张如胜
- 作品数：76 被引量：319H指数：9
- 供职机构：长沙市疾病预防控制中心更多>>
- 发文基金：湖南省医药卫生科研计划课题湖南省自然科学基金长沙市科技计划项目更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学理学轻工技术与工程更多>>
- LAMP技术用于霍乱弧菌检测的研究被引量：7
- 2012年
- 霍乱是由霍乱弧菌感染所引起的,属于甲类传染病.因此,建立一种快速、灵敏、特异的检测方法,对霍乱的预防和控制工作有十分重要的现实意义.通过霍乱弧菌外膜蛋白的ompW基因设计特异引物,建立霍乱弧菌的LAMP检测方法,同时对细菌进行扩增以检测该方法的灵敏度和特异性,并与普通PCR进行比较.实验的全部反应可在2 h内完成,且反应结果可通过肉眼观测直接判定;实验中霍乱弧菌的LAMP检测方法灵敏度是普通PCR的100倍,最低检出下限为10-5;检测霍乱弧菌均为阳性,其它13株非霍乱菌则全部阴性,特异度为100%.结果表明:该方法能快速、灵敏、特异性地检测霍乱弧菌,为快速检测病原微生物起到了很好的借鉴作用.
- 陈传凌霄郭震邵筱张如胜魏泉德
- 关键词：核酸扩增技术霍乱弧菌
- 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA及NS基因进化分析被引量：4
- 2017年
- 目的分析2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)血凝素(Hemagglutinin,HA)、神经氨酸酶(Neuraminidase,NA)及非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进化特征。方法从2014年长沙市活禽市场采集501份环境标本,利用Real-time PCR方法进行A型、H5、H7和H9亚型流感病毒核酸检测,并对单一H5阳性标本进行核苷酸测序,病毒HA、NA和NS基因测序结果进行在线BLAST分析,利用Mega5和Bioedit软件构建核苷酸进化树和氨基酸(Amino acids,aa)比对。结果从501份环境标本中检出A型H5亚型病毒阳性标本177份(检出率35.33%),其中8份标本经核苷酸测序鉴定为H5N1亚型病毒,进化分析表明大部分H5N1病毒HA基因位于2.3.2分支内,聚集形成一个新亚分支,NA及NS基因位于2.3.2.1b亚分支。HA蛋白受体结合位点aa为QSG,表现为禽流感病毒受体特征;NA蛋白未出现H275Y及N295Saa替换,对神经氨酸酶抑制剂敏感;HA、NA及NS蛋白关键分子位点表现为高致病性的分子特征。结论 2014年长沙市活禽市场污水中H5N1亚型禽流感病毒HA、NA和NS基因表现为高致病性的分子特征,但不具有对人易感的受体特征,需要进一步监测。
- 张如胜孙边成姚栋叶文陈静芳黄政刘晓蕾欧新华陈发明
- 关键词：活禽市场禽流感病毒H5N1亚型基因
- 甲型H1N1流感死亡病例三株病毒分离株血凝素基因测序分析
- 2010年
- 目的 对长沙市3株甲型H1N1流感死亡病例病毒分离株HA基因的来源和变异情况进行研究.方法 对长沙市的3例甲型H1N1流感死亡病例的鼻/咽拭子标本进行RT-PCR检测和流感病毒分离,利用WHO推荐的测序引物和CEQTM8000 Genetic Analysis System对3株甲型H1N1流感死亡病例病毒株[A/湖南开福/SWL4142/2009（H1N1）,A/湖南长沙/SWL4346/2009（H1 N1）,A/湖南芙蓉/SWL4224/2009（H1N1）]HA基因进行测序,测序方法为末端标记循环法（Dye Terminator Cycle sequencing）,测序结果提交至GenBank,并用ClustalX和Mega4.1软件对测序结果进行氨基酸比对分析和构建进化树.结果 A/湖南开福/SWL4142/2009（H1N1）,A/湖南长沙/SWL4346/2009（H1N1）和A/湖南芙蓉/SWL4224/2009（H1N1）3株病毒株HA基因序列分别与甲型H1 N1流感病毒A/NewYork/3502/2009（H1N1）,A/Shanghai/71T/2009（H1N1）和A/Chita/01/2009（H1N1）分离株高度同源,同源性为99%,与国内甲型H1N1流感病毒株A/Sichuan/1/2009（H1N1）核苷酸同源性在99.5%以上 进化树分析显示包括3株病毒株在内的甲型H1N1流感病毒与A/Swine/Indiana/P12439/00亲缘关系近,但与人季节性A流感病毒（H1N1）、禽流感亲缘关系较远.与A/Swine/Indiana/P12439/00 HA基因比较发现：3株病毒株HA基因分别有28、30、27个氨基酸发生变异,但3株病毒株在21个重要抗原位点中只有一个R53K氨基酸替换 对全球364条甲型H1N1流感病毒HA基因序列进行多重比对发现有119个非保守氨基酸位点,其中5个位于重要抗原位点.结论 3株病毒株和其他甲型H1N1流感病毒HA基因可能由北美猪流感病毒变异而来 3株病毒株HA基因与国内外甲型H1N1流感病毒高度同源,同全球绝大多数甲型H1N1流感病毒一样处于稳定状态.
- 张如胜欧新华田斌
- 关键词：血凝素类
- PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的研究被引量：3
- 2008年
- 目的建立一种检测金黄色葡萄球菌肠毒素C的快速敏感PCR方法。方法根据金黄色葡萄球菌肠毒素C基因编码序列,设计1对PCR引物来特异性扩增靶基因片段,片段长度为600 bp,通过对1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株和5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株进行检测来评价该方法的特异性;对金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株做一系列10倍稀释后进行PCR检测,并对其进行敏感性分析,对PCR扩增产物进行电泳和测序鉴定。结果1株金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应呈阳性,5株非金黄色葡萄球菌产肠毒素C菌株PCR扩增反应为阴性;通过基因测序证实了PCR产物的特异性;PCR检测金黄色葡萄球菌肠毒素C基因的检测下限为1.5×102cfu/ml。结论本研究建立了一个快速、特异、敏感的金黄色葡萄球菌肠毒素C基因PCR检测方法。
- 王华丽蔡慧萍张如胜
- 关键词：PCR金黄色葡萄球菌
- 长沙市家禽市场环境中H5N1亚型禽流感病毒传播风险研究被引量：7
- 2012年
- 目的对长沙市家禽市场职业暴露人群进行禽流感病毒（AIv）H5N1亚型抗体水平和环境AIV核酸检测，并对环境中AIVH5N1亚型的血凝素（HA）基因进行测序分析。方法抽取长沙市1个区和1个县，各选择2个城区或乡镇家禽市场进行职业暴露人群H5N1抗体和环境AIV核酸检测。利用单放射免疫扩散溶血实验（SRH）对102份家禽市场职业暴露人员血清标本进行H5N1抗体检测，real-time PCR方法检测160份家禽市场环境标本（污水、禽类粪便、羽毛和禽类笼具表面涂抹标本）AIV核酸，对4份污水H5N1亚型AIV核酸阳性标本进行HA基因RT-PCR扩增和TA克隆测序，测序结果利用Lasergene和Mega5．0软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果AIVH5N1抗体监测结果显示，家禽市场职业暴露人群血清H5N1抗体阳性率为25．5％（26／102），其中乡镇和城区家禽市场职业暴露人群阳性率分别为50．0％（9／18）和25．4％（17／67），乡镇家禽市场职业暴露人群阳性率高于城区。长沙市家禽市场环境中H5亚型AIV核酸阳性率为3113％（50／160），其中乡镇家禽市场阳性率为37．3％（31／83），高于城区家禽市场24．7％（19／77）；不同标本H5亚型AIV核酸阳性率不同：污水（50．0％，24／48）、羽毛（44．5％，4／9）、禽类粪便（29．8％，14／47）和禽类笼具表面涂抹（14．3％，8／56）；差异均有统计学意义（P〈0．01）。TA克隆测序得到4个AIV H5N1亚型HA基因序列，进化树显示4个AIV H5N1亚型HA基因与中国内地和香港禽来源的AIV分离株为同一分组，属于欧亚分支；4个AIVH5N1亚型HA基因受体结合位点氨基酸序列仍然为禽源（QSG）、HA1和HA2蛋白之间连接肽为多个碱性氨基酸序列（RERRRKK或RERRGKK），与人源AIV H5N1亚型具有相同的受体结合位点和高致病性的分子特征。结论长沙市家禽市场环境中存在较多数量的AIV H5N1亚型，是�
- 张如胜欧新华宋克云袁洁陈田木肖姗孙边成
- 关键词：禽流感病毒
- 长沙市家禽市场污水来源H9N2亚型禽流感病毒NS基因进化分析被引量：1
- 2013年
- 目的对长沙市家禽市场污水来源的H9N2亚型禽流感病毒(Avian influenza virus,AIV)的非结构蛋白(Non-structural,NS)基因进行进化和分子特征分析,探讨其传播风险。方法从家禽市场收集1份H9N2AIV样本(C09055049)进行NS基因PCR扩增和TA克隆测序,测序结果利用Lasergene和Mega5软件进行氨基酸比对和进化树构建。结果序列分析表明,NS基因核苷酸序列全长890bp,分别编码NS1(217个氨基酸)和NS2(121个氨基酸)两个蛋白,进化树显示本研究中的NS基因属于A等位基因群的A/Chicken/Shanghai/F/1998-like,起源于国内最早的分离株A/Chicken/Beijing/1/94;NS基因与进化树不同分支代表株氨基酸比对显示,NS1与A/Chicken/Shanghai/F/98同源性最高(96.3%),NS2与A/Chicken/Beijing/1/1994和A/Chicken/Shanghai/F/1998同源性最高(96.7%)。H9N2AIV的NS1蛋白第92位D氨基酸,且NS1蛋白C-端缺失13个氨基酸,表现为低致病性的分子特征。结论家禽市场污水来源的H9N2AIV的NS1蛋白缺乏高致病性及感染人的分子特征,传播至人的风险较小。
- 张如胜欧新华宋克云陈田木刘如春孙边成
- 关键词：禽流感病毒H9N2亚型NS基因进化分析
- 长沙市2010年手足口病EV71型VP1区基因序列分析被引量：6
- 2011年
- 目的了解2010年长沙市手足口病（hand-foot-mouth disease,HFMD）重症和普通病例肠道病毒71型（human Enterovirus 71,EV71）VP1区基因特征。方法收集12例HFMD重症和普通病例的咽拭子或肛拭子标本进行VP1区基因RT-PCR扩增和核苷酸序列测定,测序结果利用sequin软件提交至GenBank,Lasergene和Mega5软件对测序结果进行氨基酸比对分析和构建进化树。结果 12株EV71 VP1区基因序列在进化树上与C基因型中的C4a亚型代表株属同一分支,在核苷酸同源性分析中,12株EV71与C4a亚型代表株（3254-TAI-98）的同源性达到92.6%-93.3%,高于与A、B、C1、C2、C3、CVA16型或亚型代表株的同源性（分别为79.9%-80.7%、83.1%-84.0%、87.9%-88.7%、89.1%-89.8%8、7.8%-88.2%和57.3%-58.4%）;12株EV71病毒VP1之间的核苷酸有高度的同源性：同源性为98.1%-100.0%,高于与C4亚型代表株的同源性（92.6%-93.3%和91.8%-92.7%）。2010年分离自长沙的重症和普通病例与2008年分离自北京、深圳和阜阳的EV71病毒VP1基因序列之间的氨基酸变异位点少。结论 2010年长沙市流行的EV71型病毒属于C基因型中的C4亚型;12例HFMD重症和普通病例的EV71 VP1区基因序列差异较小;不同时间、不同地区和不同病例来源的EV71 VP1区氨基酸变异位点无关联。
- 欧新华张如胜叶文宋克云孙边成陈法明
- 关键词：手足口病肠道病毒71型VP1
- 长沙市甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶基因序列分析
- 2011年
- 目的对长沙市甲型H1N1流感病毒A/changsha/78/2009的神经氨酸酶(neuraminidase,NA)基因进行测序分析,以期了解该病毒的来源及变异情况。方法利用国家流感中心(CNIC)和世界卫生组织(WHO)推荐的NA基因测序引物和CEQTM8000 Genetic Analysis System对2009年长沙市甲型H1N1流感患者阳性鼻咽拭子标本(A/changsha/78/2009)进行测序,测序结果提交至GenBank并利用Lasergene和Mega5软件对测序结果进行氨基酸比对和进化树分析。结果 A/changsha/78/2009 NA基因GenBank登录号为:GQ463958.1,与瑞典斯德哥尔摩甲型H1N1流感病毒分离株A/Stockholm/37/2009(H1N1)核苷酸同源性为100%;进化树分析显示A/changsha/78/2009 NA基因属于欧亚猪流感分支,包含A/changsha/78/2009在内的甲型H1N1流感病毒与A/swine/Spain/WVL6/1991(H1N1)亲缘关系近;A/chang-sha/78/2009与A/swine/Spain/WVL6/1991 NA基因均有7个潜在糖基化位点,A/changsha/78/2009 NA基因未发生H274Y位点突变。结论包含A/changsha/78/2009在内的甲型H1N1流感病毒NA基因可能来源于欧亚猪流感病毒,A/changsha/78/2009病毒对神经氨酸酶抑制剂类药物敏感。
- 宋克云张如胜欧新华
- 关键词：甲型H1N1流感病毒神经氨酸酶
- 志贺菌和肠侵袭性大肠埃希菌LAMP检测方法的建立及应用被引量：5
- 2013年
- 目的建立针对侵袭性质粒抗原H(ipaH)编码基因的环介导等温扩增(LAMP)方法。方法利用LAMP方法对4株志贺菌、1株肠侵袭性大肠埃希菌(EIEC)和20株其他肠道菌DNA在65℃恒温扩增30min或60min后观察结果。结果 4株志贺菌和EIEC可通过肉眼和电泳观察到阳性结果,而其他肠道菌为阴性。LAMP检测特异性与聚合酶链反应(PCR)相似,但敏感性比PCR高10倍。LAMP、PCR检出下限分别为1.2×102、1.2×103CFU/mL。LAMP和分离培养法对70例食物中毒患者和健康者肛拭子标本检测结果符合率为100%。结论 LAMP由于具有快速和无需特殊仪器的优点,可广泛用于肛拭子标本志贺菌和EIEC的检测。
- 张如胜宋克云欧新华陈静芳姚栋苏良孙边成
- 关键词：环介导等温扩增志贺菌属大肠杆菌
- 长沙市活禽市场外环境H9N2监测与患者分离株HA基因序列的比较研究被引量：1
- 2020年
- 目的了解长沙市活禽市场外环境H9N2禽流感病毒(avian influenza viras,AIV)污染情况及病毒血凝素基因(hermagglutinin,HA)的遗传进化和分子特征,并与长沙市分离的2株人感染H9N2毒株相比较。方法采集长沙市活禽市场监测点外环境样本,实时荧光RT-PCR检测禽流感病毒FluA及H5、H9亚型核酸;H9阳性样本采用鸡胚分离毒株,血凝实验及实时荧光RT-PCR鉴定毒株的型别;普通逆转录PCR扩增病毒HA基因全长并测序,生物信息学软件对序列进行比对和遗传进化分析。结果 2015—2017年共采集活禽市场环境样本1 519份, FluA核酸阳性率为78.80%(1 197/1 519);其中H5阳性率为4.34%(66/1 519)、H9阳性率为41.74%(634/1 519)、H5+H9阳性率为20.28%(308/1 519)。3例环境来源和2份人感染H9N2毒株样本HA基因核苷酸序列同源性为96.31%~98.73%,氨基酸同源性为97.02%~99.15%;系统进化树显示,人源与禽源HA基因均属于欧亚分支中的Y280亚群。序列分析结果显示,5株病毒HA裂解位点均为RSSR↓GLF,符合低致病力病毒特征;受体结合位点均出现Q234L突变,具有结合哺乳动物α-2,6唾液酸受体的能力;糖基化位点均为7个;个别氨基酸位点人源与禽源毒株存在差异(第297、510位氨基酸)。结论长沙市活禽市场H9亚型禽流感病毒污染严重,病毒HA基因与从人体中分离的毒株同源性高,存在跨种感染人的风险。
- 徐明忠孙边成张如胜欧新华姚栋李灵之陈静芳
- 关键词：活禽市场HA基因
