张志杰
- 作品数：11 被引量：20H指数：3
- 供职机构：中南大学湘雅医学院肿瘤研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划湖南省卫生厅科研基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 利用抑制性消减杂交技术筛选太空诱变宫颈癌细胞差异表达基因
- 背景：太空环境不同于地球表面的任何环境，它具有强烈的空间辐射、高真空、微磁场以及航天器中的微重力等特殊环境。大量研究表明太空特殊环境可以促使细胞性状产生变异、染色体发生畸变和基因表达发生改变等。我们前期对搭载在“神舟四号...
- 张志杰
- 关键词：宫颈癌抑制性消减杂交差异表达基因
- 文献传递
- 心肌肌钙蛋白T标志物诊断急性心肌梗死的应用研究被引量：1
- 2007年
- 目的 探讨心肌肌钙蛋白T（CTT）对诊断急性心肌梗死（AMI）的临床检测价值。方法 采用ELISA法和IFCC法测定病例组及对照组血清CTT水平和肌酸磷酸激酶同工酶（CK-MB）水平，并进行统计学分析。结果 AMI组中血清CTT水平为（4．790±2．384）ng／mL，阳性率为97．6％，和非AMI心肌损伤组和对照组比较差异有统计学意义（P均〈0．01）；CK—MB水平为（225．7±48．6）IU／L，显著高于非AMI心肌损伤组和对照组（P〈0.01，P〈0.01）；而CK-MB的阳性率为94．0％，显著高于对照组（P〈0.01），但与非AMI心肌损伤组比较差异无统计学意义（P〉0.05）。在非AMI心肌损伤组中2例不稳定型心绞痛和1例急性心力衰竭患者呈CTT弱阳性，阳性率为4．3％。结论 CTT作为标志物诊断AMI有较高的特异性和敏感性，可广泛应用。
- 谢平丽周国华张志杰胡锦跃李跃辉李官成
- 关键词：肌钙蛋白T
- 鼻咽癌人源抗独特型单链抗体诱导的免疫应答被引量：1
- 2010年
- 目的观察鼻咽癌人源抗独特型单链抗体G22ScFv在小鼠体内诱导的免疫应答,探讨其作为鼻咽癌疫苗的可能性。方法在大肠杆菌中诱导表达G22ScFv并进行纯化,以纯化的G22ScFv免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA及竞争抑制ELISA检测免疫小鼠特异性体液免疫应答水平;流式细胞术检测免疫小鼠脾T淋巴细胞表型的变化。结果纯化的融合蛋白纯度达95%以上,且具有良好的反应原性。经ELISA检测,G22ScFv免疫后,小鼠产生了Ab3,且小鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞数量升高。结论G22ScFv可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答,为鼻咽癌人源抗独特型抗体疫苗的临床应用奠定了基础。
- 汪静李官成童永清张志杰杨丞肖艳孙硕水漩
- 关键词：鼻咽癌免疫应答
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建与筛选鉴定被引量：2
- 2008年
- 体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC.用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因.将ScFv基因与载体fuse5连接后,电击转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库.用人肝癌细胞及人肝细胞对初级噬菌体抗体库进行亲和富集及phage-ELISA筛选.筛选获得的阳性克隆进行ELISA及免疫组化鉴定并测序.结果表明,经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因.将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗体库,全长ScFv基因的插入率为80%.用人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系QSG-7701对抗体库进行三轮正负淘选和富集后,从中随机挑取533个克隆进行ELISA筛选,得到179个阳性克隆,阳性率为33.6%.将179个阳性克隆进一步进行其他细胞系的鉴定,发现克隆A82对肝癌细胞系HepG2、人胚肾上皮细胞系HEK293呈强阳性反应,免疫组织化学结果显示与人肝细胞癌组织有特异性反应,而不与正常肝组织反应.且A82的相对亲和力为2.4mol/L,解离常数Kd为5.32×10-9mol/L,显示其亲和力较高.对克隆A82进行测序分析,结果表明:A82全长742bp,含linkercDNA序列45bp,重链可变区基因与人胚系IgVH3-23有94.3%的同源性,轻链可变区基因与人胚系IgV4-2有94.9%的同源性,V-D-J分别属于VH3-23-D2-21-JH6-linker-V4-2-JL2.由上述结果可见,应用体外抗原致敏方法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术,构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌单链抗体库,通过细胞ELISA和免疫细胞化学鉴定,获得的噬菌体抗体克隆A82具有较强的特异性,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础.
- 肖艳李官成李跃辉黄建童永清张志杰
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库肝癌单链抗体
- 用EBV转化的肝癌患者B细胞构建噬菌体单链抗体库被引量：1
- 2008年
- 目的构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库。方法体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061。经四环素抗性筛选,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗独特型抗体库,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为80%。结论用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,制备全人源抗肿瘤单链抗体(ScFv),这一策略是完全可行的。
- 肖艳李官成李跃辉童永清张志杰
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体
- 利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞cDNA消减文库被引量：1
- 2009年
- 目的利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞的消减文库，为进一步从基因表达水平研究空间特殊环境影响肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定基础。方法采用SuperSMART和SSH技术，以太空诱变的宫颈癌48A9细胞株作为Tester，地面正常对照组宫颈癌细胞株作为Driver，分离太空诱变的宫颈癌48A9细胞中差异表达的基因片段；连接T载体，转化宿主菌，构建太空诱变的宫颈癌48A9细胞cDNA抑制性消减文库。结果经蓝白筛选后随机挑取300个阳性克隆，以接头1和2R内侧序列为引物进行菌液PCR扩增鉴定阳性克隆，结果显示其中288个克隆有插入片段，阳性率为96％，大小分布在0．2—1．0kb间。结论本实验利用抑制性消减杂交技术成功的构建了高质量的太空诱变宫颈癌细胞消减文库，为进一步从基因水平阐明太空特殊环境对肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定了基础。
- 张志杰郭锋杰童永清李跃辉谢平丽李官成
- 关键词：基因文库
- 鼻咽癌人源抗独特型基因工程抗体的原核表达及鉴定被引量：4
- 2008年
- 目的构建鼻咽癌人源抗独特型单链抗体原核表达载体,对其产物做初步鉴定,为鼻咽癌疫苗制备奠定基础。方法采用分子克隆技术,PCR扩增G22ScFv基因,并将其克隆到原核表达载体pET25b(+)上,将重组子转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后,表达的蛋白经His-tag纯化试剂盒纯化后复性。SDS-PAGE及Western blot分析融合蛋白。结果构建的原核表达载体pET25b(+)-G22经测序检测,序列正确。在大肠杆菌中G22ScFv以包涵体形式获高效表达,SDS-PAGE及Western blot鉴定表达的目的蛋白Mr为25kD,同时证实载体构建及表达均正确。目的蛋白经试剂盒纯化后电泳分析纯度达95%以上。结论利用基因重组技术,在原核细胞中表达出重组G22ScFv并得到纯化,为研究鼻咽癌疫苗打下了基础。
- 汪静李官成童永清张志杰
- 关键词：抗独特型抗体鼻咽癌原核表达单链抗体
- 太空诱变宫颈癌细胞的生物学研究被引量：7
- 2007年
- 目的:研究太空诱变宫颈癌细胞的生物学特性。方法:将搭载于“神舟四号”飞船飞行返地后的宫颈癌Caski细胞进行单克隆化,观察细胞形态、四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定细胞生长曲线初步筛选出变异株并测定其倍增时间、流式细胞仪检测细胞周期、软琼脂细胞集落培养和裸鼠成瘤实验检测空间诱变细胞的恶性表型。结果:单克隆化后获得1440株细胞克隆,发现空间诱变株出现多种细胞形态;MTT法筛选出4株变异株,其中有两株编号为44F10和17E3的细胞克隆生长速度快于对照组,其细胞周期分布改变,G1期细胞减少,S期细胞增多;而另两株编号为48A9和31F2的细胞克隆生长速度慢于对照组,其细胞周期分布规律与以上两株相反;地面正常对照细胞,地面模拟对照细胞,44F10,17E3,48A9和31F2细胞的平均倍增时间依次为56.54,58.44,52.96,51.46,101.76和88.47h,其中44F10和17E3与对照细胞组比较平均倍增时间降低但无统计学意义,而48A9和31F2与对照细胞之间的差异有统计学意义(P<0.05);软琼脂细胞集落形成率依次为9.7%,9.3%,14.7%,12.1%,0和0.1%,诱变细胞与对照细胞之间的差异有统计学意义(P<0.01);将6组细胞分别注射入裸鼠体内,47d后处死动物,各组裸鼠成瘤率为100%;剥离出肿瘤组织并称重,各组瘤块平均重量依次为0.066,0.066,0.175,0.249,0.011和0.018g,变异组与两对照组的细胞成瘤能力比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:实验证明空间环境可影响肿瘤细胞的生理特性,并且诱导细胞的变异是多向性的。
- 杨丞李官成李跃辉胡锦跃肖艳张志杰
- 关键词：空间环境肿瘤细胞宫颈癌生物学特性
- 人源性鼻咽癌抗独特型单链抗体基因G22真核表达载体的构建及表达鉴定
- 2008年
- 目的:构建含人源性鼻咽癌抗独特型单链抗体基因G22的真核表达载体,并观察其在直肠癌细胞(rectalcancercells,CMT-93)中的表达。方法:将目的基因G22克隆入真核质粒pcDNA3.1(+)中构建真核表达载体pcDNA3.1(+)-G22,并进行酶切鉴定和DNA序列测定。用脂质体法将重组质粒转染入CMT-93细胞,以Western免疫印迹、流式细胞术和免疫荧光检测G22基因的表达。结果:酶切鉴定和DNA序列分析证实,重组质粒pcDNA3.1(+)-G22含有人源性鼻咽癌抗独特型单链抗体基因G22的全长序列,转染实验表明G22基因能在真核细胞CMT-93中正确表达。结论:人源性鼻咽癌抗独特型抗体基因G22真核表达载体构建及其在CMT-93细胞中的表达均获成功,为基因疫苗的进一步研究奠定了基础。
- 罗晨何小鹃赵艳张志杰李官成
- 关键词：鼻咽癌抗独特型抗体真核表达
- 利用抑制性消减杂交技术筛选太空诱变宫颈癌细胞的差异表达基因
- 背景：太空环境不同于地球表面的任何环境，它具有强烈的空间辐射、高真空、微磁场以及航天器中的微重力等特殊环境。大量研究表明太空特殊环境可以促使细胞性状产生变异、染色体发生畸变和基因表达发生改变等。我们前期对搭载在“神舟四号...
- 张志杰
- 关键词：宫颈癌抑制性消减杂交差异表达基因太空诱变
- 文献传递
