超宁长青伊远学郝颖刘晓平区庆嘉
- 关键词：内皮血管KDR启动子胸苷激酶
- 参芨阻克方对失血性休克大鼠肠粘膜上皮细胞线粒体细胞色素和能荷的影响被引量：9
- 2003年
- 目的 研究参芨阻克方 (简称参芨 )对失血性休克大鼠小肠粘膜上皮细胞线粒体功能的影响。方法 采用Wigger’s法建立失血性休克动物模型 ,分离小肠粘膜上皮细胞线粒体 ,检测细胞色素aa3、b、c、c1 和能荷的水平。结果 失血性休克后小肠粘膜上皮细胞线粒体细胞色素aa3、b、c、c1 和能荷均显著降低 ;而参芨治疗组小肠粘膜上皮细胞线粒体细胞色素aa3、b、c、c1 和能荷均显著提高 (P <0 .0 5vs休克组 )。结论 失血性休克大鼠小肠粘膜上皮细胞线粒体呼吸链电子传递活性受到损伤 ,能量合成障碍 ,而参芨能显著改善线粒体的呼吸功能。
- 伊远学史成和刘建仓李萍陆松敏
- 关键词：失血性休克小肠粘膜
- T-bet和c-FLIP双基因共表达质粒的构建及生物学活性检测被引量：1
- 2008年
- 目的构建携带T-bet和c-FLIP双基因的真核表达载体及检测其生物学活性。方法采用RT-PCR方法从人外周血淋巴细胞的总RNA中扩增出T-bet和c-FLIPcDNA,利用pIRES和pEGFP-C1,构建T-bet和c-FLIP双基因真核表达载体pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP。采用非脂质体的脂质型介导载体将pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP转染至外周血淋巴细胞,观察T-bet和c-FLIP在外周血淋巴细胞中的表达,并检测其诱导淋巴细胞的抗凋亡作用及Th1/Th2细胞偏移。结果成功构建pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP质粒,运用非脂质体的脂质型介导载体将该质粒转染淋巴细胞,其转染率为34.6%。流式细胞仪分析未经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理的淋巴细胞在CH-11作用24h后,细胞的凋亡率分别为(50.12±8.02)%;经pEGFPT-bet-IRES-c-FLIP预处理1d的淋巴细胞,其细胞凋亡率分别下降到(5.73±0.37)%;双基因表达的淋巴细胞的Th1型细胞因子IFN-γ表达水平明显高于空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞组(P<0.01),且Th2型细胞因子IL-4表达水平较空载体表达的淋巴细胞及未经处理的淋巴细胞低(P<0.01),差异有统计学意义。结论转染T-bet和c-FLIP共表达基因后的T淋巴细胞可产生抗凋亡作用及向Th1细胞分化。
- 伊远学李宝金刘晓平张超张维冯子毅冷希圣
- 关键词：T-BET基因PEGFP-C1生物学活性共表达
- 海水浸泡对失血性休克大鼠肠粘膜上皮细胞线粒体功能的影响
- 2003年
- 目的 研究海水浸泡对失血性休克大鼠小肠粘膜上皮细胞线粒体功能的影响。方法 采用雄性Wistar大鼠2 4只 ,分为正常对照组、平原休克组和海水休克组 ,每组 8只。分离小肠粘膜上皮细胞线粒体 ,检测细胞色素aa3 、b、c、c1和能荷的水平。结果 海水休克组小肠粘膜上皮细胞线粒体细胞色素aa3 、c、c1和能荷均显著低于对照组和平原休克组。结论 海水浸泡失血性休克大鼠小肠粘膜上皮细胞线粒体呼吸链电子传递活性受到全面损伤 ,能量合成障碍 ,伤情显著加重。
- 伊远学陆松敏刘建仓史成和李萍
- 关键词：海水浸泡失血性休克小肠粘膜肠上皮细胞线粒体
- 微囊化腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺血再灌注损伤肠黏膜的保护作用
- 2010年
- 目的研究微囊化重组腺病毒AdCMV/Bcl-2转染对缺血再灌注损伤肠黏膜的保护作用及其机制。方法利用气体雾化技术将携带Bcl-2基因的复制缺陷型重组腺病毒AdCMV/Bcl-2微囊化,检测其在人工胃、肠液中的融出率;将等量的重组腺病毒通过静脉注射、腹腔注射与口服微囊3种转染途径转染大鼠,应用RT-PCR和Western blot方法检测目的基因Bcl-2在小肠中的表达,并检测各组大鼠伤后血浆内毒素、二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸含量和肠上皮细胞凋亡数量的变化。结果制备的微囊在人工胃液中仅有少量崩解,而在肠液中40min崩解融出率即达到(57.2±3.9)%,肠溶性良好;AdCMV/Bcl-2转染后48h大鼠肠黏膜Bcl-2基因的表达显著增强,其中,口服微囊组Bcl-2表达最强;AdCMV/Bcl-2转染使大鼠肠上皮细胞凋亡减少,伤后血浆D-乳酸、DAO及内毒素水平显著降低(P<0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒微囊化可保护其免受胃液损伤,并在肠道中被释放吸收。AdCMV/Bcl-2转染提高肠黏膜组织Bcl-2的表达在缺血再灌注损伤过程中可显著保护肠黏膜屏障功能。
- 伊远学刘晓平李宝金张超冷希圣刘筑罗效梅杨瑞兵
- 关键词：缺血再灌注损伤基因转染微囊腺病毒载体
- 重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺氧再复氧肠上皮细胞的保护作用
- 2010年
- 目的探讨复制缺陷型重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染对缺氧再复氧损伤肠上皮细胞的保护作用。方法构建能介导Bcl-2基因转染和表达的复制缺陷型重组腺病毒载体(Ad/CMV-Bcl-2),转染体外培养的小肠上皮细胞株(IEC-6),检测其Bcl-2基因表达变化,分别对正常对照组、缺氧复氧组(单纯给予缺氧复氧处理)、Ad-CMV/Bcl-2转染组(AdCMV/Bcl-2腺病毒载体转染48h后再给予缺氧复氧处理)细胞的凋亡率、死亡率及活力进行分析。结果对照组微弱表达,Ad/CMV-Bcl-2转染组细胞Bcl-2基因高表达;经缺氧再复氧处理后,Annexin-V-Flous试剂盒检测死亡细胞明显减少(P<0.01),凋亡显著受到抑制(P<0.01);采用MTT法证明,Ad/CMV-Bcl-2转染组细胞活力较对照组明显增强(P<0.01)。结论复制缺陷型重组腺病毒介导的Bcl-2基因转染可显著减轻缺氧再复氧导致的肠上皮细胞损伤。
- 伊远学刘筑罗效梅刘晓平李宝金张超冷希圣
- 关键词：腺病毒转染细胞低氧
- 海水浸泡对失血性休克大鼠心肌线粒体呼吸链的影响
- 2003年
- 目的 研究海水浸泡对失血性休克大鼠心肌细胞线粒体呼吸链的影响。方法 采用雄性Wistar大鼠24只,分为正常对照组、平原休克组和海水休克组,每组8只。测定血液动力学后用差速离心法分离心肌细胞线粒体,以氧电极技术和差光谱法测定琥珀酸呼吸链和还原型辅酶Ⅰ(NADH)呼吸链的电子传递活性。结果 海水浸泡失血性休克大鼠血液动力学和心肌细胞线粒体琥珀酸-Co.Q还原酶、NADH细胞色素C还原酶、NADH-Co.Q还原酶、细胞色素氧化酶均显著低于对照组和平原休克组。结论 海水浸泡失血性休克大鼠心肌细胞线粒体呼吸链电子传递活性受到全面损伤,致使心肌氧利用发生障碍,可能是海水浸泡失血性休克大鼠心肌收缩功能下降、心输出量减少的原因之一。
- 伊远学陆松敏刘建仓王丽华
- 关键词：休克出血性线粒体心肌收缩功能
- 小干扰RNA特异性抑制淋巴细胞T-bet表达的研究
- 2009年
- 目的探讨体外转录法合成的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)对人淋巴细胞T-bet基因表达及功能的影响。方法设计并合成4条siRNA(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3及siRNA-co),脂质体法转染淋巴细胞。转染后48h收集转染后细胞,采用RT-PCR方法检测细胞T-bet mRNA的抑制率;酶联免疫吸附试验(ELISA)方法检测细胞上清液中IL-4和IFN-γ水平;将淋巴细胞与人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)共培养检测淋巴细胞对ECV304增殖的抑制作用。结果转染后48h半定量RT-PCR的检测显示siRNA-1、siRNA-2和siRNA-3转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制率分别为(72.50±1.01)%、(5.40±0.63)%和(30.90±0.90)%,以siRNA-1转染后的淋巴细胞T-bet表达抑制作用最强(P<0.05),其细胞上清液中IL-4水平最高,而IFN-γ的水平最低(P<0.05),siRNA-1转染淋巴细胞对人脐静脉血管内皮细胞(ECV304)增殖的抑制作用低于siRNA-2及siRNA-3。结论siRNA可特异性抑制淋巴细胞T-bet基因的表达,从而为进一步研究siRNA在移植免疫耐受中应用提供了理论和实验基础。
- 张维李宝金伊远学吴立旋刘晓平陶剑平
- 关键词：RNA干扰小干扰RNA淋巴细胞
