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曹丽萍
作品数:
4
被引量:8
H指数:1
供职机构:
中山医科大学
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发文基金:
国家自然科学基金
广东省重点攻关基金
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相关领域:
医药卫生
生物学
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合作作者
王斌
暨南大学医学院
涂裕英
中山医科大学
郁知非
暨南大学医学院
吕凌
中山医科大学
杨斌
中山医科大学
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机构
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中山医科大学
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作者
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曹丽萍
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传媒
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1篇
中山医科大学...
1篇
中华血液学杂...
年份
1篇
1998
1篇
1996
1篇
1995
1篇
1994
共
4
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构建人CD23及其反义RNA的逆转录病毒表达重组体
1996年
利用CD23cDNA全基因克隆pUCD976,分别以限制性内切酶EcoRI和XbaI酶切该重组质粒DNA,回收1.0kb的CD23cDNA全基因、HindⅢ酶切后回收3’端607bp的结合区段基因以及EcoRⅠ和HindⅡ酶切回收5’端403bp的调控区段基因。将各回收片段先以Klenow酶补平后,插入已补平的pZIP逆转录病毒载体BamHⅠ单切点,利用地高辛素标记的CD23cDNA全基因探针,以斑点核酸杂交筛选逆转录病毒重组体,结合用限制性内切酶BamHI和/或BglⅡ酶切鉴定插入方向,最终获得正、反向插入的CD23全基因-逆转录病毒重组体各2个,反向插入3’端和5’端部分基因片段的重组体分别为4个和1个。为进行CD23反义RNA的研究和真核表达CD23提供了可靠的物质基础。
王斌
曹丽萍
杨斌
涂裕英
关键词:
RNA
核酸杂交
逆转录病毒
用PCR技术建立CD23全基因的无性繁殖系
被引量:1
1994年
参照国外已发表的CD23cDNA全基因序列,自行设计并合成一对DNA引物(25mer和18mer),以CD23阳性细胞株HFBd2/3DNA为模板,应用PCR技术,成功地扩增了CD23cDNA全基因(987bp,含人工设计的酶切点),并定向克隆入原核表达载体pBV220,构建了pBv220-CD23全基因重组体,经6种限制性内切酶酶切鉴定,结果与已发表序列的酶切图谱完全一致,初步证实为CD23全基因。这将为今后CD23基因的序列测定和表达,进一步在基因水平上探讨CD23的生物学功能提供了物质基础。
王斌
曹丽萍
涂裕英
关键词:
CD23
CDNA
聚合酶链反应
人CD23基因的亚克隆与部分序列测定
1995年
已构建的CD23cDNA全基因克隆pBCD976,以EcoRI和BamHI双酶切,回收CD23全基因,定向插入pUC18载体,构建pUC18-CD23全基因重组体(pUCD976)。进一步利用该基因中第399位的HindⅡ酶切点,在pUC18中构建了CD23N端403bp和C端607bp的二个亚克隆,分别称为pUCD403N和pUCD607C。并对pUCD607C进行测序,最终确认其为CD23基因。这将为CD23的进一步深入研究提供可靠的物质基础。
王斌
曹丽萍
涂裕英
吕凌
关键词:
CD23
基因克隆
MRP基因定量RT-PCR内标准DNA模板和RNA模板的构建
被引量:7
1998年
目的:构建定量逆转录聚合酶链反应(RTPCR)的内标准DNA模板和RNA模板,定量检测多药耐药相关蛋白(MRP)基因表达的mRNA。方法和结果:利用现有的MRP全基因质粒和分子克隆技术经2次克隆将庚型肝炎病毒的一段238bp的核苷酸序列插入MRP292bp的目的cDNA片段,构建了插入突变型MRPcDNA重组体作为定量PCR的DNA竞争模板;再经第3次克隆构建了插入突变型MRPRNA重组体,最后经体外转录出530nt的正链RNA作为逆转录的RNA竞争模板。结论:所建立的RTPCR技术简便、快速、灵敏,可检出1fg水平的mRNA量。用DNA竞争模板定量检测比用RNA竞争模板更简便、经济、可靠。
曹丽萍
曹丽萍
王斌
关键词:
多药耐药基因
RT-PCR
白血病
DNA模板
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