於葛华
- 作品数：92 被引量：302H指数：10
- 供职机构：苏州大学医学部免疫学系更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划江苏省社会发展科技计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 共刺激分子4-1BBL和B7-1对人T淋巴细胞的协同激发作用被引量：2
- 2003年
- 目的 :探讨 4 1BBL和B7 1这 2种共刺激分子在人外周血T淋巴细胞活化、增殖中的作用和机制。方法 :采用免疫磁珠阴性选择方法分离纯化人外周血T淋巴细胞 ;单向混合淋巴细胞反应 (MLR)分析共刺激分子对T细胞的激发作用 ;3H TdR掺入法测定细胞增殖 ;免疫荧光标记和流式细胞仪表型分析 ;ELISA检测细胞因子。结果 :经免疫磁珠阴性选择分离获外周血单个核细胞中的T细胞纯度 >90 %;人多发性骨髓瘤细胞株 (XG细胞 )转染 4 1BBL和B7 1cDNA后 ,细胞膜表面能稳定高表达这 2个分子 ,4 1BBL和B7 1转基因细胞也均能使同种异体T细胞发生活化、增殖、存活时间延长和介导细胞因子IL 2的分泌 ,且 2种共刺激分子具有一定的协同效应。结论 :4 1BBL和B7 1分子具有赋予XG细胞对T细胞的体外激发、促增殖和分泌IL 2的作用 ,4 1BBL和B7 1分子能产生协同效应。
- 沈丽琴徐颖邓忠彬於葛华张学光
- 关键词：共刺激分子4-1BBLB7-1人T淋巴细胞
- ITP患儿外周血免疫调节分子与临床的相关性
- 2007年
- 目的探讨共信号分子CD154、CD69在儿童ITP发病机制中的作用。方法采用免疫荧光流式术检测28例ITP儿童治疗前外周血CD4+T细胞表面CD154、CD69的表达。结果CD4+T细胞表面CD154的表达率为16.7%±8.1%,明显高于健康儿童CD4+T细胞CD154的表达(4.3%±2.9%),两者之间差异显著(P<0.05)。CD4+T细胞表面CD69的表达率为13.9%±7.1%,显著高于健康儿童CD69的表达(5.8%±2.9%),两者有显著差异(P<0.05)。结论细胞表面CD154水平的测定可以为ITP的辅助诊断、疗效估价和预后判断提供有价值的实验室参数。
- 谢秋徐敏樊一笋黄益萍於葛华殷昌硕张学光
- 关键词：ITP患儿免疫调节分子外周血CD4^+T细胞CD154CD69
- 人TACI-Fc融合蛋白对XG6细胞体外生长的调节作用被引量：1
- 2005年
- 目的建立人TACI-Fc基因转染细胞,获得该融合蛋白,研究其对多发性骨髓瘤细胞系XG6的生物学作用。方法利用RT-PCR方法从扁桃体细胞中克隆全长TACI cDNA片段,将该基因的胞外段sTACI与人IgG1Fc段连接到pcDNA真核表达载体上,使两者融合表达。脂质体法将重组质粒pcDNA-sTACI-Fc转入小鼠成纤维细胞系L929,ELISA法测定转染TACI-Fc基因的L929细胞培养上清中TACI2Fc的含量,培养上清经亲和层析柱纯化,获得纯化的融合蛋白TACI-Fc。然后应用台盼蓝染色活细胞计数和3H2TdR掺入法检测其对XG6细胞的生长和增殖的调节作用。结果经RT-PCR和ELISA方法检测表明,成功构建了稳定表达sTACI-Fc融合蛋白的基因转染细胞。基因转染细胞的培养上清经亲和层析柱纯化,得到TACI-Fc融合蛋白。体外检测其生物学活性结果表明,该融合蛋白可有效地阻断Blys对骨髓瘤细胞株XG6的促增殖作用。结论本实验成功地将TACI胞外段与人IgG1Fc段在真核细胞中进行融合表达,表达的蛋白质具有良好的生物学功能,这为进一步对TACI基因进行功能研究奠定了物质基础。
- 徐海燕王泳於葛华马泓冰徐颖施勤张学光
- 关键词：基因转染细胞增殖
- 两株抗人CD40配体单克隆抗体的制备及生物学特性的研究被引量：11
- 2002年
- 目的 :研制功能性抗CD4 0L单克隆抗体 ,探讨其生物学特性及其运用价值。方法 :采用B淋巴细胞融合、免疫荧光、免疫印迹和竞争抑制等方法获得鼠抗人CD4 0LmAb ,通过Daudi细胞生长抑制试验、混合淋巴细胞反应观察抗CD4 0LmAb的生物学功能。结果 :经表型分析、Westernblot和竞争抑制试验 ,证实mAbB1、mAb4F1是识别人CD4 0L分子的特异性单抗 ,且识别的位点不同 ;mAbB1、mAb4F1均能不同程度地拮抗CD4 0L TC介导的Daudi细胞生长抑制和抑制混合淋巴细胞反应。结论 :成功地获得两株能稳定分泌特异性抗人CD4 0L单克隆抗体的杂交瘤 (1B1、4F1) ,这两株单抗对CD4 0L的生物学功能具有明显的阻断作用 。
- 樊一笋张学光邱玉华朱华亭於葛华
- 关键词：生物学特性CD40L单克隆抗体DAUDI细胞混合淋巴细胞反应
- PD-L1和PD-L2在树突状细胞上的表达及其生物学意义被引量：6
- 2004年
- 探讨小鼠髓系DC (CD8α )中PD L1和PD L2的表达及其在T淋巴细胞活化中的作用。采用mCD4 0L CHO和TNF α分别刺激凋亡肿瘤细胞负载DC 4 8h ;免疫荧光标记检测DC表型 ;RT PCR和realtime PCR检测PD L1和PD L2mRNA转录水平 ;ELISA测定IL 2的分泌水平 ;3 H TdR掺入试验和51Cr释放试验测定DC体外激发T细胞的增殖和细胞毒杀伤率。结果显示 :PD L1和PD L2随着DC的成熟呈上调表达 ,CD4 0配基化DC的PD L1和PD L2均为中度表达 ,TNF α激发的DC为高度表达 ,二者呈现差异性表达 (P <0 0 5 ) ;CD4 0配基化髓系DC分泌IL 2的量明显高于TNF α组 (P <0 0 5 ) ,体外刺激T增殖和激活CTL能力在CD4 0配基化DC组最高 (P <0 0 5 )。提示CD4 0配基化的小鼠髓系DC呈现PD L1和PD L2的中度表达 ,IL 2大量分泌 。
- 古涛李敏陈成朱一蓓周时勇周桓陈永井於葛华张学光
- 关键词：树突状细胞
- CD40信号对肺癌细胞化疗敏感性影响的实验研究被引量：3
- 2004年
- 目的 观察激发CD4 0分子对肺癌细胞的化疗敏感性影响。方法 以肺癌细胞株A5 4 9和SPC A 1为研究对象 ,以可溶性CD4 0配体 (sCD4 0L)及激发型CD4 0单克隆抗体 5C11处理A5 4 9和SPC A 1细胞 ,采用四氮唑盐(MTT)比色法比较CD4 0激发前后化疗药物顺铂 (DDP)或丝裂霉素 (MMC)对细胞增殖的影响 ,免疫荧光标记和流式细胞术测定激发CD4 0分子前后化疗药物对肺癌细胞的杀伤作用。结果 激发CD4 0分子可增强DDP及MMC对CD4 0表达肺癌细胞株A5 4 9增殖的抑制率 (P <0 .0 5 )以及增强DDP及MMC对该细胞株的杀伤效应 (P <0 .0 5 ) ;而CD4 0不表达细胞株SPC A 1经sCD4 0L或 5C11处理不能产生类似的作用。结论 激发CD4 0信号可引起CD4 0表达肺癌细胞A5 4 9对化疗药物DDP及MMC的敏感性增加 ,可能在肺癌的治疗中具有潜在的应用价值。
- 王天立黄建安於葛华雷伟张学光
- 关键词：CD40肺癌细胞株流式细胞术
- 免疫治疗后荷瘤小鼠树突状细胞的功能评价
- 2006年
- 目的评价免疫治疗后荷瘤小鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)体外激发T细胞增殖及分泌细胞因子的功能。方法采用腹腔注射激发型4-1BB抗体联合DC主动免疫治疗荷瘤小鼠3。H-TdR掺入试验检测免疫治疗后荷瘤小鼠骨髓来源DC体外激发T细胞增殖的能力,ELISA法检测DC刺激T细胞分泌IL-2、IFN-γ及IL-10的水平。结果荷瘤小鼠骨髓前体细胞产生的DC激发T细胞增殖及分泌IL-2、IFN-γ的能力下降,但经过免疫治疗后,这类DC激发T细胞增殖及分泌IL-2、IFN-γ的能力均得到改善,而且免疫治疗效果越好,改善就明显。结论荷瘤小鼠经免疫治疗后,其骨髓前体细胞来源DC的免疫功能得到改善。
- 李敏陈成古涛周桓张烽朱一蓓於葛华张学光顾宗江
- 关键词：树突状细胞肿瘤免疫治疗
- 一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的研究
- 2008年
- 目的:鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体的研制及其生物学特性的鉴定。方法:以高表达人4-1BBL分子的基因转染细胞L929/4-1BBL为免疫原,常规免疫BALB/c小鼠,采用B淋巴瘤杂交瘤技术进行细胞融合,经流式细胞术分析和多次克隆化培养,筛选特异性杂交瘤细胞株;采用Ig亚型快速定性试纸法、染色体核型分析、竞争结合抑制试验、间接免疫荧光法对单抗的生物学特性进行鉴定,并采用体外细胞计数和ELISA检测分析单抗对单核细胞的作用。结果:获得1株持续、稳定分泌鼠抗人4-1BBL单抗的杂交瘤细胞株,命名为3E7。该单抗能识别人白血病细胞株和单核细胞表面的4-1BBL分子。对单抗生物学功能的研究结果表明,该单抗能有效地促进外周血单核细胞体外生长,并促进IL-6和TNF-α的分泌。结论:成功地获得了一株鼠抗人4-1BBL功能性单克隆抗体3E7,该单抗能特异地识别人4-1BBL分子,并有效地通过激发4-1BBL逆向信号通路促进单核细胞的体外生长及细胞因子的分泌。
- 王旭东周斌李文香於葛华张光波张学光
- 关键词：4-1BBL单克隆抗体共刺激信号杂交瘤
- 共刺激分子B7-CD28/CD152在过敏性哮喘中的作用被引量：3
- 2003年
- 目的 观察 5 0例过敏性哮喘患者不同时期共刺激分子CD2 8、CD15 2 (CTLA4)、CD80(B7 1)、CD86 (B7 2 )和外周血T淋巴细胞及其亚群CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 、CD4+ /CD8+ 、CD2 1、CD2 5、HLA DR等变化 ,探讨这些分子在哮喘发病中的意义。方法 采用间、直接荧光标记流式细胞仪测定上述分子表达。结果 共刺激分子CD80、CD86在过敏性哮喘急性发作期明显上调 (P <0 0 5 ) ,CD2 8虽有升高趋势 ,但与健康对照组比较差异无显著性 (P >0 0 5 ) ;而CD15 2在哮喘急性发作期、缓解期均无变化。急性发作期、缓解期过敏性哮喘病人外周血CD3+ 、CD4+ 、CD8+ 、CD4+ /CD8+ 等T细胞亚群与对照组相比差异无显著性 ,但T细胞活化标记物HLA DR明显升高 (P <0 0 5 )。结论 共刺激分子B7 CD2 8/CD15 2可能参与了过敏性哮喘的发病过程 ;过敏性哮喘患者外周血T细胞及其亚群虽无比例失调但存在功能紊乱。
- 黄建安张腊娣於葛华张学光
- 关键词：过敏性哮喘共刺激分子T淋巴细胞亚群外周血流式细胞仪
- rhCD40L联合化疗药物对乳腺癌细胞株生物学行为的影响被引量：9
- 2005年
- 为了研究人重组CD40L(rhCD40L)对乳腺癌细胞株MDA-MB-231、MDA-MB-435细胞生物学行为的影响,运用多种细胞生物学、分子生物学方法检测细胞生长、细胞周期、细胞膜分子、凋亡相关基因Bcl-Xl、Bax及趋化因子RANTESmRNA水平的改变,并观察了rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素(ADM)对MDA-MB-231细胞增殖的影响。结果发现rhCD40L抑制MDA-MB-435、MDA-MB-231细胞增殖,与剂量呈负相关(P<0.05);两株乳腺癌细胞分别在CD40配基化(ligation)作用48、72h进入G1期细胞阻滞;MDA-MB-231细胞CD54、CD95(Fas)、CD120b等分子表达均显著上调,CD95L(FasL)表达下调(P<0.05);MDA-MB-435细胞CD49e、CD95L、CD120a、HLA-DR等分子有显著性变化。两株乳腺癌细胞经rhCD40L作用4、24h后,RT-PCR半定量Bax/Bcl-Xl的比率、RANTES的表达与对照组相比均上调。rhCD40L联合IFN-γ、阿霉素对MDA-MB-231细胞增殖有较强的抑制作用(P<0.05)。由此表明,CD40信号影响乳腺癌细胞周期及TNF家族成员及MHCII类分子的表达,上调凋亡相关基因Bax/Bcl-Xl的比值和趋化因子RANTESmRNA水平,直接或间接介导抗肿瘤作用。同时,rhCD40L还可增强肿瘤细胞对细胞因子和化学药物的敏感性。
- 施勤陈永井谢芳马泓冰季玉红於葛华王勤葛彦张学光
- 关键词：乳腺癌细胞株IFN-Γ阿霉素抗肿瘤
