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鼻咽癌人源抗独特型单链抗体诱导的免疫应答被引量：1: 2010年; 目的观察鼻咽癌人源抗独特型单链抗体G22ScFv在小鼠体内诱导的免疫应答,探讨其作为鼻咽癌疫苗的可能性。方法在大肠杆菌中诱导表达G22ScFv并进行纯化,以纯化的G22ScFv免疫BALB/c小鼠,采用间接ELISA及竞争抑制ELISA检测免疫小鼠特异性体液免疫应答水平;流式细胞术检测免疫小鼠脾T淋巴细胞表型的变化。结果纯化的融合蛋白纯度达95%以上,且具有良好的反应原性。经ELISA检测,G22ScFv免疫后,小鼠产生了Ab3,且小鼠脾脏CD4+、CD8+T淋巴细胞数量升高。结论G22ScFv可诱导机体产生体液免疫和细胞免疫应答,为鼻咽癌人源抗独特型抗体疫苗的临床应用奠定了基础。; 汪静李官成童永清张志杰杨丞肖艳孙硕水漩; 关键词：鼻咽癌免疫应答

人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白的融合表达及其体内靶向性研究(英文)被引量：1: 2011年; 目的:探讨人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP-SA3)的融合表达、纯化、复性及其体内靶向性。方法:将SA3,EGFP基因,插入pET-25b(+),构建EGFP-SA3/pET-25b(+)原核表达载体,测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导融合蛋白EGFP-SA3的表达,复性、纯化后经SDS-PAGE鉴定;EGFP-SA3与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的结合作用;然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3的体内靶向作用。结果:SA3,EGFP基因分别插入载体pET-25b(+)后,重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)分别行NcoI-XhoI和NcoI-EcoRI双酶切,结果发现在750 bp左右出现一条带,与EGFP基因大小一致,在1.5 kb左右处出现一条带,与EGFP和SA3两个基因片段的总大小一致,DNA测序结果证实融合表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)构建成功;重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示融合蛋白EGFP-SA3分子质量为58 kD,主要以包涵体的形式存在;纯化、复性后,免疫荧光检测结果显示SA3与HepG2细胞能特异性地靶向结合;注射了EGFP-SA3的荷肝癌小鼠的肿瘤部位有绿色荧光发出,显示EGFP-SA3具有良好的肿瘤特异性。结论:融合蛋白EGFP-SA3与HepG2细胞有较强的结合能力,单链抗体SA3有望用于肝癌的分子诊断和靶向治疗。; 黄建李跃辉郭锋杰童永清王甲甲胡锦跃李官成; 关键词：肝癌 SCFV EGFP

用EBV转化的肝癌患者B细胞构建噬菌体单链抗体库被引量：1: 2008年; 目的构建抗肝癌人源噬菌体单链抗体库。方法体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC。用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库。结果经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因。将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061。经四环素抗性筛选,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗独特型抗体库,噬菌体DNA中全长ScFv基因的插入率为80%。结论用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,制备全人源抗肿瘤单链抗体(ScFv),这一策略是完全可行的。; 肖艳李官成李跃辉童永清张志杰; 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体

利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞cDNA消减文库被引量：1: 2009年; 目的利用抑制性消减杂交技术构建太空诱变宫颈癌细胞的消减文库，为进一步从基因表达水平研究空间特殊环境影响肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定基础。方法采用SuperSMART和SSH技术，以太空诱变的宫颈癌48A9细胞株作为Tester，地面正常对照组宫颈癌细胞株作为Driver，分离太空诱变的宫颈癌48A9细胞中差异表达的基因片段；连接T载体，转化宿主菌，构建太空诱变的宫颈癌48A9细胞cDNA抑制性消减文库。结果经蓝白筛选后随机挑取300个阳性克隆，以接头1和2R内侧序列为引物进行菌液PCR扩增鉴定阳性克隆，结果显示其中288个克隆有插入片段，阳性率为96％，大小分布在0．2—1．0kb间。结论本实验利用抑制性消减杂交技术成功的构建了高质量的太空诱变宫颈癌细胞消减文库，为进一步从基因水平阐明太空特殊环境对肿瘤细胞生物学行为改变的分子机制奠定了基础。; 张志杰郭锋杰童永清李跃辉谢平丽李官成; 关键词：基因文库

采用生物信息学策略对鼻咽癌相关抗原基因NPC-A-7组织分布的初步分析: 目的:应用生物信息学的方法分析鼻咽癌相关抗原基因NPC-A-7的组织分布情况,以推测鼻咽癌相关抗原基因NPC-A-7的生物学功能与特性。方法:应用美国国家生物信息中心(NCBI)中的核酸数据库、EST数据库、Unigen...; 童永清李官成李艳雯; 文献传递

鼻咽癌T7噬菌体cDNA文库的构建和鼻咽癌血清自身抗体的筛选: 鼻咽癌(Nasopharyngeal carcinoma，NPC)是一种上皮源性的高发于我国南方及东南亚一带的头颈部恶性肿瘤，在我国广东、广西、福建、湖南、江西尤为突出，据估计全世界鼻咽癌病例中80％发生于我国，年发病率...; 童永清; 关键词：鼻咽癌 CDNA文库血清自身抗体基因筛选; 文献传递

大肠癌相关抗原基因CRC-L-10的生物信息学分析: 2006年; 目的探讨推测CRC-L-10基因的生物学功能与特性。方法应用美国国家生物信息中心(NCB I)的核酸数据库、EST数据库和相应软件对大肠癌相关抗原基因CRC-L-10的组织分布情况及其基因和蛋白质序列进行分析。结果大肠癌相关基因CRC-L-10定位于15q25.2,最长开放阅读框为579 bp,编码192个氨基酸,广泛表达于许多正常组织如前列腺、肌肉、皮肤等,但在肝癌、卵巢癌、睾丸癌、结肠癌等肿瘤组织中表达明显上调,而在相应正常组织中低表达。结论大肠癌相关抗原基因CRC-L-10编码的抗原可能与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。; 孙硕李官成朱建高童永清; 关键词：肠肿瘤计算生物学

全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定被引量：6: 2008年; 目的:构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库,从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv),并对其特异性进行鉴定。方法:采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库。对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选,获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果:scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库。对抗体库进行3轮正负淘选和富集后,随机挑取2798个克隆进行ELISA,发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应,而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应。对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定,结果与ELISA一致。免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义。结论:构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库。通过淘选富集、ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。; 黄建肖艳童永清郭锋杰周国华李跃辉胡锦跃李官成; 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体

鼻咽癌抗原基因NPC-A-6和NPC-A-7的分析与鉴定: 本文旨在通过生物信息学分析鼻咽癌抗原基因NPC-A-6和NPC-A-7的基因结构和预测其生物学功能，RT-PCR分析、鉴定NPC-A-6和NPC-A-7在各种细胞株和组织中的表达的情况，结果表明，NPC-A-6和NPC-...; 童永清; 关键词：鼻咽癌抗原基因生物信息学 RT-PCR; 文献传递

鼻咽癌相关抗原基因NPC-A-6的生物信息学分析被引量：1: 2004年; 【目的】应用生物信息学的方法分析鼻咽癌相关抗原基因NPC A 6的组织分布情况 ,以推测鼻咽癌相关抗原基因NPC A 6的生物学功能与特性。【方法】应用美国国家生物信息中心 (NCBI)中的核酸数据库、EST数据库、Unigen数据库和相应软件分析。【结果】鼻咽癌相关抗原基因NPC A 6定位于 9p2 4 .3,由三个外显子和两个内含子组成 ,广泛表达于许多正常组织如前列腺、脂肪、耳等 ,但在胃癌、子宫瘤、宫颈癌、皮肤癌、结肠癌等肿瘤组织中表达明显上调 ,而在相应正常组织中不表达或低表达。【结论】鼻咽癌相关抗原基因NPC A 6编码的抗原可能与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。; 童永清李官成; 关键词：鼻咽肿瘤基因信息科学

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童永清

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