赵云山
- 作品数：16 被引量：38H指数：3
- 供职机构：中国人民解放军总医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划解放军总医院科技创新基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 脾蒂血管束法构建工程化肝组织被引量：1
- 2012年
- 目的通过在脾蒂血管束内注射工程化肝组织凝胶，探讨一种体内植入较大尺度组织工程化肝脏的新方法。方法2×10^7新生大鼠肝细胞与1ml生物蛋白胶混合构建工程化肝组织凝胶。切除sD大鼠的脾脏，并远端结扎、近端套圈后形成血管束。将凝胶注入血管束内，形成体积≥1cm。的球形组织；同法构建肝组织凝胶植入大腿皮下作为对照。术后2周行大体观察，组织切片苏木素．伊红（HE）染色。结果皮下组残留组织块较小，直径（1．63±0．55）mm，其内血管组织少。实验组形成了较大的组织块，直径（7．33±2．40）mm，内有大量血管形成。结论在脾蒂血管束内构建工程化肝组织可以形成血管化的较大尺度类肝组织。
- 周海洋刘巨超孙慧伟丁毅赵云山徐迎新
- 关键词：血管化
- 胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型的建立被引量：2
- 2010年
- 目的建立胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型。方法利用组织工程技术，以胶原为支架材料，人胃低分化腺癌BGC-823细胞为种子细胞，构建胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型。倒置显微镜观察模型中肿瘤细胞的生长状态；噻唑蓝（MTT）比色法测定细胞增殖曲线；苏木素-伊红（HE）染色进行组织学观察，并与平面培养模型、胶原铺板培养模型比较。结果胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型中，肿瘤细胞呈立体生长，彼此聚集成球状；能够较长时间维持细胞活性，第7天平面培养模型、胶原铺板培养模型和胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型A496值分别为0．608、0．584和0．728，胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型与其他模型比较差异均有统计学意义（P〈0．05）；组织切片可见基质中较多微小癌巢形成。结论胶原包埋人胃癌微小癌巢体外模型能较好地模拟体内肿瘤生长状态，可用于抗肿瘤药物及免疫活性细胞的体外筛选。
- 孙培鸣徐迎新赵云山刘巨超周国艮梁文涛
- 关键词：胃癌胶原肿瘤模型
- 一种组织工程化肝移植物的构建与植入方法
- 本发明涉及再生医学和组织工程领域。本发明提供了一种可植入的工程化肝移植物及其构建方法。该方法采用水凝胶材料作为生物活性支架，复合含有促血管生成细胞因子、促肝细胞诱导因子(和生物活性物质)的缓释微球，复合肝脏细胞，构建工程...
- 徐迎新赵云山张博峰李力刘巨超李荣
- 文献传递
- 以胶原凝胶为支架原位构建可注射型工程化肝被引量：3
- 2008年
- 背景:为了解决肝移植供体的不足,最具潜力的肝组织工程技术悄然兴起,为肝组织的修复与功能重建开辟了新的前景。目的:探索一种以新生大鼠肝细胞为种子细胞,以胶原凝胶为支架材料,可原位注射的工程化肝组织构建方法。设计、时间及地点:以动物为观察对象的实验方法探索,于2007-03/2008-02在解放军总医院普通外科研究所完成。材料:成年雌性SD大鼠及出生24h以内的雄性新生SD大鼠。方法:以胰酶消化法获取新生大鼠肝细胞,以PKH26标记后与液态胶原复合,采用注射方法植入大鼠肝脏。主要观察指标:于肝细胞/胶原凝胶复合物植入当天及植入后第3,7天序贯取样、切片,分别行苏木精-伊红染色和白蛋白免疫组织化学染色后对"类肝组织"进行形态学观察,并观察植入细胞的示踪荧光。结果:①以胶原为基质构建的工程化肝组织能方便地植入到肝脏。②荧光显微镜观察到移植区域主要由PKH26阳性细胞组成。③苏木精-伊红染色显示,移植区域肝细胞在胶原凝胶中可存活、生长。④免疫组织化学染色证实植入肝细胞能够表达白蛋白。结论:以新生大鼠肝细胞/胶原凝胶为基础构建可原位注射的工程化肝组织是可行的,这种方法对于发展以组织工程为基础的原位肝脏重建具有良好的应用前景。
- 张博峰赵云山郭振华刘巨超张兰徐飞李荣徐迎新
- 关键词：胶原生物医学工程
- 用新生大鼠肝细胞体外构建工程化肝组织被引量：8
- 2008年
- 目的:在供体肝短缺的情况下,构建可植入的工程化肝组织具有重要的临床意义。实验尝试以新生大鼠肝细胞为种子细胞体外构建工程化肝组织,以期进一步的体内植入。方法:实验于2007-04/08在解放军总医院普通外科研究所完成。①实验材料:SPF级、出生24h以内的雄性SD新生大鼠。②实验过程:采用胰酶消化法获取新生大鼠肝细胞;以2×L-DMEM液(添加地塞米松10μg/L、表皮生长因子20μg/L、肝细胞生长因子40μg/L及胰岛素0.04U/mL)与液态鼠尾胶原等比例混合;再将肝细胞与胶原凝胶复合构建细胞/凝胶复合物,接种于培养板进行培养。③实验评估:培养后第1,3,5,7,9天,采用相差显微镜观察、四甲基偶氮唑盐比色法、苏木精-伊红染色和免疫组织化学染色分别对工程化组织的生长情况及组织形态特征进行观察,并对工程化组织的白蛋白合成功能及尿素的代谢水平进行评价。结果:①肝细胞与胶原凝胶复合后,细胞均匀的分布在复合物中。在整个培养过程中,肝细胞保持着稳定的细胞形态。②四甲基偶氮唑盐检测显示肝细胞活性在生长初期平缓下降,直至第5天时仍然保持75%的细胞活性,之后快速下降。③体外培养5d后,相差显微镜下观察显示肝细胞在胶原凝胶中呈三维立体生长,并保持肝细胞胞体圆形,核大而圆的特异形态;免疫组织化学证实这些肝细胞抗白蛋白抗体染色呈强阳性。④对培养上清中白蛋白和尿素的含量测定表明胶原凝胶中的肝细胞在培养初期保持着稳定的代谢合成功能。结论:用新生大鼠肝细胞及胶原构建出一种有功能的工程化肝组织模型,这种模型可以应用于今后的工程化肝组织研究。
- 张博峰赵云山刘巨超张兰李荣徐迎新
- 一种组织工程化肝移植物的构建与植入方法
- 本发明涉及再生医学和组织工程领域。本发明提供了一种可植入的工程化肝移植物及其构建方法。该方法采用水凝胶材料作为生物活性支架，复合含有促血管生成细胞因子、促肝细胞诱导因子(和生物活性物质)的缓释微球，复合肝脏细胞，构建工程...
- 徐迎新赵云山张博峰李力刘巨超李荣
- 文献传递
- 氯甲基苯甲酰氨荧光染料用于羊骨髓基质干细胞标记和心肌内示踪动物实验
- 2017年
- 目的探讨氯甲基苯甲酰氨荧光染料(CM-Di I)标记羊骨髓基质干细胞(bone marrow stromal cells,BMSCs)进行心肌内移植示踪的可行性。方法羊BMSCs经CM-Di I标记后(D-BMSCs),体外传代培养观察荧光变化;D-BMSCs细胞悬液经心肌内直接注射于心梗区和梗死移行区,观察示踪有效性。结果 CM-Di I可高效标记羊BMSCs。D-BMSCs在荧光显微镜下呈橙红色。体外培养证实D-BMSCs保持骨髓基质干细胞特异细胞形态,并在传2代后仍保持较强荧光。流式细胞术分析表明D-BMSCs与BMSCs增殖能力没有差异;三系分化证实D-BMSCs与BMSCs分化潜能相当。心肌内植入1周,D-BMSCs在荧光显微镜下发红色荧光,清晰显示其在心脏中的位置和细胞形态。结论 CM-Di I可用于羊BMSCs标记和心肌内移植示踪。
- 赵云山王嵘丁毅梁文涛张勇梁凯
- PKH26标记原代大鼠肝细胞的实验研究
- 2009年
- 目的建立一种简单有效的肝细胞标记方法。方法原代分离的成年大鼠肝细胞,按PHK26标记程序进行标记。标记的肝细胞与胶原凝胶复合后植入体内观察植入细胞的成活情况。采用荧光显微镜对标记的细胞进行观察。结果肝细胞经PKH26染料标记后,荧光显微镜下可见红色荧光均匀的分布在整个细胞膜上。皮下植入后1周,植入的肝细胞成活,可通过标记的荧光直接探测到。连续切片显示这些细胞在成三维立体生长,形成类肝样的组织。结论用PHK26对肝细胞进行荧光标记提供了一种追踪细胞转归的方法。
- 王金晶赵云山
- 关键词：PKH26大鼠肝细胞肝移植
- 筛选适宜于构建工程化肝组织的凝胶材料支架被引量：1
- 2012年
- 目的使用不同可注射性凝胶支架体外进行新生大鼠肝细胞立体培养,为后期体内植入筛选相容性较好的支架材料。方法使用胰酶冷消化法分离新生大鼠肝细胞。将肝细胞分别与纤维蛋白胶、壳聚糖凝胶、鼠尾胶原、透明质酸钠支架材料复合,形成工程化肝组织凝胶,接种于培养板中,并通过定期光镜来观察大鼠肝细胞,四唑盐(MTT)比色法评价细胞活性。溴甲酚绿法测上清白蛋白含量,脲酶比色法测定上清尿素含量。结果四组均可形成三维生长的工程化类肝样组织。培养第4天,生物蛋白胶及壳聚糖组的培养上清液中尿素含量达到高峰,分别为培养第1天的1.31倍和1.28倍,随后含量缓慢下降。培养第7天,新生大鼠肝细胞在纤维蛋白凝胶及壳聚糖凝胶中密集生长,同时MTT显示细胞活性及白蛋白分泌达到高峰,OD值分别为培养初期的1.11倍和1.17倍,上清白蛋白含量分别是初期的1.13倍和1.15倍。而在透明质酸钠及鼠尾胶原凝胶中则细胞生长缓慢,白蛋白及尿素含量持续下降。结论 4种可注射性支架中,壳聚糖和生物蛋白胶对于新生大鼠肝细胞生物相容性较好,透明质酸和鼠尾胶原较差,前两者更适合用于工程化肝组织的构建。
- 周海洋刘巨超孙慧伟赵云山丁毅徐迎新
- 关键词：纤维蛋白凝胶
- Dll4基因靶向RNAi重组腺相关病毒载体的构建和高滴度病毒制备被引量：2
- 2009年
- 目的:构建一个表达肿瘤血管生成调节基因Delta-like ligand4(Dll4)小干扰RNA的重组腺相关病毒载体,制备靶向性抑制Dll4表达的高滴度重组腺相关病毒。方法:将包含肿瘤血管生成调节基因Dll4特异性小干扰RNA片段的质粒用EcoRI+SalI双酶切,回收目的片段,将pSNAV2.0质粒用EcoRI+SalI双酶切后同目的片段连接,脂质体法转染BHK-2l细胞,G418筛选后以辅助病毒感染获取病毒。结果:PCR和测序证实,成功构建包含U6启动子和肿瘤血管生成调节基因Dll4特异性RNA干扰片段的重组腺相关病毒载体,并制备出滴度为2.4×l011vectorgenome/L高滴度腺相关病毒。结论:成功构建携带Dll4基因短发夹状干扰RNA的腺相关病毒载体。为下一步探索抗肿瘤血管生成基因治疗的新途径提供实验基础。
- 吕伟陈凛卫勃赵云山李涛彭正唐云李荣
- 关键词：重组腺相关病毒
