黄建
- 作品数：8 被引量：19H指数：2
- 供职机构：中南大学更多>>
- 发文基金：湖南省卫生厅科研基金博士研究生创新基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选与鉴定被引量：6
- 2008年
- 目的:构建人源抗肝癌噬菌体单链抗体库,从中筛选抗肝癌单链抗体(scFv),并对其特异性进行鉴定。方法:采用体外致敏法和EBV转化技术联合噬菌体展示技术构建噬菌体抗体库。对初级抗体库进行亲和富集及ELISA筛选,获得的阳性克隆进行免疫组化鉴定并测序。结果:scFv基因与载体连接后得到库容量为1.0×108的初级噬菌体抗体库。对抗体库进行3轮正负淘选和富集后,随机挑取2798个克隆进行ELISA,发现3个克隆对HepG2呈强阳性反应,而与QSG-7701等人正常细胞系呈弱阳性或不反应。对克隆SA3进行免疫细胞化学鉴定,结果与ELISA一致。免疫组织化学鉴定表明SA3与肝癌组织和肝组织阳性率的差别有统计学意义。结论:构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌噬菌体抗体库。通过淘选富集、ELISA和免疫组织化学鉴定获得特异性较强的噬菌体克隆,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础。
- 黄建肖艳童永清郭锋杰周国华李跃辉胡锦跃李官成
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库单链抗体
- 鼻咽癌患者血清中自身抗体的初步检测被引量：6
- 2008年
- 目的:探讨鼻咽癌患者血清中是否存在抗鼻咽癌自身抗原的抗体,为寻找鼻咽癌新的肿瘤标志物提供依据。方法:制备Epstein-Barr病毒阴性的鼻咽癌细胞株CNE1细胞板,酶联免疫吸附实验(ELISA)分析其与32例鼻咽癌患者血清和54例正常血清反应的差异性;提取CNE1总蛋白,Western印迹分析其与鼻咽癌患者血清反应是否存在特异性的蛋白质。结果:ELISA分析显示鼻咽癌患者血清平均滴度(0.904±0.032)明显高于正常人血清平均滴度(0.736±0.028)(P<0.01);Western印迹分析发现鼻咽癌患者血清与正常人血清相比,部分阳性条带一致,但条带强度增加,还发现出现了部分新的阳性条带,这些条带可能属于鼻咽癌相关抗原或鼻咽癌特异性抗原。结论:鼻咽癌患者血清中存在抗鼻咽癌自身抗原的抗体,这些抗体并非针对Epstein-Barr病毒,为寻找鼻咽癌血清肿瘤标志物提供了依据。
- 童永清黄建周国华李跃辉胡锦跃李官成
- 关键词：鼻咽癌肿瘤标志物自身抗体
- 用体外致敏联合EB病毒转化技术构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库被引量：2
- 2007年
- 目的构建抗肝癌的人源Fab噬菌体抗体库。方法体外致敏并用EB病毒(EBV)转化肝癌患者的外周血单个核细胞(PBMC)。RT-PCR扩增人抗体轻链和重链Fd段基因,将抗体基因分别与载体pComb3连接后,电转化大肠杆菌XLI-Blue,构建噬菌体呈现型Fab抗体库。结果经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生;经PCR扩增出13条轻链基因片段(κ、λ)和28条重链Fd基因片段(γ);电转化构建的噬菌体抗体库库容为1.7×107puf/mL;Fab基因的重组率约为100%。结论用体外致敏法结合噬菌体抗体库技术,成功构建了全人源抗肝癌Fab组合抗体文库。
- 水漩李官成李跃辉黄建赵艳
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库肝癌FAB抗体
- 用体外致敏的鼻咽癌患者B细胞构建全人源噬菌体单链抗体库被引量：2
- 2008年
- 目的构建全人源抗鼻咽癌噬菌体单链抗体库，为筛选鼻咽癌相关抗原的抗体奠定基础。方法采用体外致敏与EB病毒（EBV）转化鼻咽癌患者的外周血单个核细胞（PBMC），提取总RNA，用RT—PCR技术扩增人抗体重链可变区VH基因和轻链可变区VL基因，用编码（Gly4Ser）3的互补序列连接成单链抗体ScFv基因（VH-linker—VL），并克隆到噬菌粒载体FUSE5，转化大肠杆菌MC1061，构建噬菌体呈现型ScFv库。结果成功地构建了全人源抗鼻咽癌噬菌体单链抗体库，库容量为6．5×10^7，约100％的噬菌体基因中有ScFv基因的插入。结论联合应用体外致敏和EBV转化及噬菌体呈现技术构建全人源抗鼻咽癌噬菌体单链抗体库是可行的，这为进一步筛选鼻咽癌相关抗原的抗体奠定了基础。
- 赵艳李跃辉黄建李官成
- 关键词：B淋巴细胞细菌噬菌体肽库
- 抗体药物用于肿瘤治疗的研究进展被引量：1
- 2008年
- 抗体药物是近年来发展起来的新的抗肿瘤药物，在肿瘤治疗方面有着独特的优势。研究表明，抗体药物能选择性杀伤肿瘤细胞，具有良好的疗效和较低的毒性，在体内呈特异性分布，能特异性结合于肿瘤相关分子靶点，并且对耐药性肿瘤细胞有杀伤作用。
- 黄建李官成
- 关键词：抗体抗肿瘤药免疫疗法肿瘤
- 人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白的融合表达及其体内靶向性研究(英文)被引量：1
- 2011年
- 目的:探讨人源抗肝癌单链抗体SA3与增强型绿色荧光蛋白(EGFP-SA3)的融合表达、纯化、复性及其体内靶向性。方法:将SA3,EGFP基因,插入pET-25b(+),构建EGFP-SA3/pET-25b(+)原核表达载体,测序鉴定后转化大肠杆菌BL21(DE3);IPTG诱导融合蛋白EGFP-SA3的表达,复性、纯化后经SDS-PAGE鉴定;EGFP-SA3与HepG2细胞经体外孵育后在荧光显微镜下观察单链抗体SA3与肝癌细胞的结合作用;然后通过尾静脉将其注射入荷肝癌裸鼠体内观察EGFP-SA3的体内靶向作用。结果:SA3,EGFP基因分别插入载体pET-25b(+)后,重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)分别行NcoI-XhoI和NcoI-EcoRI双酶切,结果发现在750 bp左右出现一条带,与EGFP基因大小一致,在1.5 kb左右处出现一条带,与EGFP和SA3两个基因片段的总大小一致,DNA测序结果证实融合表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)构建成功;重组表达载体EGFP-SA3/pET-25b(+)经IPTG诱导表达后,SDS-PAGE显示融合蛋白EGFP-SA3分子质量为58 kD,主要以包涵体的形式存在;纯化、复性后,免疫荧光检测结果显示SA3与HepG2细胞能特异性地靶向结合;注射了EGFP-SA3的荷肝癌小鼠的肿瘤部位有绿色荧光发出,显示EGFP-SA3具有良好的肿瘤特异性。结论:融合蛋白EGFP-SA3与HepG2细胞有较强的结合能力,单链抗体SA3有望用于肝癌的分子诊断和靶向治疗。
- 黄建李跃辉郭锋杰童永清王甲甲胡锦跃李官成
- 关键词：肝癌SCFVEGFP
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体的筛选、鉴定及其靶向性实验研究
- 目的：从全人源噬菌体单链抗体库中大规模筛选抗肝癌噬菌体单链抗体(scFv)，鉴定其特异性;以绿色荧光蛋白(EGFP)为示踪分子构建、表达抗肝癌scFv与EGFP融合蛋白，体外、体内实验研究抗肝癌scFv的靶向特异性，为肝...
- 黄建
- 关键词：肝癌噬菌体单链抗体绿色荧光蛋白融合蛋白
- 文献传递
- 全人源抗肝癌噬菌体单链抗体库的构建与筛选鉴定被引量：2
- 2008年
- 体外致敏并用EBV转化肝癌患者的PBMC.用PCR分别扩增VH和VL基因并组成ScFv基因.将ScFv基因与载体fuse5连接后,电击转化大肠杆菌MC1061,构建噬菌体呈现型ScFv库.用人肝癌细胞及人肝细胞对初级噬菌体抗体库进行亲和富集及phage-ELISA筛选.筛选获得的阳性克隆进行ELISA及免疫组化鉴定并测序.结果表明,经EBV转化的4例肝癌患者PBMC,ELISA检测均有抗肝癌抗体产生,经多次PCR,扩增出6种VH(γ、μ)和9种VL(κ、λ)基因,经连接组成54种ScFv基因.将ScFv基因与载体连接后,导入大肠杆菌MC1061,得到库容为1.0×108的初级噬菌体抗体库,全长ScFv基因的插入率为80%.用人肝癌细胞系HepG2和人肝细胞系QSG-7701对抗体库进行三轮正负淘选和富集后,从中随机挑取533个克隆进行ELISA筛选,得到179个阳性克隆,阳性率为33.6%.将179个阳性克隆进一步进行其他细胞系的鉴定,发现克隆A82对肝癌细胞系HepG2、人胚肾上皮细胞系HEK293呈强阳性反应,免疫组织化学结果显示与人肝细胞癌组织有特异性反应,而不与正常肝组织反应.且A82的相对亲和力为2.4mol/L,解离常数Kd为5.32×10-9mol/L,显示其亲和力较高.对克隆A82进行测序分析,结果表明:A82全长742bp,含linkercDNA序列45bp,重链可变区基因与人胚系IgVH3-23有94.3%的同源性,轻链可变区基因与人胚系IgV4-2有94.9%的同源性,V-D-J分别属于VH3-23-D2-21-JH6-linker-V4-2-JL2.由上述结果可见,应用体外抗原致敏方法和EBV转化技术联合噬菌体抗体库技术,构建了库容量达1×108的全人源抗肝癌单链抗体库,通过细胞ELISA和免疫细胞化学鉴定,获得的噬菌体抗体克隆A82具有较强的特异性,为肝癌的临床诊断及导向治疗奠定了基础.
- 肖艳李官成李跃辉黄建童永清张志杰
- 关键词：EB病毒转化噬菌体抗体库肝癌单链抗体
