杨廷佳
- 作品数：7 被引量：17H指数：2
- 供职机构：扬州大学兽医学院更多>>
- 发文基金：江苏省科技支撑计划项目国家科技重大专项国家自然科学基金更多>>
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- 利用体细胞核移植技术生产人乳铁蛋白转基因克隆羊的研究
- 本研究是在建立一个以山羊代表家畜、以乳腺为靶器官、人乳铁蛋白为表达产物的家畜转基因体系，以期获得人乳铁蛋白转基因克隆山羊，为高品质转基因奶山羊新品系的创制提供育种材料。
- 袁玉国安礼友杨廷佳于宝利成勇
- 关键词：体细胞核移植人乳铁蛋白山羊转基因克隆
- 文献传递
- 单、双标记基因筛选的转人乳铁蛋白基因供核细胞生产克隆山羊效率的比较被引量：2
- 2012年
- 为比较两种筛选标记基因生产转人乳铁蛋白(hLF)基因克隆山羊的效率,利用单(新霉素抗性基因,Neor)、双(新霉素抗性和绿色荧光蛋白基因,Neor/GFP)标记基因筛选转基因的供核细胞,并制作体细胞核移植转基因山羊。山羊胎儿成纤维细胞电转染单标记基因表达载体(pBLC14)或双标记基因表达载体(pAPLM),分别有58.8%(20/34)和86.7%(26/30)的抗性细胞株检测到外源基因;转染pAPLM的细胞传代培养后,仅有20%(6/30)株细胞在传代中所有细胞均能观察到荧光;分别以pBLC14和pAPLM的细胞株作为供核细胞进行体细胞核移植,共获得806枚重构胚胎,胚胎移植受体后35 d、60 d妊娠率分别为53.8%、26.9%和39.1%、21.7%,最终分别产下5只(1.9%)和7只(1.4%)克隆山羊;经PCR及Southern blotting检测,所有出生山羊均整合有外源基因。结果显示,以单、双标记基因筛选供核细胞,其重构胚融合率、怀孕率和克隆动物出生率差异不显著(P>0.05),Neor/GFP双标记基因能准确、有效地用于转基因供核细胞筛选。同时,结果也表明Neor/GFP双标记基因转染的体细胞作为供核细胞对体细胞克隆效率未出现不利影响。
- 安礼友袁玉国于宝利杨廷佳成勇
- 关键词：供核细胞人乳铁蛋白细胞核移植
- 含双筛选基因的人乳铁蛋白乳腺特异表达载体的构建及其表达
- 为提高表达构件的表达水平和表达稳定性,采用CMV组成型启动子和牛αs1-CSN基因调控元件组成双启动子调控元件.为检验其表达状况,在上述调控元件中插入hLF cDNA,组成重组构件pbCNCS/LF36,为便于后续体细胞...
- 袁玉国安礼友杨廷佳于宝利赵俊辉曹玉娟成勇
- 关键词：人乳铁蛋白双启动子小鼠胎儿成纤维细胞荧光蛋白
- 文献传递
- 利用乳腺上皮细胞生产转fat-l基因克隆羊的研究
- 本研究以转基因乳腺上皮细胞为供核细胞进行了7次核移植实验，共超排了28只供体山羊，将165枚卵移植到17只受体中，到期1只受体出生了1只转fat-1基因克隆羊，另有1只受体待产。在9只妊娠的受体中，有5只羊在妊娠至中后期...
- 袁玉国于宝利杨廷佳安礼友成勇
- 关键词：核移植乳腺上皮细胞
- 不同FSH剂量·季节和重复超排对山羊超数排卵的影响被引量：10
- 2011年
- [目的]研究不同FSH剂量、季节和重复超排等因素对供体羊超排效果的影响,为扬州地区进一步做好山羊胚胎移植和胚胎生物工程研究提供必要的数据。[方法]设计不同FSH剂量(240 IU和300 IU)、季节(10～12月份和4～6月份)、重复超排(第1次和第2次),鉴定超排效果。[结果]FSH 240 IU和300 IU组的平均排卵点和可用胚数分别为10.12个、8.82枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);在4～6月份和10～12月份的平均排卵点和可用胚数分别为9.05个、7.05枚和15.55个、13.15枚,2组间平均排卵点和可用胚数差异显著(P<0.05);供体使用1次和2次的超排效果差异不显著(P>0.05)。[结论]FSH剂量、季节因素对超排效果影响显著,供体重复使用对超排效果影响不显著。
- 袁玉国安礼友于宝利杨廷佳成勇
- 关键词：超数排卵山羊FSH
- 含双筛选基因的人乳铁蛋白乳腺特异表达载体的构建及其表达
- 为提高表达构件的表达水平和表达稳定性，本文采用CMV组成型启动子和牛as1-CSN基因调控元件组成双启动子调控元件。为检验其表达状况，在上述调控元件中插入hLFcDNA，组成重组构件pbCNCS/LF36，为便于后续体细...
- 袁玉国安礼友杨廷佳于宝利赵俊辉曹玉娟成勇
- 关键词：人乳铁蛋白双启动子动物模型胎儿成纤维细胞荧光蛋白
- 文献传递
- 人乳铁蛋白乳腺特异性表达载体的构建及其功能的验证被引量：6
- 2011年
- 构件pbCNCS/LF36经微注射获得转基因小鼠,同时为了准确筛选出整合的单克隆细胞,增加1个Cre/LoxP-GFP-Neo系统构建成pAPLM,将其转染山羊胎儿成纤维细胞筛选阳性细胞。结果表明:小鼠受体妊娠率28.5%,产仔32个,PCR整合检测4只阳性(3♀、1♂,整合率12.5%)。构件产生的3只母鼠和4号后代母鼠乳汁中重组人乳铁蛋白(hLF)用ELISA方法检测,表达量分别为3.8、2.8、0.9mg.mL-1,4号后代3只母鼠表达量分别为4.2、3.9、3.6mg.mL-1。构件pAPLM片段转染细胞后,经G418筛选,挑取单克隆扩大培养,其中8株PCR阳性克隆细胞荧光显微镜观察100%都有GFP的表达。以上结果证实,双启动子能调控外源基因在乳腺中特异高水平表达hLF,双标记基因可提高筛选阳性供核细胞的准确性,这为进一步作体细胞转基因克隆奠定基础。
- 袁玉国安礼友于宝利杨廷佳成勇
- 关键词：人乳铁蛋白双启动子小鼠胎儿成纤维细胞荧光蛋白
