冯晶晶
- 作品数：3 被引量：18H指数：2
- 供职机构：温州医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 尿液上皮细胞中巨细胞病毒载量预测婴儿巨细胞病毒激活感染的价值被引量：15
- 2009年
- 目的探讨尿液上皮细胞（EC）中人巨细胞病毒（HCMV）DNA载量预测婴儿活动性HCMV感染的应用价值。方法分别收集82例HCMV潜伏感染组和84例活动性感染组婴儿外周血和尿液标本，采用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）和化学发光免疫分析检测血浆HCMV DNA载量和HCMV IgM／IgG抗体；间接免疫荧光法检测外周血多形核白细胞（PMNLs）中HCMV pp6S抗原；UF-100尿沉渣全自动分析仪和FQ-PCR分别做尿液EC计数和HCMV DNA载量检测，并计算尿液EC中HCMV DNA载量。同时，用受试者工作特征曲线（ROC）评价尿液上皮细胞中HCMV DNA载量在婴儿HCMV激活感染诊断中的敏感度和特异度。结果166例HCMV感染婴儿尿液上皮细胞中HCMV DNA阳性检出率最高，为94．58％（157／166），病毒载量范围为5．67×10^2-1．31×10^7拷贝／10^3EC；不同时段尿液EC中HCMV DNA载量差异无统计学意义（F=0．19，P〉0．05）；活动性感染组尿液EC中HCMV DNA载量[5．13±0．99（拷贝／10^3EC，lg）]显著高于潜伏感染组[3．92±0．82（拷贝／10^3EC，lg），t=8．52，P〈0．01]；根据ROC曲线，当cut—off值为4．55时，尿液EC中HCMV DNA载量对活动性感染诊断的敏感度和特异度分别为71．4％和75．2％；活动性感染患儿更昔洛韦治疗后尿液EC中HCMV DNA载量显著低于治疗前（t=5．44，P〈0．01）。结论尿液EC中HCMV DNA载量用于预测婴儿HCMV活动性感染是一种简便、有效的方法，并能用于治疗监测。
- 郑晓群冯晶晶林虹陈益平卢朝升吕建新
- 关键词：巨细胞病毒感染巨细胞病毒上皮细胞
- 重组hcmvIL-10的表达纯化及免疫抑制活性研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨重组人巨细胞病毒白细胞介素10(hcmvIL-10)对单核细胞的免疫抑制活性及分化相关基因表达的影响。方法:将重组的原核表达质粒pMal-c2X-hcmvIL-10和pMal-c2X-hIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,采用Amylose-resin亲和层析纯化重组蛋白,并用葡聚糖凝胶(Sephadex G-75)进行二次纯化。纯化的重组蛋白hcmvIL-10和人白细胞介素10(hIL-10)分别与THP-1细胞作用后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养细胞上清液TNF-α水平;实时荧光定量PCR与流式细胞术分别检测THP-1细胞HLA-DR mRNA及HLA-DR分子的表达;采用功能分类Th1-Th2-Th3 PCRARRAY检测分化相关基因表达谱。结果:重组蛋白hcmvIL-10和hIL-10经SDS-PAGE及Western blot鉴定与目的相符;不同浓度(2、10和50 ng/ml)重组hcmvIL-10和hIL-10分别与经PHA诱导的THP-1细胞作用48小时后,培养上清液中TNF-α的浓度分别为:(3.8±0.96)pg/ml、(1.95±0.51)pg/ml、(1.6±0.45)pg/ml和(2.49±0.43)pg/ml、(1.77±0.38)pg/ml、(0.98±0.16)pg/ml,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P<0.01);不同浓度重组hcmvIL-10和hIL-10分别与THP-1细胞作用48小时后,HLA-DR mRNA相对表达量分别为:0.86±0.025、0.76±0.023、0.75±0.017和0.73±0.017、0.61±0.017、0.55±0.015,HLA-DR分子的表达分别为:(11.5±0.44)%、(10.1±0.30)%、(9.1±0.38)%和(10.9±0.10)%、(9.7±0.50)%、(7.5±0.32)%,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P<0.01);功能分类Th1-Th2-Th3 PCR ARRAY共检测84个分化相关基因,hcmvIL-10处理组共有8个基因差异表达,上调基因为IL-12RB2、NFATC2、SOCS2、TYK2、GFI1和CEBPB,下调基因为CD80和CTLA4;hIL-10处理组共有5个基因差异表达,上调基因为SOCS2,下调基因为CD80、CD28、CTLA4和IL-6。结论:重组蛋白hcmvIL-10可抑制THP-1细胞分泌TNF-α,下调THP-1细胞HLA-DR分子的表达,类似hIL-10的免疫抑制功能;重组蛋白hcmvIL-10可影响THP-1
- 曾智高艳冯晶晶田可港浮苗彭颖郑晓群
- 关键词：人巨细胞病毒白细胞介素10免疫抑制
- 人巨细胞病毒潜伏相关IL-10基因克隆及体外表达被引量：1
- 2010年
- 为了研究人巨细胞病毒潜伏相关白细胞介素-10(LA-cmvIL-10)及巨细胞病毒编码的白细胞介素-10(cmvIL-10)在病毒感染中的作用,构建了cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因的原核及真核表达体系。从患儿尿液标本中提取病毒DNA,应用重叠延伸PCR扩增cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子,产物克隆至原核表达载体pMal-c2x和真核表达载体pCDNA3.1上,测序显示扩增的cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子包含了完整的编码区;重组的原核表达质粒pMal-c2x-cmvIL-10和pMal-c2x-LAcmvIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在受体菌内表达目的蛋白。将表达产物免疫家兔,获得特异性抗血清。真核表达载体pCDNA3.1-cmvIL-10和pCDNA3.1-LAcmvIL-10转染Hela细胞,经Western blot鉴定与设计相符。
- 郑晓群冯晶晶曾智姜招嫦季敬璋李祥吕建新
- 关键词：人巨细胞病毒白细胞介素-10克隆体外表达
