曾智
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 供职机构：温州医学院附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金浙江省教育厅科研计划更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 重组hcmvIL-10的表达纯化及免疫抑制活性研究被引量：2
- 2012年
- 目的:探讨重组人巨细胞病毒白细胞介素10(hcmvIL-10)对单核细胞的免疫抑制活性及分化相关基因表达的影响。方法:将重组的原核表达质粒pMal-c2X-hcmvIL-10和pMal-c2X-hIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3)进行诱导表达,采用Amylose-resin亲和层析纯化重组蛋白,并用葡聚糖凝胶(Sephadex G-75)进行二次纯化。纯化的重组蛋白hcmvIL-10和人白细胞介素10(hIL-10)分别与THP-1细胞作用后,采用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测培养细胞上清液TNF-α水平;实时荧光定量PCR与流式细胞术分别检测THP-1细胞HLA-DR mRNA及HLA-DR分子的表达;采用功能分类Th1-Th2-Th3 PCRARRAY检测分化相关基因表达谱。结果:重组蛋白hcmvIL-10和hIL-10经SDS-PAGE及Western blot鉴定与目的相符;不同浓度(2、10和50 ng/ml)重组hcmvIL-10和hIL-10分别与经PHA诱导的THP-1细胞作用48小时后,培养上清液中TNF-α的浓度分别为:(3.8±0.96)pg/ml、(1.95±0.51)pg/ml、(1.6±0.45)pg/ml和(2.49±0.43)pg/ml、(1.77±0.38)pg/ml、(0.98±0.16)pg/ml,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P<0.01);不同浓度重组hcmvIL-10和hIL-10分别与THP-1细胞作用48小时后,HLA-DR mRNA相对表达量分别为:0.86±0.025、0.76±0.023、0.75±0.017和0.73±0.017、0.61±0.017、0.55±0.015,HLA-DR分子的表达分别为:(11.5±0.44)%、(10.1±0.30)%、(9.1±0.38)%和(10.9±0.10)%、(9.7±0.50)%、(7.5±0.32)%,除2 ng/ml重组hcmvIL-10处理组外,其它处理组与对照组比较均明显降低(P<0.01);功能分类Th1-Th2-Th3 PCR ARRAY共检测84个分化相关基因,hcmvIL-10处理组共有8个基因差异表达,上调基因为IL-12RB2、NFATC2、SOCS2、TYK2、GFI1和CEBPB,下调基因为CD80和CTLA4;hIL-10处理组共有5个基因差异表达,上调基因为SOCS2,下调基因为CD80、CD28、CTLA4和IL-6。结论:重组蛋白hcmvIL-10可抑制THP-1细胞分泌TNF-α,下调THP-1细胞HLA-DR分子的表达,类似hIL-10的免疫抑制功能;重组蛋白hcmvIL-10可影响THP-1
- 曾智高艳冯晶晶田可港浮苗彭颖郑晓群
- 关键词：人巨细胞病毒白细胞介素10免疫抑制
- 人巨细胞病毒潜伏相关IL-10基因克隆及体外表达被引量：1
- 2010年
- 为了研究人巨细胞病毒潜伏相关白细胞介素-10(LA-cmvIL-10)及巨细胞病毒编码的白细胞介素-10(cmvIL-10)在病毒感染中的作用,构建了cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因的原核及真核表达体系。从患儿尿液标本中提取病毒DNA,应用重叠延伸PCR扩增cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子,产物克隆至原核表达载体pMal-c2x和真核表达载体pCDNA3.1上,测序显示扩增的cmvIL-10基因和LA-cmvIL-10基因外显子包含了完整的编码区;重组的原核表达质粒pMal-c2x-cmvIL-10和pMal-c2x-LAcmvIL-10转化受体菌E.coli BL21(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,在受体菌内表达目的蛋白。将表达产物免疫家兔,获得特异性抗血清。真核表达载体pCDNA3.1-cmvIL-10和pCDNA3.1-LAcmvIL-10转染Hela细胞,经Western blot鉴定与设计相符。
- 郑晓群冯晶晶曾智姜招嫦季敬璋李祥吕建新
- 关键词：人巨细胞病毒白细胞介素-10克隆体外表达
