王东洋
- 作品数：7 被引量：2H指数：1
- 供职机构：徐州医学院附属医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 促Treg细胞生成及活化重组分子的构建与表达
- 2011年
- 本研究旨在构建促Treg细胞生成及活化的重组分子的原核表达载体,并鉴定其表达。应用RT-PCR获得人TGF-β1及HIV被膜蛋白gp120的C2-C4区基因并将其克隆至pCR2.1 T载体,酶切制备人TGF-β1及C2-C4区DNA片段,通过PCR定向连接两目的片段至原核表达载体pET-28a,生成pET-28a/C2-C4-Linker-hTGF-β1,转染E.coli BL21(DE3)感受态细胞,使用0.1 mmol/L的IPTG诱导蛋白表达,以Western blot方法鉴定表达结果。结果表明,成功扩增人TGF-β1及C2-C4区基因并分别克隆入pCR2.1-T载体,经亚克隆构建了重组蛋白的原核表达质粒pET-28a/C2-C4-Linker-hTGF-β1,并转染E.coli BL21(DE3)感受态细胞获得工程菌株,通过IPTG诱导,重组蛋白以包涵体形式获得表达。结论:本研究成功构建促Treg细胞生成及活化的重组分子的原核表达载体,并获得原核表达。
- 张倩齐共健王东洋张建军陈翀曾令宇徐开林
- 关键词：调节性T细胞原核表达重组蛋白
- 表达红色荧光蛋白的小鼠淋巴瘤EL4细胞株的建立及鉴定
- 2010年
- 本研究通过慢病毒载体将红色荧光蛋白(DsRed)导入小鼠淋巴瘤EL4细胞,建立稳定高表达DsRed的EL4/DsRed细胞株,为建立携带红色荧光标记的小鼠肿瘤模型奠定基础。构建含新霉素耐药基因(neo)、内部核糖体进入位点序列(IRES)及DsRed的双顺反子自身失活型慢病毒载体。采用脂质体转染法将慢病毒三质粒包装系统共转染人胚肾细胞系293FT包装细胞,收集病毒上清,感染EL4细胞;利用G418的药物选择特性筛选感染细胞获得稳定表达DsRed的EL4细胞株,并扩大培养。结果表明:成功构建慢病毒表达质粒pXZ208-neo-IRES-DsRed,包装的重组慢病毒滴度可达106U/ml。病毒感染EL4细胞,经终浓度为600μg/ml的G418成功筛选出稳定携带DsRed的EL4/DsRed细胞株;荧光显微镜观察及流式细胞仪检测证实该细胞株长期稳定高表达DsRed。结论:通过表达DsRed的慢病毒载体感染EL4细胞,获得了稳定高表达DsRed的EL4/DsRed细胞株。
- 李艳杰曹江陈翀王东洋曾令宇潘秀英徐开林
- 关键词：慢病毒载体DSRED淋巴瘤
- 一种新型免疫调节蛋白及其制备和应用
- 本发明提供一种新型免疫调节蛋白及其制备方法和应用，属于生物技术领域。该蛋白为人类免疫缺陷病毒膜分子gp120功能域C2-C4部分的重组分子，本发明的pC2-C4能同细胞表面分子CD4分子相结合，激活和增强外周血静止CD4...
- 曾令宇徐开林曹江陈翀齐共健王东洋张倩张建军李振宇程海闫志凌桑威李德鹏
- 文献传递
- 鼠VEGF红色荧光慢病毒载体的构建及其在293T细胞中的表达被引量：2
- 2010年
- 目的构建含鼠血管内皮细胞生长因子(mVEGF)红色荧光慢病毒载体,鉴定其在293T细胞中的表达。方法构建含mVEGF和红色荧光蛋白(DsRed)基因双顺反子重组慢病毒质粒;采用脂染法将慢病毒系统三质粒共转染293T细胞,转染后24 h和48 h荧光显微镜下观察DsRed表达,收集48 h和72 h病毒上清并感染靶细胞239T,荧光显微镜下观察DsRed表达情况,并行Western blot分析培养上清和胞浆内mVEGF表达。结果成功构建慢病毒表达质粒pTK208-mVEGF-IRES-DsRed,重组慢病毒滴度达5×106PFU/mL,并获得蛋白DsRed和mVEGF的表达。结论含mVEGF红色荧光慢病毒质粒成功介导mVEGF蛋白的表达,该载体有望为研究VEGF的病理生理学机制及基因靶向治疗提供有效的工具。
- 王东洋贾路陈翀李艳杰曾令宇
- 关键词：慢病毒载体血管内皮细胞生长因子红色荧光蛋白293T细胞
- 红色荧光蛋白标记的小鼠白血病模型的建立
- 2010年
- 目的 利用红色荧光蛋白（DsRed）标记的小鼠淋巴瘤EL4细胞株,建立荧光标记的小鼠白血病模型,并对模型进行分析和鉴定.方法 将EL4/DsRed细胞以低剂量（5×10^2/只）、中剂量（5×10^3/只）、高剂量（2.5×10^4/只）经尾静脉注入经清髓照射的C57BL/6小鼠体内,同时接种骨髓细胞5×10^6/只,采用流式细胞术（FCM）、反转录聚合酶链反应（RT-PCR）、组织病理等方法鉴定小鼠成模情况.结果 C57BL/6小鼠接种不同剂量EL4/DsRed细胞后白血病发病率达100%,移植后第2周FCM示受鼠肝、脾、骨髓和外周血中有大量EL4/DsRed细胞;各组组织器官病理检查呈现出不同程度的肿瘤细胞浸润.结论 用DsRed标记的EL4细胞以5×10^2/只植入C57BL/6小鼠,即可成功建立荧光标记的小鼠白血病模型,可为白血病发病机制、微小残留病检测等研究提供有价值的动物模型.
- 陈翀李艳杰曹江王东洋曾令宇潘秀英徐开林
- 关键词：荧光抗体技术
- 人类免疫缺陷病毒膜分子gp120功能域与人TGF-β1的重组分子
- 本发明提供一种人类免疫缺陷病毒膜分子gp120功能域与人TGF-β1的重组分子及其制备方法和应用，属于生物技术领域，该分子由gp120 C2-C4区通过一段柔性连接片段(linker)与人成熟转化生长因子β1(hTGF-...
- 徐开林曾令宇王东洋陈翀曹江桑威张建军齐共建张倩李振宇
- 文献传递
