李伟东
- 作品数：13 被引量：4H指数：2
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学农业科学更多>>
- 炭疽毒素PA在E．coli中的表达、纯化及其生物活性分析
- 2008年
- 目的:构建pET-32a(+)-PA重组质粒,实现融合蛋白Trx-PA在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中的表达,并获得有生物学活性的PA。方法:采用PCR的方法扩增PA的编码序列,并且与pET-32a(+)载体的Trx编码区融合产生pET-32a(+)-PA重组质粒,将重组质粒转化至感受态E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达pET-32a(+)-PA,通过SDS-PAGE和Western印迹进行分析。利用Ni2+金属亲和层析纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。通过蛋白酶降解和细胞毒性实验分析Trx-PA的生物学活性。结果:成功构建pET-32a(+)-PA重组质粒,并纯化了Trx-PA融合蛋白。SDS-PAGE分析表明融合蛋白相对分子质量大小正确,经纯化复性后,蛋白纯度达到76%。Trx-PA在体内和体外均能被弗林蛋白酶(furin酶)降解。Trx-PA的正确降解是致死因子(lethal factor,LF)进入小鼠巨噬细胞Raw264.7内并产生细胞毒性的基础。结论:重组Trx-PA融合蛋白能在E.coliBL21(DE3)中有效表达,并表现出生物学活性。
- 李玉霞李伟东凌焱胡伟毛赟赟周围张京生梁龙陈惠鹏
- 关键词：炭疽毒素保护性抗原纯化
- 微生物的染色方法
- 本发明公开了一种微生物的染色方法。该方法包括将待染色的微生物在色素培养基中培养对所述待染色的微生物进行活细胞染色的步骤，所述色素培养基由食用色素和用于培养所述待染色的微生物的培养基组成，所述食用色素在所述色素培养基中的浓...
- 凌焱陈惠鹏曲芬李玉霞吴逊李炳娟白东梅李伟东刘刚周围李北平高原岳俊杰梁龙
- 文献传递
- 一种融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种融合蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的融合蛋白为将乙醇脱氢酶和甲酸脱氢酶通过连接肽串联得到的蛋白质。所述乙醇脱氢酶来源于短乳杆菌（Lactobacillus brevis），所述甲酸脱氢酶来源于博伊丁假...
- 李玉霞陈惠鹏曲芬凌焱李炳娟岳俊杰孙芳毛艳张景海吴逊白东梅李伟东刘刚梁龙周围李北平高原
- 文献传递
- 一种融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种融合蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的融合蛋白为将乙醇脱氢酶和甲酸脱氢酶通过连接肽串联得到的蛋白质。所述乙醇脱氢酶来源于短乳杆菌（Lactobacillus brevis），所述甲酸脱氢酶来源于博伊丁假...
- 李玉霞陈惠鹏曲芬凌焱李炳娟岳俊杰孙芳毛艳张景海吴逊白东梅李伟东刘刚梁龙周围李北平高原
- 应用改构的炭疽毒素作为靶向肿瘤细胞的药物递送系统及其效果评价被引量：2
- 2013年
- 目的:通过改造炭疽毒素保护性抗原Protective Antigen(PA)及致死因子Lethal Factor(LF),尝试建立更加广谱的新型炭疽毒素靶向给药系统并对其递送效率进行定量评价。方法:采用基因工程手段,分别构建了3种改构的天然炭疽毒素保护性抗原PA及炭疽毒素的LF N端融合海肾荧光素酶(Luciferase)的LFn-linker-Luc的大肠杆菌重组表达体系。利用CCK-8法评价改构PA和LF共同作用肿瘤细胞后的细胞存活率;利用改构PA和LFn-linker-Luc与肿瘤细胞共孵育,通过测定细胞内荧光素酶活性,评价改构PA靶向肿瘤细胞的效果。结果:体外酶解实验证明构建的改构PA蛋白能够被正确地酶解成目的大小的片段;改构PA和LF共同作用肿瘤细胞能够显著降低细胞存活率;利用LFn-linker-Luc能够评价改构PA的靶向效率,PA蛋白的改构方式与其递送效率相关。结论:设计并改构的炭疽毒素药物递送系统,能够实现特异性靶向肿瘤细胞的效果,并具有更广谱的作用效果,为研制新型广谱抗肿瘤药物提供了新的思路和方法。
- 李炳娟李玉霞李北平凌焱周围李伟东林海龙梁龙刘刚张景海陈惠鹏
- 关键词：炭疽毒素保护性抗原肿瘤靶向治疗
- 人Notch受体胞内区基因N2ICD和N3ICD克隆及真核表达体系的构建被引量：2
- 2012年
- Notch信号通路与多种肿瘤的发生发展密切相关。对该通路中各受体功能的深入研究能够为揭示其致癌作用奠定基础。本研究采用RT-PCR的方法从人宫颈癌细胞系HeLa细胞的cDNA中克隆人Notch2和Notch3受体胞内区基因(N2ICD和N3ICD基因),并构建携带增强型绿色荧光蛋白(EGFP)的真核表达载体N2ICD/pEGFP和N3ICD/pEGFP,将序列正确的重组质粒转染HeLa细胞,显微镜下可见明显的绿色荧光,并定位在细胞核内。Western blotting检测目的蛋白成功融合表达,并能够提高其下游靶基因Hes1的转录活性。
- 孙芳李玉霞毛艳凌焱张小男李伟东刘刚梁龙陈珊陈惠鹏
- 关键词：NOTCH信号通路真核表达
- CAR在乳鼠肠、肝、心、脑、肾、肺组织的表达
- 2011年
- 目的检测柯萨奇-腺病毒受体(CAR)在乳鼠肠、肝、心、脑、肾、肺组织中的表达变化,为研究CVB感染引发病毒性疾病与组织中CAR表达水平的关联性提供参考。方法采用荧光实时定量PCR和Western blot法测定正常BALB/c乳鼠肠、肝、心、脑、肾、肺组织中CAR受体在核酸水平和蛋白水平的相对表达量。结果定量PCR显示CAR在乳鼠脑、肺、肠组织中表达显著高于肝、肾、心组织,差异均有显著性(P<0.01)。Western blot检测发现与定量PCR结果基本一致。结论 CAR的表达存在组织特异分布的特点。
- 汤洁孙芳李玉霞凌焱毛艳李伟东尹登科王成永陈惠鹏
- 关键词：荧光实时定量PCRWESTERNBLOT
- 微生物的染色方法
- 本发明公开了一种微生物的染色方法。该方法包括将待染色的微生物在色素培养基中培养对所述待染色的微生物进行活细胞染色的步骤，所述色素培养基由食用色素和用于培养所述待染色的微生物的培养基组成，所述食用色素在所述色素培养基中的浓...
- 凌焱陈惠鹏曲芬李玉霞吴逊李炳娟白东梅李伟东刘刚周围李北平高原岳俊杰梁龙
- 文献传递
- 日落黄色素在抗炭疽杆菌中的应用
- 本发明公开了一种日落黄色素在抗炭疽杆菌中的应用。本发明公开了日落黄色素在制备抑制炭疽杆菌生长的产品中的应用。本发明发现日落黄色素可有效抑制炭疽杆菌的生长，从而在治疗炭疽感染方面发挥巨大作用。
- 凌焱陈惠鹏李玉霞吴逊白东梅张昕凌婧怡李伟东刘刚周围李北平高原岳俊杰梁龙
- 文献传递
- caspase重组酶原及其编码基因与应用
- 本发明公开了caspase重组酶原及其编码基因与应用。所述caspase重组酶原氨基酸序列由组成具蛋白酶活性的caspase的蛋白质亚基序列及连接所述蛋白质亚基序列的连接肽序列组成；所述连接肽序列中的至少一个序列为包含3...
- 凌焱陈惠鹏李玉霞李炳娟孙芳毛艳李伟东刘刚岳俊杰张景海吴逊白东梅梁龙周围李北平高原
- 文献传递
