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王毅谦: 作品数：35 被引量：145H指数：7; 供职机构：江苏出入境检验检疫局更多>>; 发文基金：国家质检总局科技计划项目江苏检验检疫局科研项目江苏省自然科学基金更多>>; 相关领域：轻工技术与工程医药卫生理学农业科学更多>>

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牛奶中无乳链球菌DNA提取方法的比较被引量：4: 2015年; 目的以牛奶中的致病性无乳链球菌作为研究对象,对9种常用的细菌核酸提取方法进行比较。方法选用紫外分光光度计法和实时荧光PCR法对各方法进行系统评估。结果超声波处理结合天根吸附柱的方法能提取到得率较高、纯度较好的DNA,结合实时荧光PCR法后对牛奶中无乳链球菌的检测灵敏度能达到90 cfu;天根吸附柱法提取所得DNA得率稍低,结合实时荧光PCR法后对牛奶中无乳链球菌的检测灵敏度也能达到90 cfu;溶菌酶法和超声波破碎提取法用于实时荧光PCR后对牛奶中无乳链球菌的检测灵敏度能达到350 cfu;Chelex-100法更适于纯菌的检测,该法结合实时荧光PCR法对无乳链球菌的检测灵敏度能达到350 cfu的灵敏度。结论应根据样品类型、方法要求和检测成本来选择适合的核酸提取方法。; 洪颖肖震郝俊虎蒋鲁岩王毅谦吴福平邵景东蒋原封莉黄明祝长青; 关键词：牛奶无乳链球菌 DNA提取实时荧光PCR

哥伦比亚CNA血平板厌氧培养检测β-溶血性链球菌的应用与分析: 目的选择更为适合β-溶血性链球菌的分离培养基及培养条件。方法本文应用2种不同的分离培养基及分离环境对实验菌株和实际样品进行分离比对，以寻求出实用高效的分离培养基及分离条件用于本菌检测。结果从80件食品样品中检出11...; 吴福平王毅谦邵景东; 关键词：食品安全 Β-溶血性链球菌

分散固相萃取-气相色谱-串联质谱法测定输印尼大蒜中5种农药残留被引量：1: 2018年; 印尼颁发的农业部长4号令对我国大蒜出口造成了严重影响。利用改进的QuEChERS技术为前处理方法,优化了净化吸附剂的用量,建立了输印尼大蒜中5种农药残留的检测方法。样品中加入无水乙酸钠和正己烷饱和的乙腈(含0.1%乙酸)溶液,振荡后过滤,滤液经旋转蒸干,色谱纯乙腈洗脱、PSA-C18吸附剂组合净化,过滤膜后用气相色谱-串联质谱测定。结果表明,在(0.1~1500)μg/L范围内,5种农药的浓度与峰面积呈良好的线性关系,相关系数均大于0.99,仪器的检出限为(0.1~100)ng/m L,方法的定量限为(0.025~25)μg/kg。5种农药在各自3个添加水平下,在大蒜中的平均回收率在84.3%~111.3%,相对标准偏差RSD为1.9%~6.7%。结果表明利用该方法能快速准确地对输印尼大蒜进行分析,满足输入国的要求。; 陈君义王毅谦孙慧宇陆慧媛殷冉高玲王伟王云飞; 关键词：大蒜分散固相萃取气相色谱-串联质谱农药残留

3种培养基在检测志贺氏菌的应用与分析: 目的选择更加适合志贺氏菌检测的固体选择性培养基。方法本文应用3种培养基对实验菌株和实际样品进行分离比对分析，以寻找出实用高效的分离培养基用于本菌检测。结果从58件食品样品中检出4株志贺氏菌。结论 R&F志贺氏菌显色...; 吴福平王毅谦邵景东; 关键词：志贺氏菌培养基

方便食品检验中大肠菌群的不确定度评定被引量：3: 2013年; 目的对方便食品检验中大肠菌群的不确定度进行评定。方法依据CNAS-GL05:2006《测量不确定度要求的实施指南》和GB/T4789.3–2010《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》进行。结果本次实验中的扩展不确定度为0.325,采用此方法适合于大肠菌群检验结果的评定。结论采用合并样本标准偏差计算检验结果不确定度的方法较科学,其方法适合于同类样品不确定度评定。; 王毅谦吴福平张洪元邵景东; 关键词：方便食品大肠菌群不确定度评定

猪传染性胃肠炎病毒山东分离株SD-LY6的N蛋白基因序列分析及其表达纯化被引量：1: 2018年; 为了获得能够用于猪传染性胃肠炎（TGE）鉴别诊断的抗原蛋白,本研究以猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）山东分离株SD-LY6核衣壳蛋白（N）基因为研究对象,对其进行引物设计并进行RT-PCR扩增,经克隆测序后对N蛋白基因序列进行分析;同时对N蛋白基因进行克隆,构建重组质粒pET-15b-TGEV-N,并进行IPTG诱导表达及纯化,利用SDS-PAGE和Western-blot进行检测。研究表明,TGEV SD-LY6株N蛋白基因序列高度保守,核苷酸以及氨基酸序列同源性均在97. 0%以上;获得了大小约为47 ku的纯化重组N蛋白,该重组N蛋白可以与猪传染性胃肠炎阳性血清发生特异性反应,具有较好的反应原性,与无关血清样本无交叉反应,可以作为TGE的诊断抗原,为下一步高效快速诊断方法的研究提供坚实的基础。; 姜焱曹丙蕾王凯民龙云凤王毅谦姜珊唐泰山; 关键词：猪传染性胃肠炎病毒核衣壳蛋白

2012年张家港口岸进境冷冻猪肉制品中单核细胞增生李斯特氏菌污染调查被引量：4: 2014年; 目的了解进境冷冻猪肉制品单增李斯特菌污染状况,建立流行病学监测网,以便制定良好的预防控制措施,更有效地预防和控制由该菌引起的食源性疾病和疫情的发生。方法 mini VIDAS快速筛选、显色平板分离、API Listeria鉴定结合国标法进行单增李斯特菌检测。结果 2012年共检测冷冻猪肉制品171批,检出单增李斯特菌14株,阳性率为8.19%(14/171)。结论单增李斯特菌污染较为严重,应加强对冷藏生畜、肉类食品的卫生管理。; 吴福平王毅谦郭旸邵景东; 关键词：冷冻猪肉单核细胞增生李斯特氏菌污染

TaqMan探针实时荧光PCR方法检测粪便中微小隐孢子虫卵囊被引量：3: 2012年; 以微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)特异性DnaJ-like蛋白基因的保守序列为模板,设计和合成特异性引物和荧光标记探针,通过检测微小隐孢子虫卵囊DNA和加标模拟样品进行敏感性分析,建立标准曲线,并对其特异性和干扰性进行评价。结果显示,该方法只对微小隐孢子虫卵囊进行特异性扩增,其他常见的肠道原虫和肠道病原菌均不能扩增;微小隐孢子虫纯卵囊基因组DNA检测的灵敏度为26个/ml;对加标粪样可检测至2 600个/ml卵囊。提示本研究建立的实时荧光PCR检测微小隐孢子虫卵囊方法具有快速、特异性和敏感性高等优点。; 邵景东吴琳吴福平傅春玲王毅谦范丽丽; 关键词：微小隐孢子虫 TAQMAN探针实时荧光PCR

Taqman实时定量PCR检测产毒艰难梭菌方法的建立被引量：2: 2011年; 目的建立以毒素基因A/B为靶基因的产毒艰难梭菌的快速定量检测方法。方法通过设计艰难梭菌毒素A/B基因的特异引物及探针,建立标准产毒菌株DNA(ng)含量与Ct值的标准曲线。结果该方法仅对产毒艰难梭菌进行特异性扩增,11种其他常见的致病菌及非产毒艰难梭菌均不能扩增;tcdA和tcdB基因扩增标准曲线线性关系R值分别为0.9975、0.9984,检测低限均为2.5×10-3ng。结论该研究建立的方法具有快速、灵敏、特异性高等优点,可用于艰难梭菌毒素基因的定量检测。; 吴琳王毅谦邵景东吴福平傅春玲; 关键词：TAQMAN探针基因

志贺氏菌属显色培养基在食品检测中的应用研究被引量：7: 2010年; 〔目的〕考核志贺氏菌属显色培养基对食品中志贺氏菌的检测效果,确认其是否可作为新型快速检测方法。〔方法〕按国标(GB 4789.5-2003)程序比较几种培养基检测食品中志贺氏菌的效果。〔结果〕志贺氏菌属显色培养基与传统平板SS、麦康凯相比对测试菌株有更高的灵敏度和特异性,可提高检出率。〔结论〕用志贺氏菌属显色培养基检测志贺氏菌是一种新的快速途径,可明显提高检测效率。; 王毅谦吴福平邵景东陈君义张莉军; 关键词：志贺氏菌

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