宋克云
- 作品数：34 被引量：130H指数：7
- 供职机构：长沙市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：长沙市科技计划项目湖南省卫生厅资助项目湖南省医药卫生科研计划课题更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学轻工技术与工程化学工程更多>>
- 长沙市家禽市场环境中H5N1亚型禽流感病毒传播风险研究被引量：7
- 2012年
- 目的对长沙市家禽市场职业暴露人群进行禽流感病毒（AIv）H5N1亚型抗体水平和环境AIV核酸检测，并对环境中AIVH5N1亚型的血凝素（HA）基因进行测序分析。方法抽取长沙市1个区和1个县，各选择2个城区或乡镇家禽市场进行职业暴露人群H5N1抗体和环境AIV核酸检测。利用单放射免疫扩散溶血实验（SRH）对102份家禽市场职业暴露人员血清标本进行H5N1抗体检测，real-time PCR方法检测160份家禽市场环境标本（污水、禽类粪便、羽毛和禽类笼具表面涂抹标本）AIV核酸，对4份污水H5N1亚型AIV核酸阳性标本进行HA基因RT-PCR扩增和TA克隆测序，测序结果利用Lasergene和Mega5．0软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果AIVH5N1抗体监测结果显示，家禽市场职业暴露人群血清H5N1抗体阳性率为25．5％（26／102），其中乡镇和城区家禽市场职业暴露人群阳性率分别为50．0％（9／18）和25．4％（17／67），乡镇家禽市场职业暴露人群阳性率高于城区。长沙市家禽市场环境中H5亚型AIV核酸阳性率为3113％（50／160），其中乡镇家禽市场阳性率为37．3％（31／83），高于城区家禽市场24．7％（19／77）；不同标本H5亚型AIV核酸阳性率不同：污水（50．0％，24／48）、羽毛（44．5％，4／9）、禽类粪便（29．8％，14／47）和禽类笼具表面涂抹（14．3％，8／56）；差异均有统计学意义（P〈0．01）。TA克隆测序得到4个AIV H5N1亚型HA基因序列，进化树显示4个AIV H5N1亚型HA基因与中国内地和香港禽来源的AIV分离株为同一分组，属于欧亚分支；4个AIVH5N1亚型HA基因受体结合位点氨基酸序列仍然为禽源（QSG）、HA1和HA2蛋白之间连接肽为多个碱性氨基酸序列（RERRRKK或RERRGKK），与人源AIV H5N1亚型具有相同的受体结合位点和高致病性的分子特征。结论长沙市家禽市场环境中存在较多数量的AIV H5N1亚型，是�
- 张如胜欧新华宋克云袁洁陈田木肖姗孙边成
- 关键词：禽流感病毒
- 长沙市家禽市场污水来源H9N2亚型禽流感病毒NS基因进化分析被引量：1
- 2013年
- 目的对长沙市家禽市场污水来源的H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进行进化和分子特征分析,探讨其传播风险。方法从家禽市场收集1份H9N2AIV样本(C09055049)进行NS基因PCR扩增和TA克隆测序,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果序列分析表明,NS基因核苷酸序列全长890bp,分别编码NS1(217个氨基酸)和NS2(121个氨基酸)两个蛋白,进化树显示本研究中的NS基因属于A等位基因群的A/Chicken/Shanghai/F/1998-like,起源于国内最早的分离株A/Chicken/Beijing/1/94;NS基因与进化树不同分支代表株氨基酸比对显示,NS1与A/Chicken/Shanghai/F/98同源性最高(96.3%),NS2与A/Chicken/Beijing/1/1994和A/Chicken/Shanghai/F/1998同源性最高(96.7%)。H9N2AIV的NS1蛋白第92位D氨基酸,且NS1蛋白C-端缺失13个氨基酸,表现为低致病性的分子特征。结论家禽市场污水来源的H9N2AIV的NS1蛋白缺乏高致病性及感染人的分子特征,传播至人的风险较小。
- 张如胜欧新华宋克云陈田木刘如春孙边成
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型NS基因进化分析
- 志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌LAMP检测方法的建立及应用被引量：5
- 2013年
- 目的建立针对侵袭性质粒抗原H(ipaH)编码基因的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法利用LAMP方法对4株志贺菌、1株肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和20株其他肠道菌DNA在65℃恒温扩增30min或60min后观察结果。结果 4株志贺菌和EIEC可通过肉眼和电泳观察到阳性结果,而其他肠道菌为阴性。LAMP检测特异性与聚合酶链反应(PCR)相似,但敏感性比PCR高10倍。LAMP、PCR检出下限分别为1.2×102、1.2×103CFU/mL。LAMP和分离培养法对70例食物中毒患者和健康者肛拭子标本检测结果符合率为100%。结论 LAMP由于具有快速和无需特殊仪器的优点,可广泛用于肛拭子标本志贺菌和EIEC的检测。
- 张如胜宋克云欧新华陈静芳姚栋苏良孙边成
- 关键词：环介导等温扩增志贺菌属大肠杆菌
- 环介导等温扩增(LAMP)技术检测沙门菌属方法的建立被引量：19
- 2008年
- 建立一种检测沙门菌属快速敏感的环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)检测方法。针对沙门菌属侵袭蛋白(invA)基因序列的六个区域设计四条LAMP引物,65℃保温约60min,完成对沙门菌属的扩增,扩增产物经电泳和酶切鉴定。利用LAMP和普通PCR方法同时检测4株沙门菌和9株非沙门菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性;将肠炎沙门菌菌液做一系列10倍稀释后用LAMP和PCR方法进行检测来比较两者敏感性。4株沙门菌扩增出LAMP特征性梯状条带,9株非沙门菌没有出现LAMP扩增,LAMP产物的特异性通过限制性内切酶得到了证实;LAMP检测沙门菌属的特异性与普通PCR相同,但其敏感性比普通PCR高10倍,LAMP检测沙门菌属的检测下限为10cfu/ml,PCR检测下限为100cfu/ml。LAMP检测速度相比PCR更快速,在60min内即可完成扩增反应。建立了一个快速、特异、敏感的沙门菌属LAMP检测方法。
- 欧新华张如胜宋克云苏良魏泉德
- 关键词：环介导等温扩增沙门菌属
- 10种食源性疾病病原体高通量LAMP分子鉴别检测体系的建立及应用被引量：3
- 2011年
- 目的建立一种LAMP分子鉴别检测体系,应用于10种食源性疾病病原体的分子鉴别检测。方法针对8种细菌（沙门菌属、志贺菌属、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、EHEC O157：H7、奇异变形杆菌、霍乱弧菌和单增李斯特菌）和2种病毒（Norwalk病毒和轮状病毒）分别建立LAMP和RT-LAMP方法,分别对25种常见肠道细菌和病毒进行LAMP扩增,水浴箱内65℃扩增60 min（LAMP）或120 min（RT-LAMP）,扩增完成后利用电泳和肉眼进行结果判断。对365份食源性疾病患者呕吐物、肛拭子和食品等标本进行10种食源性疾病病原体LAMP分子检测。结果 10种食源性疾病病原体LAMP或RT-LAMP方法均只对靶病原体出现阳性结果,电泳显示为LAMP特异性梯状条带,加SYBRGreen I后肉眼观察反应液变为绿色;8种细菌性病原体LAMP检测方法的敏感度为3×100~1.2×102cfu/ml,其中6种LAMP方法敏感度高于PCR方法,其他病原体（霍乱弧菌、EHEC O157：H7、Norwalk病毒和轮状病毒）敏感度与PCR方法相同。从365份标本中检出沙门菌属11份、志贺菌属6份、金黄色葡萄球菌13份、EHEC O157：H7 2份、副溶血性弧菌2份、单增李斯特菌2份、Norwalk病毒12份和轮状病毒7份。结论建立了一个较为完整的LAMP分子鉴别检测体系,可以在一台水浴箱内同时对10种食源性疾病病原体进行高通量的分子鉴别检测,具有快速、不需要特殊仪器和肉眼判断结果的优势,适合基层单位的实验室开展食源性疾病的分子鉴别诊断。
- 孙边成张如胜宋克云欧新华姚栋苏良叶文陈法明
- 关键词：食源性疾病病原体环介导等温扩增高通量
- 长沙市流行性感冒病毒病原学检测结果分析被引量：8
- 2006年
- 目的 对长沙市2004～2006年4月流行性感冒病毒（简称流感）的病原学监测结果进行分析。方法 采集流感样病例（ILI）的鼻咽拭子标本用狗肾细胞（MDCK）进行病毒分离培养，采用血凝（HA）及血凝抑制（HI）方法进行流感病毒初筛及分型鉴定。结果 二年共监测ILI鼻咽拭子标本470份，分离到流感病毒64株，阳性分离率为13．62％，经分型鉴定A（H3N2）亚型21株，A（H1N1）亚型22株，B型21株，7株因HA〈1：8或病毒丢失未能分型；疑似流感疫情ILI鼻咽拭子标本178份，分离到流感病毒44株，阳性分离率为24．72％，经分型鉴定A（H3N2）亚型10株，A（H1N1）亚型13株，B型21株。结论 长沙市流感流行株为A（H1N1）亚型，A（H3N2）亚型及B型，未发现流感变异株。
- 袁洁苏良叶文宋克云欧新华
- RT-LAMP快速检测Norwalk病毒GⅡ型被引量：10
- 2009年
- 建立一种检测Norwalk病毒GⅡ型快速、敏感的一步逆转录环介导等温扩增(Reverse transcription-loop-me-diated isothermal amplification,RT-LAMP)方法。针对Norwalk病毒RNA聚合酶基因特异性序列的6个区域设计4条LAMP引物,65℃保温约120 min,完成对Norwalk病毒GⅡ的扩增,扩增产物通过肉眼观察、SYBR GreenI染色、凝胶电泳及酶切消化进行鉴定。利用RT-LAMP和RT-PCR方法同时检测48份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本来验证RT-LAMP方法的特异性;将Norwalk病毒GⅡ RNA一系列稀释后用RT-LAMP和RT-PCR方法进行检测来比较两者敏感性。46份Norwalk病毒GⅡ粪便标本出现LAMP扩增反应:通过肉眼观察、SYBR Green Ⅰ染色和凝胶电泳均能观察到LAMP扩增产物的存在,LAMP产物的特异性通过酶切消化加以证实;2份Norwalk病毒GⅡ粪便标本和12份A组轮状病毒标本未出现RT-LAMP扩增。RT-LAMP与RT-PCR特异性符合率为100%,RT-LAMP和RT-PCR检测Norwalk病毒GⅡ的检测下限均为15.6pg/管。与RT-PCR相比较,一步RT-LAMP法检测粪便中Norwalk病毒GⅡ的方法是一种快速、敏感、特异且准确的方法,有望用于快速检测感染性腹泻暴发时粪便中的Norwalk病毒GⅡ。
- 宋克云张如胜欧新华苏良杨秋林
- 关键词：RNA聚合酶
- 115例手足口病原学监测结果分析被引量：6
- 2010年
- 目的:探讨长沙地区手足口病的病原学特征,为当地的疾病预防和控制提供科学依据。方法:使用肠道通用和EV71、CAl6特异性引物,对2009年长沙市的115例手足口病患者的疱疹液、粪便、咽拭子标本,进行RT-PCR鉴定,并对手足口病疫情开展监测,采用流行病学方法对结果进行统计分析。结果:在采集到标本的115例患者中,84例患者检测结果为阳性,其中19例检测为EV71病毒核酸阳性(22.62%);30例检测CAl6阳性(35.71%);35例检测到其他肠道病毒(41.67%)。阳性标本中男女性别比为(1.27:1),发病年龄主要集中1-5岁儿童(90.47%),尤其是在3岁组(34.52%);发病季节主要集中于4-8月。结论:在长沙地区手足口病易发于1-5岁儿童,应在春夏季重点加强这一人群的预防和控制措施。
- 王静张如胜欧新华宋克云
- 关键词：手足口病RT-PCR病原学
- 快速检测单核细胞增生李斯特菌LAMP方法的建立被引量：4
- 2012年
- 目的:建立一种检测单核细胞增生李斯特菌核酸的快速、特异的环介导等温扩增(Loop-mediated isothermalamplification,LAMP)方法。方法:针对单核细胞增生李斯特菌的李斯特菌溶血素hlyA基因设计4条LAMP引物,在水浴箱内65℃保温约60 min,完成对单核细胞增生李斯特菌的扩增,扩增产物经肉眼、SYBR Green I染色和电泳鉴定。利用LAMP和PCR方法同时检测1株单核细胞增生李斯特菌和10株非单核细胞增生李斯特菌(对照组)来验证LAMP方法的特异性。用LAMP和PCR方法分别检测一系列稀释后的单核细胞增生李斯特菌菌液,比较两者的敏感性。结果:经肉眼、加染料和电泳均能观察到1株单核细胞增生李斯特菌LAMP扩增阳性反应,10株非单核细胞增生李斯特菌没有出现LAMP扩增。LAMP敏感度比PCR高,LAMP检测单核细胞增生李斯特菌的检测下限为3 cfu/ml,PCR检测下限>300 cfu/ml。LAMP检测速度比PCR更快,只需要60 min。结论:建立了一种检测单核细胞增生李斯特菌的快速、特异的LAMP方法。
- 姚栋张如胜欧新华宋克云
- 关键词：环介导等温扩增单核细胞增生李斯特菌溶血素基因
- 长沙市饮食从业人员血清ALT与肝炎病毒血清标志关系分析被引量：1
- 2003年
- 目的 了解长沙市饮食从业人员 AL T异常情况及分析 AL T异常与各型肝炎病毒感染之间的关系。 方法 采用赖氏法进行 AL T检测 ,应用酶联免疫吸附试验 (EL ISA)方法对 132例 AL T异常者进行甲—庚型肝炎病毒标志物的分析。 结果 AL T异常率为 1.4 2 % ,甲一庚型肝炎病毒标志阳性率为 6 1.36 %。AL T异常者肝炎病毒标志以乙肝病毒为主 (2 8.0 3% ) ,戊肝病毒 12 .88% ,丙肝病毒 10 .6 1% ,庚肝病毒 5 .3% ,甲肝病毒 3.0 3% ,丁肝病毒 1.5 2 %。 结论 AL T异常与肝炎病毒感染呈相关性 ,应重视从业人员中 AL
- 宋克云黄鸿飞曹厉陈梅俊
- 关键词：丙氨酸转氨酶肝炎病毒饮食从业人员
