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人CD23基因的亚克隆与部分序列测定: 1995年; 已构建的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因克隆ｐＢＣＤ９７６，以ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ双酶切，回收ＣＤ２３全基因，定向插入ｐＵＣ１８载体，构建ｐＵＣ１８－ＣＤ２３全基因重组体（ｐＵＣＤ９７６）。进一步利用该基因中第３９９位的ＨｉｎｄⅡ酶切点，在ｐＵＣ１８中构建了ＣＤ２３Ｎ端４０３ｂｐ和Ｃ端６０７ｂｐ的二个亚克隆，分别称为ｐＵＣＤ４０３Ｎ和ｐＵＣＤ６０７Ｃ。并对ｐＵＣＤ６０７Ｃ进行测序，最终确认其为ＣＤ２３基因。这将为ＣＤ２３的进一步深入研究提供可靠的物质基础。; 王斌曹丽萍涂裕英吕凌; 关键词：CD23 基因克隆

HCV5＇端非编码区cDNA的体外转录被引量：1: 1996年; 采用逆转录聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）从广东省一例慢性丙型肝炎病人血清中获得丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）５＇端非编码区（５＇ＮＣＲ）３０２ｂｐ的ｃＤＮＡ片段，经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒，获得的重组体ｐＵＮ进行序列测定。将ｐＵＮ的目的基因亚克隆进体外转录载体ｐＳＰＯＲＴＩ多克隆位点的ＥｏｏＲＩ和ＰｓｔＩ切点之间，所得重组体ｐＳＮ线性化后由Ｔ＿７ＲＮＡ多聚酶及ＳＰ６ＲＮＡ多聚酶引导体外转录反应，产物经凝胶电泳及特异引物ＲＴ－ＰＣＲ，证实ＳＰ６引导的是正义ＲＮＡ，Ｔ７合成的是反义ＲＮＡ，其大小分别力４２９ｂｐ和３６２ｂｐ。并证实所得ＲＮＡ力ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ转录而来。获得的ＨＣＶ５＇ＮＣＲｃＤＮＡ和ＲＮＡ在常规逆转录和ＰＣＲ步骤中用于设立有效的模板对照，对消除假用性及评估试剂有重要意义。同时，ＨＣＶ５＇ＮＣＲ体外转录载体的构建可用于制各ＲＮＡ探针和反义ＲＮＡ，改进后还可作为定量ＰＣＲ的竞争性模板。; 李刚姚集鲁彭文伟王斌陈青; 关键词：丙型肝炎病毒分子克隆体外转录 CDNA

HCV5’－NCR序列克隆和转录重组质粒构建被引量：2: 1996年; 选取ＩＶ基因型ＨＣＶ及中国和台湾代表株ＨＣＶ的５’ＮＣＲ区保守序列合成引物，以ＲＴ－ＰＣＲ从输血后非甲非乙型肝炎病人血浆中扩增一段３００ｂｐ的ｃＤＮＡ片段作目的基因，钝端插入ｐＵＣ１９的ＳｍａＩ切点，构建了ｐＵＨＣＶ－ＮＣ重组质粒。对ｐＵＨＣＶ－ＮＣ分别或混合应用ＨＣＶ序列特异的内外引物和载体序列特异的通用引物进行ＰＣＲ扩增，所用产物分子量均同预期相符；酶切分析查出ＨＣＶ基因所带有和克隆位点融合所产生的两个外源ＮｃｏＩ切点也存在；证实ｐＵＨＣＶ－ＮＣ中克隆基因是ＨＣＶ的５’ＮＣＲ序列且插入方向为反向。应用ＢａｍＨＩ和ＥｃｏＲＩ双切出克隆ＨＣＶ基因，粘端插入ｐＳＰ７２的多克隆位点，均建了ｐＳＨＣＶ－ＮＣ转录重组体，对之进行了ＰＣＲ和酶切鉴定。; 吕凌王斌; 关键词：丙型肝炎病毒克隆聚合酶链反应

人白细胞介素—10基因探针的制备及应用: 1997年; 本文应用ＲＴ－ＰＣＲ技术扩增出人ｈＩＬ－１０ｃＤＮＡ６１０ｂｐ基因片段，将此片段插入ｐＵＣ１８质粒中，经电泳检测和序列分析证实，扩增片段和发表序列一致酶切电泳回收纯化片段，地高辛随机引物标记，制备了ｈＩＬ－１０基因探针，应用斑点杂交检测了探针的灵敏度和特异性，结果表明该基因探针具有特异性强，灵敏度高，应用方便等特点，初步用于细胞系及ＥＢ病毒阳性的淋巴瘤组织中ｈＩＬ－１０ｍＲＮＡ表达的检测。; 张月梅王斌; 关键词：RT-PCR 淋巴瘤杂交

HCV 广东株5’NCRc DNA的克隆及序列测定: 1997年; 从广东省１例慢性丙型肝炎病人血清中提取ＨＣＶＲＮＡ，随机引物逆转录为ｃＤＮＡ后用ＨＣＶ５’端非编码区（５’ＮＣＲ）特异引物进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。扩增产物３０２ｂｐ，经补齐和提纯后插入ｐＵＣ１９质粒，获得的重组质粒ｐＵＮ采用双脱氧链终止法测定核苷酸序列，与国内外多个株比较，核苷酸同源性介乎９２．６９％～１００％，其中与ＨＣＶⅡ（１ｂ）型的同源性最大。本文的测序结果可为引物设计提供依据。获得的ＨＣＶｃＤＮＡ在常规ＰＣＲ步骤中用于设立有效的模板对照，对消除假阴性及评估试剂有重要意义。; 李刚姚集鲁彭文伟王斌吕凌; 关键词：丙型肝炎病毒 CDNA

人淋巴瘤细胞系（HTL－90）的建立及其生物学特性被引量：1: 1996年; 人淋巴瘤细胞系（ＨＴＬ－９０）建于一例患有盆腔肿瘤的腹水瘤细胞，瘤组织经细胞学和组织学确定为恶性淋巴瘤，并命名为ＨＴＬ－９０。利用免疫组织化学、细胞遗传学以及分子遗传学手段对ＨＴＬ－９０细胞系的免疫表型、细胞核型及Ｔ－细胞受体基因重排，进一步分析鉴定发现ＨＴＬ－９０细胞系免疫表型显示ＣＤ７＋／ＣＤ３４＋／ＨＬＡＤＲ＋／ＣＤ４－／ＣＤ８－表明本细胞系是具有多种分化潜能的祖干细胞来源，并具有向Ｔ细胞分化的倾向。细胞遗传学分析显示细胞核型表现为染色体众数为４７，并呈克隆性染色体异常。综合文献复习提出ｄｅｌ（６）及１１ｑ２３－２４部位染色体异常可能是低度分化的淋巴肿瘤特征性染色体改变。ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ分析显示ＲＣＲ受体基因（ＴＣＲγ和ＴＣＲδ）和免疫球蛋白重链（ＩｇＨ）基因发生重排，ＴＣＲβ基因保持胚系结构。; 张月梅王斌王吾如; 关键词：T细胞淋巴瘤细胞培养细胞遗传学

构建人CD23及其反义RNA的逆转录病毒表达重组体: 1996年; 利用ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因克隆ｐＵＣＤ９７６，分别以限制性内切酶ＥｃｏＲＩ和ＸｂａＩ酶切该重组质粒ＤＮＡ，回收１．０ｋｂ的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因、ＨｉｎｄⅢ酶切后回收３’端６０７ｂｐ的结合区段基因以及ＥｃｏＲⅠ和ＨｉｎｄⅡ酶切回收５’端４０３ｂｐ的调控区段基因。将各回收片段先以Ｋｌｅｎｏｗ酶补平后，插入已补平的ｐＺＩＰ逆转录病毒载体ＢａｍＨⅠ单切点，利用地高辛素标记的ＣＤ２３ｃＤＮＡ全基因探针，以斑点核酸杂交筛选逆转录病毒重组体，结合用限制性内切酶ＢａｍＨＩ和／或ＢｇｌⅡ酶切鉴定插入方向，最终获得正、反向插入的ＣＤ２３全基因－逆转录病毒重组体各２个，反向插入３’端和５’端部分基因片段的重组体分别为４个和１个。为进行ＣＤ２３反义ＲＮＡ的研究和真核表达ＣＤ２３提供了可靠的物质基础。; 王斌曹丽萍杨斌涂裕英; 关键词：RNA 核酸杂交逆转录病毒

人白细胞介素17基因的克隆及序列测定: 1998年; 应用逆转录多聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）技术，参照国外发表的人白细胞介素１７（ｈＩＬ－１７）ｃＤＮＡ全基因序列，利用自行设计合成的１对引物，从ＰＨＡ活化的正常人外周血单个核细胞中，扩增出ｈＩＬ－１７ｃＤＮＡ基因，并定向插入ｐＵＣ１８载体，构建了ｈＩＬ－１７基因重组体，经ＤＮＡ序列测定，确认为ｈＩＬ－１７基因，这为今后进一步研究ｈＩＬ－１７的生物学功能提供可靠的物质基础。; 杨斌王斌冯炼强任秀容李树浓; 关键词：白细胞介素17 分子克隆

含MDR基因的人乳腺癌MCF 7/pZMDR多药耐药细胞株的构建: 1998年; 目的：肿瘤细胞的多药抗药性（ＭＤＲ）是化疗失败的主要原因之一，Ｐ－糖蛋白高表达是ＭＤＲ的主要机制，逆转ＭＤＲ成为肿瘤治疗亟待解决的问题。目前用于研究抗药性和筛选逆转抗药性药物的模型较少，本实验拟构建多药抗药性细胞株。方法：采用基因工程技术，重组ＭＤＲ１基因ｃＤＮＡ于逆转录病毒载体ｐＺＩＲ－ＮｅｏＳＶ（Ｘ）的克隆位点，并用脂染胺（ｌｉｐｏｆｅｃｔＡＭＩＮＥ）介导的ＤＮＡ转移技术，将其转入包装细胞ＰＡ３１７中，收集含病毒子的培养上清液感染对药物敏感的人乳癌细胞株ＭＣＦ－７，经筛选培养基筛选，ＰＣＲ、免疫组化及阿霉素在细胞内的分布等实验。结果：含ＭＤＲ基因的逆转录病毒载体ｐＺＭＤＲ的构建方法证明是正确的，ＭＤＲ１ｃＤＮＡ已整合在染色体基因组中并表达Ｐ－糖蛋白。; 汪雪兰王斌潘启超; 关键词：多药耐药细胞株 MDR基因基因转移乳腺癌

丙型肝炎病毒基因高变区（E1，E2／NS1）的分子克隆及基因型鉴定被引量：1: 1995年; 对广东省一个患者血清中的丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因高变区进行分子克隆及基因型鉴定。采用微粒吸附法提取ＨＣＶＲＮＡ，随机引物逆转录后进行聚合酶链反应（ＰＣＲ）。所用引物位于Ｅ１，Ｅ２／ＮＳ１区，扩增产物８０６ｂｐ，产物提纯后定向插入ｐＢＶ２２０质粒载体，重组体转染ＤＨ５α菌株，筛选菌落经增殖后碱变性法提取质粒，再通过ＰＣＲ及酶切法鉴定阳性克隆。我们还用酶切法对此株克隆的基因型作了初步鉴定，证明属于１组Ⅱ型。; 李刚姚集鲁彭文伟王斌吕凌; 关键词：丙型肝炎病毒基因分子克隆

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王斌

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