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用多糖-破伤风类毒素结合苗制备抗流行性脑膜炎球菌多糖单克隆抗体被引量：4: 2011年; 目的研制抗A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖单克隆抗体（GAMP mAb）.方法以A群奈瑟脑膜炎球菌荚膜多糖-破伤风类毒素（GAMP-TT）耦联物免疫BALB/c小鼠,用常规细胞融合与克隆化技术获得一株能稳定分泌抗GAMP mAb的杂交瘤细胞株（2E7）.采用秋水仙素阻断法测定其染色体数目,降植烷诱导法制备含该抗体的小鼠腹腔积液,辛酸-硫酸铵沉淀法纯化单克隆抗体,十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）灰度扫描测定提取物纯度,改良过碘酸盐氧化法制备辣根过氧化物酶（HRP）标记抗GAMP mAb,并采用中和法及其抗原替代法对抗GAMP mAb的特异性进行初步的鉴定.结果所获得的杂交瘤细胞（2E7）具有很好的生长特性,染色体数目约为139.73条;抗体分泌量适中,Ig亚类为IgG1,提取物浓度1.76～2.32 mg·mL-1,纯度97.2%,标记抗GAMP mAb的效价为1：25 600;抗原替代实验与中和实验对其特异性考核,初步结果证实2E7 mAb具有很好的抗GAMP特异性.结论成功制备抗GAMP mAb,为GAMP-TT疫苗的生产监测及产品质量控制提供了必要的物质基础.; 李佩珊张春燕李时君陈妍项美娟李方和张洪; 关键词：菌苗多糖抗体单克隆抗体

抗HBV G145R HBsAg多克隆抗体的制备与鉴定: 2008年; 目的实验性rG145R变异抗HBs多克隆抗体。方法采用纯化全基因重组G145R变异HBsAg常规皮下免疫制备小鼠多克隆抗体,以间接ELISA、SDS-PAG及Western blot等多种实验对制备物进行鉴定,并初步应用于转染CHO细胞的化学染色。结果制备物在Western blot、ELISA中和试验与抗原替代ELISA中与重组G145R变异HBsAg及重组野生HBsAg等均有很好的特异性与反应性;对此两种抗原的ELISA效价前者显著高于后者(分别为51200与6400);将其用于2A8细胞(转染并分泌G145R HBsAg)爬片的PAP染色,亦取得较理想的实验结果。结论采用重组G145R变异HBsAg免疫成功制备出较高效价的抗体。鉴于该抗体同时与野生重组wHBsAg存在较强交叉反应,其与野生抗HBs的混合应用能增ELISA免疫逃逸变异的检测能力。; 李佩珊龚劲松李时君张波陈妍项美娟李方和; 关键词：乙型肝炎病毒基因变异合成肽多克隆抗体

实验动物终末处置的新方法——锐性弹切脊髓高位离断术被引量：1: 2010年; 急性生命剥夺（宰杀）是一项与动物福利相关且经常发生的重要事件。对实验动物处死的方法必须尽可能做到不给其带来过多痛苦;不干扰或基本不干扰动物临终前的生理状态;不损坏科学实验研究的靶器官（或组织）;不对实验者造成过大的心理冲击。常用方法有脊髓牵拉断裂法、; 李佩珊张春燕李时君陈妍李方和; 关键词：实验动物脊髓离断术动物福利生理状态

ELISA差减分析--一种简便实用的免疫逃逸变异HBsAg检测新方法被引量：1: 2010年; 目的:立足现有实验技术与试剂,建立一项血清免疫逃逸变异HBsAg检测的新方法。方法:以市售ELISA试剂筛选其检测信号在灰区范围的HBV感染者;采用2种不同免疫逃逸变异HBsAg检测能力的ELISA试剂对选留血清进行检测,以"ELISA差减分析"方式确认免疫逃逸变异HBsAg阳性者;以中和实验及雅培化学发光试剂验证检测结果的特异性;并对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性者以PCR及直接测序做HBV DNA分析。结果:自10231例受检者中筛选HBsAgELISA检测信号灰区标本244例;复核检测显示G6ELISA、市售ELISA两者对野生HBsAg检测敏感性分别为0.0625ng/ml,与0.125ng/ml;检测阳性率分别为16.80%(G6ELISA)及5.73%(市售ELISA)。ELISA差减分析确定免疫逃逸变异HBsAg阳性者27例,阳性率为11.07%。对部分免疫逃逸变异HBsAg阳性血清做进一步考核,抗HBs中和强度为(84.07%±6.32%),中和率100%(13/13);雅培化学发光试剂复核阳性率为94.4%(17/18,阳性者中包括两份单项G6-ELISA检测最低阳性信号标本);HBV DNA阳性率36.9%(7/19),略低于同期HBsAg低信号阳性者(6/14,42.9%,P<0.05);直接测序发现其中"a"区变异3例,分别为P142L、T126A及M133T/K160T;S蛋白亲水区非"a"决定簇变异1例,变异类型为L109Q。结论:ELISA差减分析法能有效地用于部分免疫逃逸变异HBsAg的临床诊断,其诊断能力视所依托试剂免疫逃逸变异检测能力不同而有显著差别。; 李方和李佩珊刘静华彭静张春燕黄永国陈妍; 关键词：乙肝病毒基因变异 HBSAG ELISA

排溢法ELISA,一种改进的二步法标记免疫实验技术被引量：2: 2010年; 目的:建立一种简便的血清HBsAg检测二步法标记免疫试验。方法:在既往G6ELISA的基础上建立血清HB-sAg检测排溢法ELISA,采用系列稀释实验对方的相对显色强度,敏感性,及其对Hooks效应的拮抗能力进行考核,将其用于对一组临床标本的检测,并与经典二步法及一步法ELISA进行比较。结果:在大致相同的实验条件下排溢法,二步法及一步法ELISA三者实验信号的强度大致相当;其敏感性分别为19.2、12.6及14.5pg/ml。当被检标本HBsAg浓度在37.5μg/ml时一步法ELISA开始显现Hooks效应,至2400μg/ml时测值已接近阈值;而排溢法及经典二步法ELISA两者对Hooks效应则表现出相似的拮抗。对231例临床标本进行检测,112例高滴度阳性标本(经稀释实验证实)中出现中重度Hooks效应者一步法ELISA17例,占15.2%,而排溢法及其二步法ELISA则未见Hooks效应的影响。结论:在保证实验结果的前提下,排溢法ELISA在操作程度简化上与一步法相当,但可完全克服Hooks现象的干扰。; 李方和张春燕李佩珊李时君陈妍; 关键词：ELISA HBSAG

G145R rHBsAg抗原衰减对抗体亲和层析的影响被引量：1: 2008年; 目的:探讨G145R rHBsAg抗原衰减对抗体亲和纯化的影响与意义。方法:采用抗野生重组HBs G6-McAb制备层析载体,对含rG145R HBsAg的2A8细胞上清做亲和层析。以SDS-PAGE、Western Blot及ELISA等对产物纯度、含量及回收率进行评价,并与同法纯化之野生HBsAg进行比较。结果:梯度洗脱层析显示G145R rHBsAg、自然表达野生HBsAg及其r-wHBsAg三者纯化产物的纯度分别为90.3%、95.2%及93.1%;回收率为43.3%、72.0%及66.4%,其亲和洗脱峰型前者较后两者略宽,主峰前部出现明显顿挫;pH线性梯度洗脱显示,G145R rHBsAg洗脱曲线主峰较前梯度洗脱进一步增宽,顿挫更为明显,并在主峰前出现一低平的蛋白峰。ELISA检测显示HBsAg活性贯穿主峰始终,SDS-PAGE与Weistern blot显示两法洗脱产物纯度(92.5%与89.3%)大致相似,分子大小与野生HBsAg相同。结论:洗脱峰加宽与顿挫作为G145RrHBsAg抗原性渐进性衰减的特征性表现,在同类生物材料实验性制备与产品考评中有一定参考价值。; 李时君张春燕李佩珊陈妍孙文李方和; 关键词：单克隆抗体乙型肝炎病毒表面抗原

A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖检测排溢法: 目的建立A群奈瑟氏脑膜炎球菌荚膜多糖(GAMP)抗原检测的排溢法ELISA。方法以辛酸-硫酸铵沉淀法纯化抗GAMP mAb IgG。采用改良过碘酸盐氧化法制备抗GAMP-HRP。以抗GAMP mAb包被,抗GAMP-HR...; 殷波涛李佩珊李时君张春燕陈妍李方和

A群脑膜炎球菌荚膜多糖排溢法ELISA的建立及初步应用: 2012年; 目的建立A群脑膜炎球菌荚膜多糖(Group A meningococcal polysaccharide,GAMP)排溢法ELISA,并进行验证及初步应用。方法采用改良过碘酸盐氧化法制备抗GAMP-HRP。以抗GAMP单克隆抗体包被酶标板,抗GAMP-HRP作为酶标抗体,建立检测GAMP的排溢法ELISA。采用棋盘滴定法确定包被抗体及酶标抗体的最佳工作浓度,并对其特异性、敏感性及重复性进行验证。采用建立的排溢法ELISA检测GAMP-TT系列层析样品中的GAMP抗原活性,并与传统一步法ELISA及二步法ELISA进行比较。结果建立的排溢法ELISA的包被抗体最佳浓度为20μg/ml,酶标抗体最佳工作浓度为1∶128。该方法的特异性良好,敏感性与一步法和二步法相当,批内和批间变异系数与一步法相当;该方法检测GAMP-TT层析样品中的GAMP抗原活性的结果与二步法ELISA基本一致。结论排溢法ELISA的操作步骤与一步法ELISA大致相似,但较二步法ELISA显著简化,其对一步法ELISA中Hooks效应的纠正效果与二步法ELISA相同。; 殷波涛李佩珊李时君张春燕陈妍李方和; 关键词：单克隆抗体

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李佩珊

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