盛夏
- 作品数：7 被引量：27H指数：3
- 供职机构：重庆医科大学附属第一医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金重庆市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 慢病毒介导shRNA沉默YAP基因对人前列腺癌LNCaP细胞增殖、凋亡及其雄激素受体的影响被引量：1
- 2015年
- 目的:探讨慢病毒介导sh RNA沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)基因对人激素依赖性前列腺癌细胞株LNCa P细胞增殖、凋亡及其雄激素受体(androgen receptor,AR)的影响。方法:3条针对YAP基因的sh RNA慢病毒干扰载体感染LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后建立稳定感染细胞系,real-time PCR、Western blot分别检测感染后各组细胞YAP、AR m RNA和蛋白水平;选取沉默效果最佳sh RNA慢病毒干扰载体组,以细胞增殖/毒性检测(cell counting kit-8,CCK-8)、平板克隆形成实验(colony formation)检测LNCa P细胞增殖能力;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测LNCa P细胞凋亡改变。结果:重组慢病毒成功感染前列腺癌LNCa P细胞,经嘌呤霉素筛选后感染效率达95%以上,获得稳定沉默YAP基因LNCa P细胞系。与空白对照组和阴性对照组比较,感染sh RNA慢病毒干扰载体各组中YAP、AR m RNA及蛋白表达水平明显下调(P=0.000),细胞增殖受到明显抑制(P=0.000),细胞凋亡明显增加(P=0.000)。结论:慢病毒介导sh RNA沉默YAP基因能有效下调YAP在LNCa P细胞中表达,并抑制细胞增殖、诱导细胞凋亡;YAP可能作为AR配体参与AR信号通路的调节。
- 李美材何江吴文强黄亮亮曾强锋曹建佳陈柯宏盛夏李文宾王德林
- 关键词：前列腺癌雄激素受体慢病毒
- shRNA沉默YAP基因对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响被引量：1
- 2014年
- 目的:探讨慢病毒干扰载体沉默Yes-相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)对人肾癌786-O细胞增殖和凋亡的影响。方法:用细胞免疫荧光法检测肾癌786-O细胞中YAP蛋白表达情况;构建针对YAP基因的shRNA慢病毒干扰载体转染786-O细胞。RT-PCR和Western blot分别检测干扰786-O细胞前后YAP mRNA及蛋白的表达情况;CCK-8(cell counting kit-8)法检测沉默YAP后细胞增殖的改变;流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测细胞凋亡和周期的变化。结果:786-O细胞中YAP蛋白表达于细胞浆和细胞核;shRNA-YAP慢病毒干扰载体转染4 d后,可明显下调786-O细胞YAP mRNA及蛋白表达水平(P=0.000),并且明显抑制细胞增殖和促进细胞凋亡(P=0.000);细胞周期紊乱,G1期细胞明显增加,S期细胞明显降低(P=0.000)。结论:YAP-shRNA慢病毒干扰载体能有效抑制YAP基因在786-O细胞中表达,进而抑制细胞增殖并促进细胞凋亡。
- 曹建佳何江李兴森陈柯宏盛夏李文宾李美材黄飚王德林
- 关键词：肾细胞癌RNA干扰慢病毒
- LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响被引量：4
- 2014年
- 目的探讨LATS1基因去甲基化对人肾癌细胞生物学功能及其Hippo-YAP信号通路的影响。方法利用RT-PCR检测人肾透明细胞癌细胞系786-O和人胚肾细胞系HEK-293中Hippo-YAP信号通路大肿瘤抑制基因1(large tumor suppressor gene 1,LATS1)mRNA和下游癌基因Yes-相关蛋白(yes-associated protein,YAP)mRNA的表达水平,用亚硫酸氢盐测序法(bisulfite sequence-PCR,BSP)对LATS1低表达细胞786-O进行甲基化分析,5-氮杂-2脱氧胞苷(5-aza-2'-deoxycytidine,DAC)处理786-O和HEK-293后,用RT-PCR、Western blot检测各组细胞LATS1和YAP的mRNA和蛋白表达水平,流式细胞术检测各组细胞凋亡和周期,CCK-8检测各组细胞增殖抑制情况。结果 786-O较HEK-293 LATS1mRNA表达水平显著降低(P<0.05),YAP mRNA表达水平显著升高(P<0.05),BSP显示LATS1在人肾癌细胞系786-O中高度甲基化;DAC处理786-O后,LATS1 mRNA和蛋白表达水平显著升高(P<0.05),YAP mRNA和蛋白表达水平显著降低(P<0.05),周期停滞在G0/G1期(P<0.05)、细胞增殖受到明显抑制(P<0.05)、细胞凋亡显著增加(P<0.05),而HEK-293组均无明显变化(P>0.05)。结论 LATS1基因去甲基化后下调YAP基因表达,抑制786-O细胞增殖并诱导其凋亡。LATS1基因甲基化在肾癌发生中起重要作用。
- 陈柯宏李兴森何江黄飚曹建佳盛夏李文宾李美材王德林曾强锋黄亮亮
- 关键词：肾细胞癌去甲基化
- 磁珠细胞分选CD 133^+/CD 44^+前列腺癌干细胞的初步鉴定
- 2013年
- 目的:通过磁珠细胞分选(magnetic bead cell sorting,MACS)方法从人前列腺癌细胞系PC-3中分选CD133+/CD44+干细胞,为进一步功能性研究奠定基础。方法:运用流式细胞仪(flow cytometry,FCM)检测MACS分选前后PC-3细胞膜上CD133和CD44表达情况;观察无血清培养成球情况,免疫荧光(immunofluorescence,IF)表达情况;比较细胞在分选前后的形态学、增殖能力方面的差异;免疫组化(immunohistochemistry,IHC)和Western blot检测诱导分化前后前列腺酸性磷酸酶(prostatic acid phos-phatase,PAP)蛋白情况。结果:FCM检测PC-3细胞CD133和CD44的阳性表达分别是(1.33±0.05)%和(0.87±0.06)%,而MACS分选后PAP分别为(84.82±0.07)%和(99.91±0.03)%;IF检测CD133+/CD44+细胞培养后继续呈阳性表达;CD133+/CD44+细胞增殖能力高于PC-3细胞(t=11.0,P=0.008)以及高于诱导后的CD133+/CD44+细胞(t=40.1,P=0.001);CD133+/CD44+细胞经过转化生长因子-β诱导后IHC和Western blot检测PAP表达呈阳性,而未诱导的CD133+/CD44+细胞表达呈阴性。结论:MACS从PC-3细胞株中分选的CD133+/CD44+细胞经过初步功能性鉴定具有干细胞的某些特性,可为前列腺癌干细胞的进一步探索充当铺垫。
- 盛夏王德林李文宾罗照
- 关键词：前列腺癌肿瘤干细胞PC-3CD133CD44
- 腹腔镜与开放性肾部分切除术临床疗效比较的Meta分析被引量：16
- 2013年
- 目的总结腹腔镜下肾部分切除术与开放性肾部分切除术的疗效差异，为临床治疗办案的选择提供循证依据。方法检索CHKD、PUBMED、万方、维普等数据库自建库至2012年6月30日国内外发表的有关腹腔镜下肾部分切除术与开放肾部分切除术疗效比较的临床对照研究相关文献，同时手检纳入文献的参考文献，按纳入排除标准由两人独立进行文献筛选、资料提取和质量评估后，采用RevMan5．1软件进行Meta分析。结果筛选到10篇文献，肾部分切除术患者1636例，其中腹腔镜下手术794例，开放于术842例。Meta分析结果显示：手术时间（SMD=0．10，95％CI-0．40～0．59，P=0．70），手术整体并发症（OR=1．03，95％CI 0．73～1．44，P=0．88），手术切缘阳性（OR=1．64，95％CI 0．83～3．23，P=0．16），术后肿瘤复发情况（OR=0．58，95％CI 0．26～1．30，P=0．18），肾热缺血时间（SMD=1．07，95％CI-0．02～2．16，P=0．05），以上方面两种术式比较差肄尢统计学意义，而在术中失血量（SMD=-1．08，95％CI-1．57～-0．59，P〈0．01）、术后住院时间（SMD=-0．81，95％CI-0．97～-0．65，P〈0．01）等方面比较差异有统计学意义。结论腹腔镜与开放性。肾部分切除术存手术整体并发症、术中肾热缺血时间、手术切缘阳性及术后肿瘤复发情况等方面无明显差异，而腹腔镜手术在术中失血量、术后住院时间方面优于于开放手术。
- 罗照王德林盛夏李文斌
- 关键词：腹腔镜外科手术肾切除术保留肾单位手术META分析
- Yes相关蛋白在前列腺癌中的表达及意义被引量：4
- 2014年
- 目的:探讨Yes相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)在前列腺癌(prostate cancer,PCa)组织、癌旁(pericarcinoma,PC)组织和良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia,BPH)组织中的表达差异及其意义。方法:采用免疫组化技术检测32例PCa,15例PC和15例BPH中YAP的表达情况;采用Western blot技术检测15例PCa和相应PC中YAP的表达水平。结果:32例PCa中YAP阳性表达25例,阳性率为78.13%;15例PC中YAP阳性表达4例,阳性率为26.67%;15例BPH中未发现YAP阳性表达。组间差异有统计学意义(P=0.000);YAP的表达与PCa的临床分期、Gleason评分有关(分别为P=0.019;P=0.012)。临床分期越高,Gleason评分越高,YAP的阳性率越高。Western blot显示15例PCa中YAP表达(0.723±0.084)均高于相应PC(0.455±0.161),差异具有统计学意义(P=0.006)。结论:YAP在PCa中的表达明显高于非肿瘤组织,表现出明显的肿瘤特异性,有望成为PCa临床诊断和治疗的一个新指标。
- 李文宾王德林盛夏刘武江罗照
- 关键词：前列腺癌免疫组化
- CCM联合HCPT对人膀胱癌BIU-87细胞YAP、TEAD1表达及生物学功能的影响被引量：1
- 2016年
- 目的探讨姜黄素(CCM)联合羟基喜树碱(HCPT)对人膀胱癌BIU-87细胞中YAP、TEAD1表达及凋亡的作用。方法 CCM和HCPT分别单独与联合用药处理膀胱癌BIU-87细胞。免疫组织化学检测膀胱癌组织及癌旁组织中YAP和TEAD1表达情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况;RT-PCR和Western blot检测YAP及TEAD1基因的mRNA和蛋白的表达变化。结果 YAP和TEAD在膀胱癌组织及癌旁组织中均有阳性表达,差异有统计学意义(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示CCM和HCPT均可有效诱导膀胱癌细胞BIU-87的凋亡。CCM组和HCPT组BIU-87细胞中YAP及TEAD1mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.05),联合用药组YAP及TEAD1mRNA和蛋白表达更低(P<0.05)。结论 CCM和HCPT联合用药抗癌机制可能是通过抑制Hippo信号通路中YAP癌基因表达,下调TEAD1,并诱导膀胱癌细胞凋亡产生。
- 何江曹建佳陈柯宏王德林盛夏李文宾黄亮亮
- 关键词：羟基喜树碱
