顾小叶
- 作品数：13 被引量：40H指数：5
- 供职机构：复旦大学附属华山医院中心实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金台州市科技计划项目上海市科学技术委员会资助项目更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 前列腺癌组织中DLC-1启动子甲基化定量检测的HRM方法建立及其应用意义被引量：6
- 2010年
- 目的建立HRM技术定量检测DLC-1启动子甲基化的方法，并分析探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌病理参数的相关性。方法选取89份前列腺癌组织以及10份匹配癌旁组织标本，采用LCM收集肿瘤细胞群，抽提DNA后进行甲基化修饰。以CpGenomeUniversal Methylated DNA作为100％甲基化样本，以100％非甲基化的健康人外周血DNA作为稀释剂，分别制成100％、80％、50％、30％、10％、0％系列浓度的标准曲线，并进行重复性和灵敏性评价。同时用HRM技术定量检测前列腺癌细胞中DLC-1甲基化水平，探讨DLC-1甲基化程度与前列腺癌患者年龄、PSA水平与前列腺癌TNM的关系。结果100％、80％、50％、30％、10％、0％甲基化标准品的HRM熔解曲线从右往左依次排列，10份癌旁组织标本、35份前列腺癌组织标本重叠在0％标准曲线上；5份前列腺癌组织标本位于0％～30％区域内，29份位于31％～80％区域内，20份位于81％-100％区域内。HRM技术最低检测限可达10％的甲基化水平，优于MSP检测（30％甲基化水平）。DLC-1甲基化水平与前列腺癌患者年龄无明显相关（χ2=3．29，P=0．19），与PSA水平也无相关性（χ2=2．04，P=0．36），但DLC-1甲基化水平与TNM分期显著相关（r=9．04，P=0．01），且随TNM分期增高而增高。结论成功建立的HRM技术定量检测DLC-1甲基化水平的方法稳定、灵敏、操作简单，DLC-1启动子甲基化有望成为评估前列腺癌TNM的分子指标。
- 郭林张心菊关明刘瑞来顾小叶马玮哲
- 关键词：肿瘤抑制蛋白质类甲基化
- 系统性红斑狼疮患者BANK1基因多态性分析
- 张心菊顾小叶马玮哲关明
- 采用突变特异性扩增系统(ARMS)在血液恶性疾病中检测JAK-2基因V617F突变
- 目的:JAK-2基因V617F突变是继慢性粒细胞白血病(CML)中Bcr/ABL发现后慢性骨髓增殖性疾病(CMPD)发病机制中最有价值的异常基因,对进一步明确真性红细胞增多症(PV)、原发性血小板增多症(ET)、慢性特发...
- 顾小叶张心菊马玮哲陈勤奋陈波斌关明
- 文献传递
- JAK2外显子12基因突变及用途
- 本发明属基因组学领域，涉及位于JAK2外显子12上的编码序列及其在骨髓增殖性疾病基因诊断中的用途。所述的JAK2基因突变在JAK2外显子12上插入序列1的碱基，其蛋白序列F547变为L547。经实验证实，该突变使特异性的...
- 关明刘维薇陈勤奋许笑顾小叶陈波斌许小平马玮哲张心菊
- 文献传递
- 采用荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变被引量：8
- 2009年
- 目的建立荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，评估JAK2 V617F突变在诊断骨髓增殖性疾病和白血病中的临床意义。方法选取71例慢性粒细胞性白血病（CML）、22例原发性血小板增多症（ET）、11例原发性骨髓纤维化（PMF）、9例真性红细胞增多症（PV）、7例嗜酸粒细胞增多症患者，分别采用荧光定量PCR、突变特异性扩增系统（ARMS）对JAK2 V617F突变进行检测，并采用基因测序对结果进行验证。将具有JAK2 V617F纯合子突变的人类红白血病细胞株（HEL）DNA作为阳性对照，比较荧光定量PCR和ARMS对JAK2基因V617F突变的检测敏感度。结果采用荧光定量PCR检测，野生型的熔解温度（Tm）峰出现于（75．0±0．2）℃处，突变型的Tm峰出现于（76．6±0．2）℃处。JAK2基因V617F突变在PV、ET、PMF等骨髓增殖性疾病中的检出率分别为8例（88．9％）、12例（54．5％）、7例（63．6％），但在71例CML中只检出1例（1．4％）。荧光定量PCR与ARMS的结果符合率为100％，结果经过测序证实。使用荧光定量PCR法可在每10^6个正常白细胞中检出低至10^2个HEL细胞，而使用ARMS方法时要在每10^6个正常白细胞中HEL细胞达到10^4个时，方可检测出，前者比后者方法灵敏100倍。结论成功地建立了荧光定量PCR检测JAK2基因V617F突变的方法，比ARMS更灵敏、简便，适合临床使用。JAK2基因V617F突变在骨髓增殖性疾病中有较高的检出率，可作为骨髓增殖性疾病特异性诊断指标。
- 张心菊顾小叶刘双春马玮哲关明
- 关键词：骨髓增殖性疾病JANUS激酶2突变聚合酶链反应
- 系统性红斑狼疮患者BANK 1基因多态性分析
- 目的系统性红斑狼疮(SLE)是一类会产生自身抗体以及与多基因遗传有关的自身免疫性疾病。国外研究发现,在欧美地区,BANK 1基因是SLE的易感基因,其多态性会影响调节区和关键
- 张心菊顾小叶马玮哲关明
- 文献传递
- 运用高分辨率熔解技术分析中国男性痛风患者SLC2A9基因与尿酸水平的关系
- 目的：SLC2A9是新近发现的尿酸转运子,该基因单核苷酸多态性可影响血清尿酸水平.本研究检测SLC2A9基因第6内含子rs7442295多态性在中国男性痛风和高尿酸血症患者的分布情况以及与尿酸代谢指标的相关性。方法：选取...
- 顾小叶马伟哲张心菊关明
- 关键词：尿酸水平
- 阿托伐他汀改善高LDL-C相关血小板活化异常的临床研究被引量：9
- 2015年
- 目的探讨口服阿托伐他汀对高LDL-C血症相关的血小板异常活化功能的改善作用,阐明他汀类药物降低临床事件的新机制。方法从2012年11月至2013年7月于华山医院门诊就诊人群中,纳入LDL-C≥4.14mmol/L同时三酰甘油(triglycerides,TG)<1.7mmol/L且未经调脂治疗和抗血小板治疗者作为研究对象,作为阿托伐他汀治疗组(AT组),从体检中心招募健康志愿者作为对照组。测定血小板最大聚集率(maximal platelet aggregation,MPAG),全血流式细胞检测法测定血小板活化标志物CD62p(P-选择素)和PAC-1(GpⅡbⅢa)水平。对患者予以标准他汀治疗(阿托伐他汀20mg/天),并于治疗后1个月、2个月随访检测以上指标。结果 AT组共纳入40例,其中33例完成研究;对照组纳入并完成35例。两组人群基线资料(年龄、性别、BMI、吸烟史、血压、冠心病家族史、血糖)无明显差异;AT组患者服用阿托伐他汀治疗后,TC、TG、LDL-C均明显下降(P<0.05);基线时AT组血小板最大聚集率与对照组相似(33.03%±15.87%vs.29.05%±17.75%,P=0.102),采用他汀治疗2个月后,AT组患者血小板最大聚集率较基线显著下降但差异无统计学意义(P=0.073)。治疗前AT组CD62p和PAC-1均高于对照组(1.72±0.96 vs.0.90±0.77,P<0.001;4.33±2.42 vs.2.63±2.03,P<0.01);阿托伐他汀治疗2个月后,CD62p和PAC-1分别为0.85±0.72和1.50±1.07,与治疗前比较,两者表达均明显下降(P<0.05)。结论临床上阿托伐他汀可以改善高LDL-C相关的血小板活化。
- 李剑陈乐闻倪唤春温志超高稳顾小叶罗心平
- 关键词：阿托伐他汀血小板活化
- 运用高分辨率熔解技术检测骨髓增殖性疾病患者JAK2 V617F突变
- 2009年
- JAK2基因V617F突变与真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）、原发性骨髓纤维化（PMF）等慢性骨髓增殖性疾病（MPD）的病理变化明显相关，在新修订的2008年WHO分类系统中，有无JAK2突变已经成为慢性MPD主要的诊断指标。目前多采用PCR-限制性片段长度多态性（RFLP）、突变特异性扩增系统（ARMS）或者测序分析对JAK2突变进行检测，但前二者存在假阳性或灵敏度较低，后者检测较为准确但所需要时间较长，均不适合临床诊断。
- 夏荣张心菊顾小叶马玮哲关明
- 关键词：慢性骨髓增殖性疾病JAK2限制性片段长度多态性原发性血小板增多症
- 荧光PCR结合熔解曲线法检测JAK2 V617F突变方法的建立及其方法学验证被引量：5
- 2013年
- 目的 参考美国病理学家协会（CAP）相关要求,验证本实验室自建的JAK2 V617F突变检测项目的各项性能参数.方法 方法学建立.收集2010年4月至12月复旦大学附属华山医院已确诊的57例BCR/ABL融合基因阴性骨髓增殖性肿瘤患者的外周血和骨髓液标本.采用荧光PCR结合熔解曲线法建立JAK2 V617F突变方法检测标本.在准确度、重复性、分析灵敏度、干扰物质的影响等各方面对检测方法的性能进行评估.准确性使用Kappa检验评估,重复性使用符合率,分析灵敏度使用配对t检验进行统计分析.结果 荧光PCR结合熔解曲线方法（试验方法）与参考方法（测序法）相比有非常好的一致性（Kappa=0.89）；重复性符合率为100％；血脂（＜24 mmol/L）和黄疸（＜450 μmol/L）对本试验无明显干扰；最低检测突变率为5％.结论 基于荧光PCR结合熔解温度反应方法检测JAK2 V617F突变可应用于临床检测.
- 胡婷婷陈宇明张心菊顾小叶关明刘维薇
- 关键词：JANUS激酶2聚合酶链反应
