张代娟
- 作品数：44 被引量：136H指数：6
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- 青心酮防治动脉粥样硬化与TLR4信号转导途径的关系被引量：2
- 2009年
- 目的观察青心酮对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样硬化病变的影响及其与平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞Toll样受体4T(oll-like receptor4,TLR4)信号转导途径的关系。方法取小鼠胸主动脉,进行平滑肌细胞、内皮细胞的原代培养,巨噬细胞RAW 264.7细胞株传代培养。实验分4组,即空白对照组(正常细胞培养,加入等数量的培养基,不加入任何药物),脂多糖组L(PS组)(加入等数量的培养基3h,再加入LPS10ng.mL-1刺激8h),DHAP组(先加入溶有DHAP 1×10-7mol.L-1的培养基培养3h,再加入LPS 10ng.mL-1刺激8h),辛伐他汀对照组(先加入溶有辛伐他汀5×10-7m ol.L-1的培养基培养3h,再加入LPS 10ng.mL-1刺激8h)。收集各组细胞蛋白,应用Western-blot检测TLR4蛋白含量。收集上清液,用ELISA法检测TNF-α。取8周龄雄性ApoE(-/-)小鼠20只,随机分成两组,每组10只,模型对照组建立小鼠AS模型,青心酮治疗组经胃管灌注青心酮10mg.kg-1.d-1。所有实验小鼠均饲以"西方类型膳食"饲料喂养12周。剪取主动脉根部行石蜡切片及HE染色,观察主动脉粥样硬化的病变情况。结果青心酮组血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4蛋白含量均明显低于未处理组(P<0.01),但高于空白对照组;与辛伐他汀组比较无显著性差异;青心酮组TNF-α含量明显低于未处理组(P<0.01),但高于空白对照组;与辛伐他汀组比较,具有显著性差异(P<0.01);青心酮组AS病灶形成减少。结论青心酮能够在一定程度上减少AS病灶的形成,可能是通过TLR4信号转导途径发挥作用的。
- 张代娟刘同美刘江月崔晓栋郭军堂王建英叶笃筠
- 关键词：青心酮动脉粥样硬化TOLL样受体4载脂蛋白E基因敲除小鼠
- 青心酮对RAW264.7细胞可溶性Toll样受体4表达及炎症相关因子的影响被引量：6
- 2006年
- 目的:观察活血化瘀中药秃毛冬青叶中有效成分青心酮对RAW264.7细胞炎症反应时可溶性Toll样受体4mRNA及蛋白表达、血红素氧和酶1mRNA表达、肿瘤坏死因子α分泌的影响。方法:①实验于2004-03/2005-01在华中科技大学同济医学院病理生理教研室完成。②采用RAW264.7巨噬细胞株建立细胞炎症反应模型。观察下述4种情况下培养液血红素氧和酶1mRNA的变化:脂多糖刺激;青心酮[青心酮注射液,3,4-二羟基苯乙酮40mg/支(2mL),实验用,北京制药三厂]预处理3h后加脂多糖刺激;青心酮和脂多糖同时加入;脂多糖刺激3h后加入青心酮。其他指标测定实验分为3组:空白对照组(正常细胞培养,加入等数量的培养基,不加入任何药物);青心酮预处理组(先加入溶有青心酮1×10-7mol/L的培养基培养3h,再加入脂多糖10μg/L刺激4,8h);未处理组(加入等数量的培养基3h,再加入脂多糖10μg/L刺激4,8h)。③采用反转录聚合酶链反应分析可溶性Toll样受体4、血红素氧和酶1mRNA的变化;Westernblot方法检测可溶性Toll样受体4蛋白水平的改变,用ELISA方法检测培养液肿瘤坏死因子α分泌的变化。④组间数据处理采用配对t检验。结果:①可溶性Toll样受体4mRNA表达:青心酮预处理脂多糖刺激4h后明显高于未处理组(P<0.01)。未处理组经脂多糖刺激4h后,明显低于空白对照组(P<0.05)。②可溶性Toll样受体4蛋白表达:青心酮预处理组脂多糖刺激8h后明显高于未处理组(P<0.05),但与空白对照组比较,差异不明显(P>0.05);未处理组脂多糖刺激8h后,明显低于空白对照组(P<0.05)。③血红素氧和酶1mRNA表达:青心酮预处理后加脂多糖刺激和青心酮、脂多糖同时加入后明显高于脂多糖刺激后(P<0.05)。④培养液中肿瘤坏死因子α:脂多糖刺激后明显增加(P<0.01);青心酮预处理脂多糖刺激后明显低于未处理组(P<0.01)。结论:青心酮预处理能有效的抑制炎症反应,可�
- 张代娟武少杰刘同美田华王一鹏段文卓叶笃筠
- 关键词：冬青科
- 吡格列酮和罗格列酮对脂多糖诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响被引量：2
- 2008年
- 目的:观察胰岛素增敏剂——噻唑烷二酮类(TZD)药物吡格列酮和罗格列酮对脂多糖(LPS)诱导的血管平滑肌细胞(VSMCs)异常增殖的影响。方法:组织块贴壁法培养大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞;LPS(0.1,1,10mg·L-1)干预血管平滑肌细胞不同时间(0,12,24,48,72h)后,分别用吡格列酮和罗格列酮与10mg·L-1LPS共同孵育72h,四甲基偶氮咗盐微量酶比色(MTT)法检测血管平滑肌细胞增殖。结果:10mg·L-1LPS孵育72h导致血管平滑肌细胞增殖程度最明显(P<0.01);吡格列酮和罗格列酮可明显抑制LPS诱导的血管平滑肌细胞增殖。结论:噻唑烷二酮类代表药吡格列酮和罗格列酮均对LPS诱导的血管平滑肌细胞异常增殖具有抑制作用,该类药物可能在治疗心血管疾病方面有较好的应用前景。
- 韩芳刘同美张代娟
- 关键词：脂多糖血管平滑肌细胞增殖吡格列酮罗格列酮
- 猫眼草提取物对人胃癌细胞BCG-823增殖影响的实验观察被引量：1
- 2010年
- 目的观察猫眼草提取物对人胃癌细胞株BEG-823增殖的影响并探讨其可能的机制。方法人胃癌细胞株BEG，823分别给予猫眼草提取物10．0，1．0，0.1mg／L培养48h，采用MTT法和台盼蓝染色法检测猫眼草提取物对胃癌细胞株增殖的影响。结果Mrrr法测定结果显示，猫眼草提取物各浓度组对BCG一823细胞增殖均有明显抑制作用且具有良好的量效关系（P〈0．05）；台盼蓝法计数结果显示，给予猫眼草提取物后，活细胞数随培养时间的延长而减少，对胃癌细胞株BGC。823增殖的抑制具有良好的时效关系（P〈0．05）。结论猫眼草提取物对人胃癌细胞株BCG-823增殖具有明显的抑制作用。其抑制作用强度随给药浓度的增加和作用时间的延长而递增。
- 刘江月李香玲刘同美张代娟
- 关键词：细胞计数法MTT法
- 3,4-二羟基苯乙酮抑制NF-κB核转位减轻脂多糖诱导巨噬细胞炎症反应被引量：3
- 2018年
- 目的探讨3,4-二羟基苯乙酮(3,4-DHAP)抑制脂多糖(LPS)诱导小鼠巨噬细胞株(RAW264.7)炎症反应的可能机制。方法常规培养的RAW264.7细胞随机分为正常组(A);LPS组(B);3,4-DHAP组(C)、辛伐他汀组(D)。酶联免疫吸附(ELISA)法检测肿瘤坏死因子(TNF-α)、血管细胞黏附分子(VCAM-1)水平;免疫印迹(Western blot)法检测磷酸化IκB(P-IκB)、总IκB、核因子-κBp65(NF-κBp65)蛋白表达;实时定量荧光聚合酶链式反应(q RT-PCR)法检测IκB mRNA表达。结果 3,4-DHAP显著抑制TNF-α、VCAM-1分泌;抑制IκB蛋白磷酸化;细胞核内NF-κBp65蛋白表达明显减少(P<0.05),抑制了NF-κBp65核转位。结论 3,4-DHAP通过抑制NF-κB核转位,有效抑制LPS诱导RAW264.7细胞炎症反应。
- 张代娟刘江月王建英
- 关键词：炎症反应NF-ΚB信号通路
- 青心酮对载脂蛋白E缺陷小鼠主动脉粥样硬化形成及斑块中主要细胞的TLR4表达的影响被引量：4
- 2010年
- 目的观察青心酮对小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块中平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞Toll样受体4表达(Toll-like receptor 4,TLR4)的影响,及对载脂蛋白E基因敲除小鼠主动脉粥样硬化病变的影响。方法取小鼠胸主动脉,进行平滑肌细胞、内皮细胞的原代培养,RAW264.7(小鼠巨噬细胞)细胞株传代培养。实验分4组:空白对照组,脂多糖(LPS)组,青心酮组,辛伐他汀组。收集各组细胞总mRNA及蛋白,应用RT-PCR及Western-blot方法检测TLR4 mRNA及蛋白。取30只8周龄雄性ApoE(-/-)小鼠,随机分成3组:模型组(n=10),每天生理盐水灌胃;青心酮治疗组(n=10)经胃管灌注青心酮10mg·kg-1·d-1,辛伐他汀治疗组(n=10)经胃管灌注辛伐他汀10mg·kg-1·d-1。所有实验小鼠均饲以"西方类型膳食"饲料12周。剪取主动脉根部切片及HE染色观察主动脉粥样硬化病变情况。结果1×10-7mol·L-1青心酮组血管平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4 mRNA和蛋白含量明显低于未处理组(P<0.01);与辛伐他汀组比较无显著性差异;青心酮组AS病灶形成减少。结论青心酮可下调LPS活化的小鼠平滑肌细胞、内皮细胞、巨噬细胞TLR4mRNA和蛋白的表达,在一定程度上能减少AS病灶的形成,可能通过TLR4途径发挥其作用。
- 张代娟刘同美刘江月崔晓栋郭军堂王建英叶笃筠
- 关键词：青心酮TOLL样受体4
- 青心酮对RAW264.7细胞可溶性Toll样受体4表达及TNF-α的影响被引量：3
- 2006年
- 目的探讨中药成分青心酮(3,4-dihydroxyacetophenone,DHAP)对RAW264.7细胞炎症反应时可溶性Toll样受体4(soluble Toll-like receptor 4,sTLR4)mRNA、蛋白表达及TNFα-分泌的影响。方法建立细胞炎症反应模型,用RT-PCR及Western blot分析sTLR4 mRNA及蛋白水平的改变,用ELISA方法检测TNFα-分泌的变化。结果RAW264.7细胞炎症反应时,sTLR4 mRNA及蛋白表达均下调,该细胞经青心酮处理后在炎症反应时,sTLR4 mRNA及蛋白表达均上调,与未处理组比较,表达明显增加,而TNFα-分泌下降。结论DHAP预处理能显著上调sTLR4 mRNA及蛋白表达,减少TNFα-分泌,抑制炎症反应。这将为临床治疗感染性休克提供一个新的研究方向。
- 张代娟武少杰刘同美田华王一鹏段文卓叶笃筠
- 关键词：青心酮巨噬细胞
- A30Pα-synuclein原核表达载体的构建及表达
- 2012年
- 目的构建A30Pα-synuclein基因的原核表达载体,分析其在大肠杆菌中的表达。方法酶切质粒pcDNA3.0-A30Pα-synuclein,获得A30Pα-synuclein基因的目的片段,克隆至原核表达载体pGEX-6P-1中,转化大肠杆菌BL21。IPTG诱导后,经考马斯亮蓝染色和Western-blot分析目的蛋白的表达。结果 A30Pα-synuclein基因克隆至pGEX-6P-1载体中,考马斯亮蓝染色及Western-blot检测到A30Pα-synuclein蛋白在BL21中的表达。结论成功构建A30Pα-synuclein的原核表达载体,并在大肠杆菌中表达了A30Pα-synuclein融合蛋白,为进一步研究A30Pα-synuclein在帕金森病中的作用奠定了良好基础。
- 周英泽王桂芬刘江月张代娟刘同美
- 关键词：帕金森病
- 青心酮对活化RAW264.7细胞株血红素氧合酶-1mRNA/一氧化碳及TNF-α表达的影响被引量：5
- 2004年
- 目的观察青心酮对活化 RAW264.7细胞株血红素氧合酶-1mRNA/一氧化碳(Hemeoxygenase-1/carbon monoxide,HO-1mRNA/CO)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法用 LPS 做刺激剂,建立活化细胞模型。分别用 RT-PCR 法检测 HO-1mRNA 的表达,血红蛋白结合法检测 CO 的相对含量,Western-blot 方法检测 TNF-α蛋白质的表达。结果 10^(-5)mol/L 青心酮使活化巨噬细胞 HO-1mRNA 表达增加,CO 增加,TNF-α蛋白表达下降。结论青心酮上调活化 RAW264.7细胞株 HO-1mRNA/CO 的表达,抑制 TNF-α蛋白的产生,这可能是 DHAP 抗炎作用机制之一。
- 张代娟吴萍盘茜万敬员张力吴涛周晓燕叶笃筠
- 关键词：青心酮血红素氧合酶-1一氧化碳肿瘤坏死因子-Α
- 2型糖尿病大血管病变与内脂素的关系探讨及降糖调脂灵的干预作用被引量：1
- 2013年
- 目的观察降糖调脂灵保护2型糖尿病大血管病变与内脂素的关系。方法 10只健康成年♂Wistar大鼠作为正常对照组,喂以标准饲料不做处理;50只健康♂大鼠通过高糖高脂饲料喂养+腹腔注射链脲佐菌素诱发糖尿病,随机选取30只成模大鼠分为3组:糖尿病模型组(n=10,灌胃,等量生理盐水)、二甲双胍组(n=10,灌胃,二甲双胍200 mg·kg 1·d 1)、降糖调脂灵组(n=10,灌胃,降糖调脂灵浓缩液5 mL·kg 1·d 1),继续喂以高糖高脂饲料。12周后取血测血糖、血脂、单核细胞趋化因子和细胞间黏附分子的含量;Western-blot法检测血清内脂素表达水平;光镜观察主动脉壁情况,透射电镜观察主动脉超微结构改变。结果降糖调脂灵组血糖、血脂、单核细胞趋化因子和细胞间黏附分子的含量降低,内脂素表达减少,主动脉内皮细胞损坏减轻。结论降糖调脂灵保护T2DM大血管病变,可能与抑制内脂素表达,降低血糖、血脂,减轻炎症反应有关。
- 刘江月张代娟王建英侯建平刘同美郭军堂
- 关键词：2型糖尿病大血管病变
