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鸭传染性浆膜炎的诊断与防治被引量：6: 2003年; 报道了武汉市郊某鸭场肉鸭暴发鸭传染性浆膜炎的发病情况、临床症状、剖检病变及实验室诊断结果 ,并提出防治该病的基本措施。; 李自力毕丁仁许青荣石德时程峰刘梅; 关键词：症状剖检病变

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究被引量：31: 2004年; 以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1∶32和1∶16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL,兔抗AIVIgG的最适工作浓度为5μg/mL;对已知的阳性样品,用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上,且能检出其它亚型的禽流感病毒;与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应,说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测,结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。; 肖运才李自力胡思顺石德时许青荣程峰刘梅毕丁仁王桂枝; 关键词：禽流感病毒夹心ELISA 禽流感

鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族序列分析被引量：7: 2003年; 用限制性核酸内切酶对鸡毒霉形体 (MG) HS株基因文库中经初步估测可能含有的 4个鸡毒霉形体粘附蛋白(protein of Mycoplasma gallisepticumadhesin,p MGA)基因的 Mg W1 7重组质粒进行了不同组合的酶消化 ,根据消化片段的大小及酶切位点绘制了 7.5 kb外源片段的物理图谱 ;然后根据所得的物理图谱 ,选用 Pst 和 Eco R 将Mg W1 7外源片段酶解成 1 .3、2 .0、4 .2 kb3个部分 ,将它们分别亚克隆到 SK( + ) 质粒上 ,得到了 3个亚克隆子SGp1 0 0、SGp2 0 0、SGp30 0。使用核酸外切酶缺失法构建缺失子系列 ,经序列分析后得到 Mg W1 7外源片段的全部序列。序列全长 74 34bp,中间含有 2个完整的 p MGA基因和另 2个不完整的 p MGA基因的首部和尾部 ,分别将它们顺次命名为 H- p MGA1 .1、H- p MGA1 .2、H- p MGA1 .3和 H- p MGA1 .4。 2个完整的 p MGA基因的阅读框长度分别为1 96 7bp(1 .2 )和 2 0 39bp(1 .3) ;H- p MGA1 .1首部不完整的阅读框的长度为 72 0 bp,尾部不完整的 H- p MGA1 .4的长度为 1 75 2 bp。将 H- p MGA基因与已报道的 MG.S6株、F株的 p MGA基因进行了比较 ,探讨了 p MGA基因在不同MG菌株中的相似性、基因启动子结构的差异、间隔区内; 沈青春毕丁仁翁长江李自力石德时许青荣程峰; 关键词：鸡毒霉形体 HS株

鸡毒霉形体粘附素蛋白基因的克隆和表达研究: MgW17重组质粒是由本实验室以前构建,含有2个完整的pMGA基因.本研究从该质粒中克隆了其中的第一个pMGA基因,将其插入到表达载体E.coli BL21(DE3)中,成功地表达出pMGA基因中的一部分.经用SDS-P...; 胡思顺李自力肖运才刘梅毕丁仁石德时许青荣程峰; 关键词：鸡毒霉形体克隆免疫诊断血清学; 文献传递

鸡毒霉形体HS株pMGA多基因族的研究被引量：6: 2003年; 鸡毒霉形体 (Mycoplasma gallisepticum ,GM)基因组中存在着编码细胞表面血凝粘附素蛋白 (protein of My-coplasma gallisepticum adhesin,p MGA)相关基因组的多基因族。为筛选出含有完整的 p MGA基因片段 ,并估算出鸡毒霉形体 HS株基因组中 p MGA多基因族的基因数 ,本试验以 p UC1 8为载体 ,用 Eco R 限制性内切酶构建了鸡毒霉形体 HS株的基因组文库。根据 p MGA基因引导序列的保守区和 p MGA基因间隔区的序列 ,人工合成了 2个寡核苷酸探针 (探针、探针 ) ,经标记后 ,双筛选所建的基因文库 ,从 6 0 0个转化子中共得到的 38个含有 p MGA基因的阳性克隆子 ,选其中 1个 7.5 kb的片段 (17号阳性克隆子 ,W17) ,用 4种限制性内切酶 (Eco R ,Hind ,Pst ,Bgl )酶切消化 ,绘制了该片段的物理图谱。该片段酶切产物经电泳、转膜后与探针和探针杂交 ,发现 2个探针杂交图谱基本相同 ,根据杂交带及放射信号的强度值 ,估测出该片段含有 4个 p MGA基因 ,以这个片段所含的 p MGA基因数为标准 ,估算出鸡毒霉形体 HS株含有 39个 p MGA基因。; 翁长江毕丁仁沈青春李自力石德时许青荣刘梅程峰; 关键词：HS株鸡毒霉形体

抗病毒免疫被引量：3: 2000年; 抗病毒免疫与其他微生物免疫一样 ,由非特异性和特异性免疫两部分组成 ,后者又包括体液和细胞免疫。因病毒生物学特殊 ,其免疫性具有明显特点 :1为彻底清除体内病毒 ,免疫效应物质须直接作用于病毒感染的靶细胞 ,或中断病毒大分子物质的合成 ,或破坏细胞使病毒丧失赖以生存的环境 ,这类免疫主要是细胞免疫 ,特别在有包膜病毒感染中 ,细胞免疫的作用尤为突出 ;2多种病毒在进入易感细胞之前都存在一定阶段的胞外游离状态 ,只有在这一阶段体液免疫才能充分发挥作用 ;3在病毒存在的不同阶段细胞免疫和体液免疫互相配合 ,扩大作用才能将其杀死。总之 ,在大多数情况下细胞免疫在抗病毒免疫中占主导地位 ,而体液免疫的作用是有限的。; 程峰熊涛李自力许青荣; 关键词：抗病毒细胞免疫体液免疫

禽流感病毒ELISA检测方法的建立及诊断试剂盒的研制与应用: 本研究以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,获得了鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16.以纯化的鸡抗AIV IgG为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体,建...; 肖运才李自力胡思顺石德时许青荣程峰刘梅毕丁仁王桂枝; 关键词：禽流感病毒诊断试剂盒 ELISA检测方法; 文献传递

禽流感病毒单克隆抗体的制备及其多肽表位的鉴定: 以禽流感病毒H9N2亚型纯化病毒为抗原,免疫6~8周龄雌性Balb/C鼠,末次免疫后3天,分离脾细胞与鼠骨髓瘤细胞SP2/0融合,ELISA筛选和有限稀释克隆化后,获得了8株能稳定分泌抗AIV单克隆抗体的杂交瘤细胞株.经...; 吴仁蔚肖运才胡思顺李自力石德时许青荣程峰王桂枝毕丁仁; 关键词：禽流感病毒单克隆抗体; 文献传递

禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究: 本研究以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2)亚型提纯物为免疫原,获得了鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1:32和1:16,以纯化的鸡抗AIV IgG为包被抗体,兔抗AIV IgG为第二抗体,...; 肖运才李自力胡思顺石德时许青荣程峰刘梅毕丁仁王桂枝; 关键词：禽流感病毒 ELISA; 文献传递

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程峰