凌焱
- 作品数：44 被引量：76H指数：6
- 供职机构：军事医学科学院生物工程研究所更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家重点基础研究发展计划国家科技重大专项更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学文化科学农业科学更多>>
- 大肠杆菌O157∶H7 EDL933wz3672基因缺失突变体的构建被引量：1
- 2009年
- 目的:构建EHEC O157∶H7 EDL933wz3672基因缺失突变体。方法:根据已知的O157∶H7 EDL933基因组全序列,采用pKOBEG介导的Red重组系统,筛选卡那霉素抗性基因替换z3672基因的阳性克隆,然后FLP位点特异性重组去除两端带有FRT位点的卡那霉素抗性基因,最后通过PCR和测序手段证实。结果:获得了z3672基因缺失而且不含有卡那霉素抗性基因的EHEC O157∶H7 EDL933w突变菌株。结论:为进一步研究O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 马延高原周围张京生凌焱李玉霞梁龙
- 关键词：基因敲除RED重组系统
- 肿瘤转移关键酶:人乙酰肝素酶氨基端亚基的表达纯化及鉴定被引量：1
- 2005年
- 目的:乙酰肝素酶在肿瘤转移的过程中起重要作用,其氨基端小亚基蛋白(Mr为8×103)对其功能活性是不可缺少的。得到此蛋白将有助于深入研究乙酰肝素酶的功能活性。方法:我们从人胎盘cDNA文库中分离乙酰肝素酶蛋白全长编码基因,将乙酰肝素酶氨基端小亚基的基因克隆入pGE-X2TK,转化大肠杆菌进行融合表达。经发酵,纯化,复性得到乙酰肝素酶的氨基端亚基蛋白。结果:得到6.9g纯度>90%的氨基端小亚基融合蛋白。GSTpull-down实验表明,此融合蛋白可与乙酰肝素酶羧基端大亚基蛋白结合。复性后的融合蛋白可被激酶切割为GST蛋白和乙酰肝素酶氨基端亚基蛋白。结论:所得的乙酰肝素酶的氨基端小亚基蛋白为进一步研究该亚基蛋白在细胞内的免疫亚定位及功能奠定了基础。
- 李燕杰李吉学凌焱汤国营宋子博林艳丽朱厚础
- 关键词：乙酰肝素酶纯化肿瘤转移
- 2009～2013年某研究所获得国家自然科学基金资助情况统计分析被引量：4
- 2015年
- 对某研究所2009~2013年获得国家自然科学基金资助的情况进行了统计,从项目类别、所属学科、申请人员年龄、职称等级等方面进行分类分析,总结了该单位在人才建设和课题申报管理上的经验,为今后开展科研管理工作提供参考。
- 李北平凌焱于婷韩铁
- 关键词：国家自然科学基金统计分析科研管理
- 炭疽毒素PA在E．coli中的表达、纯化及其生物活性分析
- 2008年
- 目的:构建pET-32a(+)-PA重组质粒,实现融合蛋白Trx-PA在大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中的表达,并获得有生物学活性的PA。方法:采用PCR的方法扩增PA的编码序列,并且与pET-32a(+)载体的Trx编码区融合产生pET-32a(+)-PA重组质粒,将重组质粒转化至感受态E.coliBL21(DE3),经IPTG诱导表达pET-32a(+)-PA,通过SDS-PAGE和Western印迹进行分析。利用Ni2+金属亲和层析纯化表达产物,通过梯度透析进行复性。通过蛋白酶降解和细胞毒性实验分析Trx-PA的生物学活性。结果:成功构建pET-32a(+)-PA重组质粒,并纯化了Trx-PA融合蛋白。SDS-PAGE分析表明融合蛋白相对分子质量大小正确,经纯化复性后,蛋白纯度达到76%。Trx-PA在体内和体外均能被弗林蛋白酶(furin酶)降解。Trx-PA的正确降解是致死因子(lethal factor,LF)进入小鼠巨噬细胞Raw264.7内并产生细胞毒性的基础。结论:重组Trx-PA融合蛋白能在E.coliBL21(DE3)中有效表达,并表现出生物学活性。
- 李玉霞李伟东凌焱胡伟毛赟赟周围张京生梁龙陈惠鹏
- 关键词：炭疽毒素保护性抗原纯化
- 一种高保真单向DNA合成方法初步探索
- 2014年
- 目的建立一种高保真、简单快速的DNA片段合成方法。方法提出一种高保真DNA单向合成方法(high fidelity DNA unidirection synthesis method,HFUS),主要在Phusion DNA聚合酶、BsrDⅠ限制性内切酶和λ外切酶3种酶协同作用下,将一条正向DNA单链和数条反向DNA单链通过逐个顺序扩增的方式,最终合成出目的DNA片段。该方法采用37℃、50℃和72℃3个温度的快速转换实现片段扩增的分步有序化合成。结果通过HFUS法,初步合成出2条长度分别为340 bp、450 bp的DNA随机序列片段。结论该研究探索了一种新的合成DNA片段的方法,初步实现了长达450 bp DNA片段的快速合成,为DNA合成方法提供了新的思路。
- 吴逊李玉霞李北平李炳娟白东梅张昕凌焱周围刘刚陈惠鹏
- 新预测的Ⅲ型分泌系统毒力蛋白Z3672的基因克隆、表达及纯化被引量：1
- 2009年
- 目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌EHEC O157∶H7新预测毒力蛋白Z3672,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增出基因z3672,构建重组表达质粒,经测序证实后,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用质谱分析法和W estern印迹试验进行鉴定,通过洗涤包涵体纯化目的蛋白。结果:构建了pET-24 az-3672重组质粒,经酶切及测序鉴定与预期序列一致,实现了目的蛋白的融合表达,并且对蛋白条带的质谱分析证实了表达蛋白即为Z3672蛋白。纯化后目的蛋白的纯度>90%。结论:得到了新预测的毒力蛋白Z3672,为下一步研究蛋白功能,并进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 高原马延毛赟赟李玉霞凌焱张京生周围梁龙
- 关键词：大肠杆菌O157:H7基因表达
- 20例中国Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区突变分析被引量：2
- 2012年
- 目的检测Peutz-Jeghers综合征患者STK11基因编码区序列,进一步明确STK11基因可能存在新的突变位点。方法收集空军总医院2009年1月~2010年10月期间收治的20例Peutz-Jeghers综合征患者的血液样本,采用PCR扩增技术及DNA测序方法检测STK11基因编码区序列,与STK11基因的正常序列比对分析。结果 20例Peutz-Jeghers综合征患者中有14例患者检测到STK11基因的编码区发生突变,1例患者携带2个突变位点,13例患者携带单一突变位点。测序发现1例患者在3号外显子第460位发现一错义突变（460C→G）,在第154密码子处形成另一种新的氨基酸,为一新的突变位点。2个家系中4例患者在同一位点发生突变;同一家系患者的突变位点一致。其余6例患者STK11基因编码区未见突变位点。结论 STK11基因突变是Peutz-Jeghers综合征发生的主要病因,3号外显子第460位错义突变,即460C→G,是导致Peutz-Jeghers综合征发生新的突变位点。
- 赵晓李玉霞凌焱陈惠鹏张宝库夏廷毅周平
- 关键词：STK11基因PEUTZ-JEGHERS综合征
- 大肠杆菌O157∶H7新蛋白Ecs4563的基因克隆、表达及纯化被引量：1
- 2008年
- 目的:克隆、表达并纯化肠出血性大肠杆菌(EHEC)O157∶H7新预测分子伴侣蛋白Ecs4563,以进一步开展其结构与功能的研究。方法:利用PCR方法从EHEC O157∶H7基因组中扩增出分子伴侣基因ecs4563,构建重组表达质粒,在大肠杆菌BL21(DE3)中实现诱导表达,采用Western印迹法进行鉴定,通过Ni2+螯合柱纯化获得目的蛋白。结果:构建了pET-24a-ecs4563重组质粒,实现了目的蛋白的融合表达,Ni2+金属螯合法纯化了目的蛋白,通过Western印迹法验证了融合蛋白的特异性。结论:得到了新预测分子伴侣Ecs4563,为下一步研究蛋白功能,进一步研究EHEC O157∶H7的致病机制奠定了基础。
- 毛赟赟李玉霞高原凌焱胡伟张部昌周围梁龙
- 关键词：克隆基因表达
- 一种融合蛋白及其编码基因与应用
- 本发明公开了一种融合蛋白及其编码基因与应用。本发明提供的融合蛋白为将乙醇脱氢酶和甲酸脱氢酶通过连接肽串联得到的蛋白质。所述乙醇脱氢酶来源于短乳杆菌（Lactobacillus brevis），所述甲酸脱氢酶来源于博伊丁假...
- 李玉霞陈惠鹏曲芬凌焱李炳娟岳俊杰孙芳毛艳张景海吴逊白东梅李伟东刘刚梁龙周围李北平高原
- 基于CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体的初步研究被引量：3
- 2010年
- 目的利用CMV启动子构建CVB3感染性克隆载体。方法将质粒pcDNA3.1(+)的CMV启动子下游区域通过PCR技术替换成设计好的多克隆位点区,分别插入PCR合成的HdvRz核心序列和polyA尾片段,形成框架载体pc-H-A,通过瞬时转染HeLa细胞初步鉴定pc-H-A的可用性;用本室保存的CVB3(nancy株)感染HeLa细胞,取感染液上清提取病毒RNA,利用长链RT-PCR和长链PCR技术反复优化条件扩增病毒基因组全长片段,将此全长片段克隆至设计好的框架载体pc-H-A中,筛选阳性克隆,并对其进行测序鉴定。结果与结论构建了带有CMV启动子的框架载体pc-H-A并初步鉴定了该载体可用,利用此框架载体构建了与基因库中序列相似性为99%的CVB3全长cDNA克隆pc-CVB3-H-A。该研究为进一步鉴定所构建的CVB3全长克隆的感染性提供了基础,并为后续在病毒学研究和基因治疗方面的研究提供了手段。
- 贾宏瑾汤洁李玉霞孙芳凌焱张部昌梁龙陈惠鹏
- 关键词：柯萨奇病毒CVB3感染性克隆
