柏佳宁
- 作品数：10 被引量：27H指数：4
- 供职机构：河北师范大学生命科学学院更多>>
- 发文基金：河北省自然科学基金河北省教育厅自然科学基金河北省科技攻关计划更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- 表达ST1-LTB-α-β融合蛋白基因工程菌株的构建及其免疫原性分析被引量：3
- 2008年
- 采用分子生物学技术构建了含有ST1-LTB-α-β融合基因的重组菌株BL21(DE3)(pETST3LTBαβ),SDS-PAGE和Western blotting分析表明ST1-LTB-α-β融合基因在大肠杆菌中得到了高效表达,融合蛋白分子量约为110kD;20L发酵罐培养得到的最佳诱导条件为:重组菌株以1%接种量、5L/min通气量培养3h后加终浓度为0.03mol/L的乳糖诱导,通气量升至12.5L/min继续培养6h,表达量占菌体总蛋白的38.53%;表达的ST1-LTB-α-β融合蛋白无毒性但具有免疫原性,可以抵抗大肠杆菌和产气荚膜梭菌的感染;构建的重组菌株BL21(DE3)(pETST3LTBαβ)有望作为预防仔猪腹泻基因工程疫苗的候选生产菌株。
- 宋杰钱明明柏佳宁赵宝华
- 关键词：仔猪腹泻保护性抗原基因工程菌株免疫原性
- 鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的克隆及其在耻垢分枝杆菌中的表达被引量：4
- 2004年
- 以ILTV基因组为模板 ,利用PCR特异扩增出gB基因 ,定向克隆到中间质粒载体pY_α ,构建了中间质粒pY_α_gB。然后以中间质粒pY_α_gB为模板 ,扩增出含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的hsp_α_gB片段 ,回收补平后与穿梭表达载体pRR3平端连接 ,从而构建大肠杆菌_分枝杆菌穿梭表达质粒pR_α_gB。再将其电转化至耻垢分枝杆菌M .smegmatismc2 15 5 ,ELISA检测表明重组菌株M .smegmatismc2 15 5 (pR_α_gB)的表达产物具有很好的反应原性。Westernblot检测说明gB基因在分枝杆菌中获得了表达并具有良好的免疫原性。鸡胚中和试验结果表明该重组菌株可以中和 1个剂量EID50 的ILTV强毒 。
- 郑海洲杨虹柏佳宁赵宝华
- 关键词：聚合酶链式反应克隆穿梭表达载体
- 人热休克蛋白70基因的克隆、表达及鉴定被引量：1
- 2007年
- 目的克隆人热休克蛋白70(HSP70)基因,构建其原核高效表达载体。方法将PCR扩增的HSP70基因克隆到原核高效表达载体pET-28b中,转化大肠杆菌JM109。挑选阳性克隆,提取质粒pE28b70F,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达目标蛋白。结果在大肠杆菌中成功表达了HSP70,表达量约占细菌总蛋白的22·3%,其中可溶性目标蛋白占上清总蛋白的12%。Westernblot表明该目标蛋白具有与鼠抗人HSP70单抗特异结合的抗原活性。通过Ni2+-NTA亲和柱,从1L诱导产物中纯化出约1520mg重组蛋白,纯度在80%以上。结论已成功表达HSP70,为进一步研究其生物学功能和作用机制奠定了基础。
- 胡慧中柏佳宁张静何宏轩段明星
- 关键词：热休克蛋白基因克隆原核表达
- NDV HeB02分离株的生物学特性及其F基因的克隆与序列测定被引量：7
- 2004年
- 对河北省新城疫分离株HeB0 2的生物学特性进行了鉴定 ,根据国外已发表的新城疫病毒F基因序列 ,设计了一对引物并以RT PCR特异性扩增出HeB0 2分离株的F基因 ,基因产物大小为 1 63kb ,与设计相符 ,对其进行序列测定后 ,与其它标准毒株F48E9、LaSota和Clone30的F基因进行同源性比较 ,结果表明 ,HeB0 2株与国内标准强毒株F48E9及目前广泛应用的弱毒疫苗LaSota和Clone30的F基因核苷酸序列的同源性分别为 88 1 %、84 9%和 83 8%,由此可以看出HeB0 2分离株与标准毒株和疫苗株在F基因上发生了变异。
- 孙一敏于秀俊柏佳宁孙继国赵宝华
- 关键词：新城疫生物学特性F基因
- 河北省仔猪黄白痢流行病学调查及致病菌的分离与鉴定被引量：4
- 2007年
- 仔猪黄白痢是危害养猪业的一种常见疾病.通过对河北省不同地区17家猪场的走访调查,探讨仔猪黄白痢大规模爆发的原因和防治对策,并从某猪场发病仔猪的排泄物中分离得到1株菌,经形态学、生物化学和分子生物学实验鉴定,该分离株为革兰氏阴性菌,克氏三糖铁培养产酸产气,LTB与M17873核苷酸序列同源性为100%,该菌株确定为产肠毒素型大肠杆菌.
- 宋杰柏佳宁赵宝华
- 关键词：仔猪黄白痢伤亡率LTB基因同源性
- 新城疫病毒HeB02分离株F基因的序列分析被引量：2
- 2005年
- 根据国外已发表的新城疫病毒 F基因序列 ,设计了 1对引物 ,并以 RT- PCR特异性扩增出新城疫病毒 He B0 2分离株的 F基因 ,基因产物大小为 1.6 3kb,与设计相符。对其进行序列测定后 ,与其他标准毒株 F4 8E9、L a Sota和Clone30的 F基因进行了同源性比较 ,结果表明 ,He B0 2株与国内标准强毒株 F4 8E9及目前广泛应用的弱毒疫苗株L a Sota和 Clone30的 F基因核苷酸序列的同源性分别为 88.1%、84 .9%和 83.8%。由此可以看出 ,He B0 2分离株与标准毒株和疫苗株相比 ,在
- 孙一敏边艳青柏佳宁孙继国赵宝华
- 关键词：F基因新城疫病毒分离株强毒株弱毒疫苗株基因产物
- 鸡传染性支气管炎X毒株S1基因的克隆与真核表达被引量：1
- 2006年
- 根据G enB ank中报道的鸡传染性支气管炎病毒(IBV)S1基因序列,设计了1对引物,克隆了IBV强毒株X的S1基因,基因大小为1.62 kb。将其导入真核表达载体系统pIRES1neo中,表达蛋白为61 000。
- 柏佳宁马同锁赵宝华
- 关键词：鸡传染性支气管炎病毒S1基因基因克隆
- 预防仔猪腹泻基因工程菌株的构建
- 由产肠毒素型大肠杆菌引起的仔猪黄白痢和由魏氏梭菌引起的仔猪红痢是影响猪体健康的常见疾病，可严重影响仔猪的存活率和出栏率，给养猪业造成了巨大的经济损失。
本文采用微生物分离方法从栾城县某养猪场患病仔猪的粪便中分离...
- 柏佳宁
- 关键词：大肠杆菌魏氏梭菌仔猪腹泻基因工程菌
- 文献传递
- 肾型IBVS1基因重组BCG菌株的构建及其免疫原性研究被引量：3
- 2007年
- S1基因是传染性支气管炎病毒(IBV)的主要保护性抗原基因,应用RT-PCR技术特异地扩增嗜肾型传染性支气管炎病毒X株的S1基因,经序列分析证实为S1基因,将其连接到含有人结核分枝杆菌启动子hsp70基因和堪萨斯分枝杆菌α信号肽基因的表达载体pRR3上,从而构建了大肠杆菌-分枝杆菌穿梭表达质粒pR-α-S1,再电转化至BCG中,形成重组菌株rBCG-S1。热激后S1蛋白在耻垢分枝杆菌M.smegmatismc2155中高效表达,并且通过ELISA和Western blot检测能够被抗IBVS1蛋白的单克隆抗体识别。将106CFU的重组菌株rBCG-S1皮下注射免疫6周龄的SPF鸡,动物保护试验结果表明重组菌株rBCG-S1对鸡具有一定的免疫保护效果,能够保护SPF鸡抵抗IBVX毒株强毒攻击。血凝抑制试验表明血凝抑制抗体滴度能够显著增加。构建的重组菌株为今后开发新型鸡传染性支气管炎基因工程弱毒疫苗奠定了基础。
- 柏佳宁边艳青赵宝华
- 关键词：鸡传染性支气管炎
- 鸡传染性喉气管炎病毒gB基因的克隆及其原核表达被引量：4
- 2005年
- 根据鸡传染性喉气管炎病毒(ILTV)的gB基因序列和表达载体pBV221的多克隆位点,设计了1对引物。以ILTV疫苗株基因组为模板,应用PCR扩增出gB基因片段,然后将其定向克隆于原核表达载体pBV221中,构建了重组质粒pBV-gB。重组质粒转化到受体菌DH5α中,得到阳性重组菌株DH5α(pBV-gB)。该菌株在温控诱导下,SDS-PAGE电泳可见表达的特异蛋白。ELISA检测证明,表达的蛋白具有较好的反应原性。
- 郑海洲柏佳宁边艳青赵宝华
- 关键词：鸡传染性喉气管炎病毒原核表达GB基因SDS-PAGE电泳B基因序列ILTV
