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CTL识别的HLA-A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位的鉴定被引量：11: 2005年; 　目的: 鉴定CTL识别的HLA A2限制性人卵巢癌相关抗原OVA66表位。方法: 以细胞因子从外周血单个核细胞(PBMC)中诱导树突状细胞(DC), 通过形态学观察和流式细胞术进行鉴定。用表位预测法选取并合成两种肽分子, 分别脉冲成熟的DC, 并刺激HLA- A2+健康人自体CD8+ T细胞。1wk后, 用脉冲肽的自体PBMC以每 7d的间隔刺激该CD8+T细胞 3次。以共接受 4次抗原肽刺激的T细胞作为CTL,用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验, 检测CTL对靶细胞的杀伤效应。用酶联免疫斑点法 (ELISPOT), 检测CTL中抗原特异性分泌IFN- γ的T细胞数。结果: 形态学和流式细胞术的结果显示, PBMC可诱生成熟的DC。肽L235(FLPDHINIV)诱导的CTL, 可特异性杀伤L235脉冲的T2细胞和OVA66+、HLA A2+的SW480细胞, 且L235诱导的特异性分泌IFN- γ的T细胞数增加。结论: 卵巢癌相关抗原OVA66的HLA A2限制性CTL表位L235, 能激发对肿瘤抗原的特异性免疫应答, 为制备肿瘤特异性肽疫苗奠定了实验基础。; 金姝王颖王树军张惠珍李美星陈影葛海良; 关键词：表位 CTL ELISPOT

TIL识别的HLA-A2限制性人黑色素瘤特异抗原肽的研究: 2005年; 目的探讨TIL识别的人黑色素瘤HLA-A2限制性的肿瘤抗原肽特性。方法通过亲和层析柱从三种肿瘤细胞系(624-Mel、Chap-Mel和JY)中纯化HLA-A2蛋白和结合的多肽分子,经弱酸高温处理和离心超滤后,应用反相-高效液相色谱层析(RT-HPLC)分离各多肽组份,并将其各组份与T2细胞共同孵育、进行重建TIL识别的人黑色素瘤特异表位试验,鉴定肽分子生物活性,通过质谱分析所获活性肽分子特性,参照活性肽序列,制备人工合成肽加以进一步证实。结果从RT-HPLC层析的624-Mel的肽组份,经特异表位鉴定发现3个活性峰(P19、P25和P31)。其中P31,TIL杀伤率达67%,质谱分析表明肽分子量为948,氨基酸序列为H+Ala Lue Trp Lue Phe Phe Gly Val Lue OH-的9肽分子。经特异表位测定表明人工合成肽具有纯化活性肽的生物活性特征。结论分离鉴定的这一9肽分子是一种TIL识别的HLA-A2限制性肿瘤抗原肽,为肿瘤防治、合成肽疫苗的研究奠定了可靠的实验基础。; 葛海良李美星金姝陈影张勇; 关键词：TIL HLA-A2限制性肿瘤抗原肽疫苗

猪软骨细胞同种异体移植的免疫排斥机制被引量：3: 2005年; 目的探讨猪软骨细胞同种异体移植的免疫排斥机制。方法分离制备猪软骨细胞和淋巴细胞 ,采用同种异体软骨细胞—淋巴细胞混合培养反应和IFN γ诱导比较分析 ,经3 H TdR法观察淋巴细胞刺激指数 ,FACS测定软骨细胞表面猪白细胞抗原(SLA)分子表达变化 ;不同时间收集混合反应中淋巴细胞 ,分别应用PCR和ELISA技术分析其表达的IFN γ、IL 4mRNA和蛋白含量。结果成功制备了猪的软骨细胞和淋巴细胞 ,软骨细胞表达SLAI类分子 ,而不表达SLAII类分子 ;同种异体软骨细胞对淋巴细胞有轻微刺激扩增作用 ,经IFN γ诱导具有明显增强作用。混合培养 ,18h后上清中可检测到IFN γ蛋白 ,而IL 4表达无变化。结论软骨细胞SLAI类分子刺激同种异体淋巴细胞产生IFN γ,进一步诱导软骨细胞SLAII类分子表达。; 张惠珍王树军柳子星李美星王颖张勇陈影葛海良; 关键词：软骨细胞淋巴细胞 IFN-Γ 同种异体移植免疫排斥蛋白含量

新的肿瘤相关抗原(OVA66)的研制和临床初步应用被引量：2: 2005年; 目的　制备OVA6 6蛋白和其抗体,探讨其检测肿瘤的应用价值。方法　应用原核表达技术和Ni2 + 亲和层析法,制备纯化的OVA6 6蛋白,经SDS- PAGE电泳鉴定,将纯化蛋白加佐剂免疫家兔,获得抗OVA6 6蛋白抗血清,并应用WesternBlot测定其滴度和特异性。利用OVA6 6蛋白和其抗体分别建立ELISA和免疫组化法,测定正常人和肿瘤患者的血清OVA6 6抗体水平和肿瘤组织标本中OVA6 6蛋白表达量。结果　获得的高纯度OVA6 6蛋白和高滴度、特异性抗OVA6 6抗血清。ELISA检测显示,正常人和肿瘤患者血清抗体水平存在显著性差异(P <0 .0 0 1)。正常人组OD均值为0 . 2 0±0 0 5 ,肿瘤患者组OD均值为0 . 36±0. 12 ,肿瘤患者中阳性率为4 0 % (46 / 116 )。免疫组化法结果表明,肿瘤组织标本阳性率达81% (34/ 4 2 ) ,而正常组织均为阴性。结论　应用OVA6 6蛋白和其抗血清建立的检测方法,为临床肿瘤辅助诊断的应用奠定基础。; 杨振熙李美星尤强陈影张惠珍葛海良; 关键词：肿瘤相关抗原 ELISA

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