齐藤真木子
- 作品数：3 被引量：13H指数：1
- 供职机构：东京大学更多>>
- 发文基金：辽宁省博士科研启动基金博士科研启动基金国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生更多>>
- 小鼠3种α1,2岩藻糖转移酶基因的比较被引量：1
- 2005年
- 利用RT-PCR方法克隆小鼠3种GDP岩藻糖:β-半乳糖苷α1,2-岩藻糖转移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2-FT)基因编码区MFUT-I、MFUT-II、MFUT-III,序列分析结果表明MFUT-I、MFUT-II和MFUT-III间具有相当的同源性,且分别与人类H基因(78.4%)、Se基因(79.0%)和Sec1基因(74.9%)具有序列同源性。将3种基因编码区分别插入表达载体pcDNA3.1的多克隆位点,并将其分别转染于COS-7细胞,结果显示MFUT-I和MFUT-II基因转染后的COS-7细胞具有α1,2-FT活性,但在MFUT-III基因转染后的COS-7细胞中检测不到这种活性。应用Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况。证实MFUT-II可在多种组织中产生3.5kb大小的mRNA转录产物,然而MFUT-I和MFUT-III分别只在附睾和睾丸中显著表达。Southern印迹杂交分析结果显示:基因MFUT-II仅为一个拷贝,而MFUT-I和MFUT-III可能存在2个拷贝。因此,MFUT-I、MFUT-II和MFUT-III分别为鼠的H基因、Se基因和Sec1基因。
- 林蓓齐藤真木子岩森正男
- 关键词：小鼠岩藻糖COS-7细胞RT-PCR方法PCDNA3.1
- 小鼠α1,2岩藻糖基转移酶基因的克隆及表达被引量：1
- 2005年
- 本文报告小鼠GDP岩藻糖:β半乳糖苷α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-fucosyltansferase,α1,2- FT)基因的克隆,并进行功能鉴定。利用RT-PCR方法克隆小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因编码区 MFUT-Ⅱ,测序后将其插入表达载体pcDNA3．1的多克隆位点,构建表达载体pcDNA3．1-MFUT-Ⅱ; 采用磷酸钙法将其转染于COS-7细胞进行表达,通过对底物特异性比较研究酶的性质;应用 Northern印迹杂交法研究基因在小鼠组织中的表达情况;应用southern印迹杂交法分析基因存在状态。结果证实MFUT-Ⅱ为小鼠α1,2-岩藻糖基转移酶基因家族的新成员,含有一个完整的开放读码框,可编码347个氨基酸．其估计分子质量为39 kDa,和小鼠H及Secl基因具有序列同源性,分别与人类Se基因(79．0％)、大鼠Rat FTB(89％)基因、兔Rabbit FT-Ⅲ基因(77％)具有较高的序列同源性。用MFUT-Ⅱ基因转染的COS-7细胞具有α1,2-FT活性,MFUT-Ⅱ可在多种组织中产生 3．5kb大小的mRNA转录产物。基因Southern印迹杂交分析结果显示:基因MFUT-Ⅱ仅为一个拷贝。这些结果证明MFUT-Ⅱ为小鼠的Se基因。
- 林蓓齐藤真木子岩森正男
- 关键词：基因克隆小鼠
- α1,2-岩藻糖转移酶基因转染增加卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ Lewis y抗原的表达被引量：12
- 2008年
- 目的将人α1,2-岩藻糖基转移酶(α1,2-FT)基因转染卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ并探讨细胞表面Lewisy及其他相关糖脂抗原的变化。方法采用PCR方法克隆人α1,2-FT基因编码区HFUT-H,构建表达载体pcDNA3.1(-)-HFUT-H,利用磷酸钙法将其转染入卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ,建立α1,2-FT基因稳定高表达细胞株RMG-Ⅰ-H。通过酶活性测定证明转染前后细胞系α1,2-FT活性的改变,采用薄层层析、薄层层析免疫染色方法测定转染前后细胞脂质及糖脂,特别是Ⅱ型寡糖的变化。结果基因转染后细胞RMG-Ⅰ-H中H-1抗原及Lewisy抗原显著增加,特别是Lewisy抗原为转染前的20倍;而Ⅰ型糖链Lewisb显著减少。转染前后细胞膜上的主要脂质成分胆固醇和磷脂质的含量没有变化,且中性糖脂质也没有明显变化。结论α1,2-FT基因转染增加α1,2-FT活性的同时,增加卵巢癌细胞系RMG-Ⅰ Lewisy抗原的表达;RMG-Ⅰ Lewisy高表达细胞系的建立为研究Lewisy抗原与卵巢癌生物学行为提供了细胞模型。
- 林蓓郝莹莹王冬冬朱连成张淑兰齐藤真木子岩森正男
- 关键词：基因转染
