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张靖: 作品数：29 被引量：361H指数：11; 供职机构：国家食品安全风险评估中心更多>>; 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划北京市自然科学基金更多>>; 相关领域：医药卫生轻工技术与工程农业科学生物学更多>>

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重组金黄色葡萄球菌肠毒素A的表达及鉴定被引量：2: 2013年; 目的通过基因重组方式获得高纯度、高含量重组金黄色葡萄球菌肠毒素A(rSEA)。方法将金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因片段插入pET28a载体中,测序并正确鉴定后,将重组质粒转化到大肠杆菌BL21(DE3)中,经IPTG诱导,表达目的蛋白。重组蛋白用Ni-NTA His蛋白亲和柱纯化。结果 SDS-PAGE结果表明成功表达了分子量约为30 kD的重组蛋白,经Western blot和小鼠生物学鉴定,表达产物为重组金黄色葡萄球菌肠毒素A,并且具有较好的免疫原性,为制备抗金黄色葡萄球菌肠毒素A单克隆抗体及建立相应的免疫学检测方法奠定了基础。结论构建的rSEA表达载体稳定,可高效表达目的 rSEA蛋白。; 王佳慧李楠沈青韩春卉张靖江涛李凤琴; 关键词：葡萄球菌肠毒素原核表达

鲀毒鱼类中河鲀毒素直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验测定方法的研究被引量：11: 2002年; 为检测毒鱼类中的河毒素 ,建立了用抗河毒素单克隆抗体检测河样品中河毒素的直接竞争抑制性酶联免疫吸附试验 (ELISA)方法。结果表明 ,直接ELISA法较间接ELISA法灵敏 ,最低检出浓度为 0 1ng mL(每检测孔 0 0 1ng) ,线性范围为 5～ 5 0 0ng mL ,方法的加标回收率为73 0 %～ 118 0 %。本法与传统的小鼠生物试验相比 ,两种方法的测定结果之间在统计学上差异无显著性 (配对t检验 ,P >0 1) ,并具有良好的相关性 (r =0 94 4)。对来自江苏省东海和长江水域的河样品的毒力进行了测定 ,结果表明本方法简单、快速、灵敏。; 计融王健伟罗雪云江涛张靖; 关键词：毒力酶联免疫吸附测定

肉制品中马源性成分实时荧光PCR检测方法的建立被引量：4: 2013年; 目的建立肉制品中马源性成分的实时荧光PCR检测方法。方法参考欧盟实验室推荐的方法设计引物和探针,建立实时荧光PCR检测方法并验证方法的特异性、灵敏度,在北京部分超市、农贸市场、餐馆随机采集国产和进口牛、羊肉制品进行马源性成分检测。结果实时荧光PCR方法对马源性成分具有较高的特异性,与羊、猪、鸡、鸭、兔DNA均无交叉反应,与牛DNA在Ct 33.81出现交叉反应;所建方法对牛、羊肉中人工掺入马肉成分的检测灵敏度是0.1%。对北京市场上随机采集的122份牛、羊肉制品的检测结果显示,所有样品均未检出马肉成分。结论所建肉制品中马源性成分的检测方法简单、特异,检测灵敏度完全达到欧盟对肉类食品中掺入马源性成分比例的要求。; 李楠王佳慧沈青韩春卉张靖李凤琴徐进江涛; 关键词：实时荧光PCR 牛肉制品羊肉制品

北京市市售牡蛎中诺如病毒核酸检测及定量分析被引量：12: 2017年; 目的针对北京市市售牡蛎样品中诺如病毒污染水平及污染浓度进行定量分析研究。方法分离牡蛎消化腺,将消化腺匀浆处理,加入含有蛋白酶K的磷酸盐缓冲液,进行样品前处理,用试剂盒提取病毒RNA,用一步法实时荧光逆转录聚合酶链式反应(real time RT-PCR)检测诺如病毒RNA,并对阳性样品进行定量分析。结果共检测牡蛎样品356份,其中GGI阳性样品12份,GGII阳性样品39份,GGI和GGII同时为阳性的样品6份。对阳性样品中的诺如病毒核酸定量分析,核酸浓度在3.7×10~3~2.8×10~5基因拷贝/g(消化腺)之间。结论北京市市售牡蛎中存在诺如病毒污染的情况,需要加强对牡蛎中诺如病毒的污染监测,并开展污染水平风险评估,保障消费者食用安全,降低由诺如病毒引起的腹泻病的疾病负担。; 江涛韩春卉张宏元张靖王佳慧李楠吕涵阳李凤琴; 关键词：诺如病毒牡蛎食品污染物

抗河豚毒素单克隆抗体的制备及其特性的初步研究被引量：28: 1996年; 将用合成的匙孔形虫戚血蓝蛋白－甲醛－河豚毒素（ＫＬＨ－ＨＣＨＯ－ＴＴＸ）连接物免疫的ＢＡＬＢ／ｃ小鼠的脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞系Ｓｐ２／０融合，经３～４次亚克隆，建立了３个稳定分泌抗河豚毒素的杂交瘤细胞株，分别命名为１Ｇ３、４Ｇ３、６Ｄ９。其中１Ｇ３和４Ｇ３分属ＩｇＧ２ｂ亚类，６Ｄ９属ＩｇＧ１亚类。腹水的抗体稀释度为１∶１０５～１：５×１０６。用竞争抑制性酶联免疫吸附试验（ＥＬＩＳＡ）测定三种抗体的最低反应浓度为１×１０－３ｍｇ／Ｌ。; 王健伟王德斌罗雪云计融张靖曹明华; 关键词：河豚毒素单克隆抗体

山东临沂部分地区2012年产花生真菌污染调查被引量：9: 2013年; 目的对山东临沂地区5个花生主产区2012年产花生真菌污染情况进行调查。方法分别采集收获前1个月的花生和土壤样品,及收获期、收获后储存1个月、收获后储存3个月的花生样品,分别以点种法(花生样品)和稀释法(土壤样品)接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板,于(28±1)℃培养5 d后进行菌落计数并鉴定。结果临沂部分地区花生样品100%受真菌污染。不同地区花生样品污染真菌的菌相不同,同一地区不同采样期花生样品污染的菌相也有差异;但各采样期花生样品中黄曲霉污染水平均较低(平均4.38%)。结论山东临沂部分地区花生样品虽受黄曲霉污染较轻,但其它真菌污染严重,因此应加强花生种植、采摘、贮藏过程的防霉管理。; 韩小敏王伟李凤琴李玉伟张靖张宏元赵熙韩春卉徐进; 关键词：真菌黄曲霉污染花生食品安全

微生物源酶制剂抗菌活性测定方法研究被引量：1: 2013年; 目的参考联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)食品添加剂联合专家委员会推荐的方法,在对包括纸片规格、培养基、标准菌株浓度、阳性对照物浓度等影响酶制剂抗菌活性检测主要因素优化的基础上,建立微生物源酶制剂抗菌活性检测方法。方法以浓度为5.0和10.0μg/片的环丙沙星纸片为阳性对照,在相同的培养温度、培养时间等试验条件下,比较9种不同规格纸片、3种品牌培养基、3个菌液稀释度对6种标准菌株抗菌活性的影响。结果 HZT 2号滤纸、2张叠加的whatman903纸片与商业化抗菌活性测定用纸片Whatman 2017-013效果相当;国产1号和2号胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)与进口TSA效果相当;确定5种受试菌培养24 h后菌液的10倍稀释液为工作浓度(化脓链球菌的工作浓度为菌液的20倍稀释液);环丙沙星纸片的工作浓度为5.0μg/片。结论HZT 2号滤纸、2张叠加的Whatman903滤纸或Whatman 2017-013滤纸、国产或进口TSA培养基、受试微生物培养24 h的10倍(化脓链球菌20倍)菌液稀释液、环丙沙星浓度5.0μg/片为微生物源酶制剂抗菌活性测定中优化出的最佳试验条件。; 韩小敏李玉伟张宏元张靖赵熙韩春卉李凤琴; 关键词：酶制剂抗菌活性抗菌素微生物影响因素

建立小鼠免疫低下模型的初步研究被引量：51: 2001年; 为建立小鼠免疫低下模型 ,应用环磷酰胺对小鼠引起的免疫低下状态进行了实验研究。一次性腹腔给予 2 5～ 30g的雄性BalB c小鼠 4 0mg kgBW的环磷酰胺 ,第二天 ,小鼠抗体生成细胞实验和血清溶血素实验呈免疫低下状态 ;给予 10 0mg kgBW的环磷酰胺 ,第二天 ,小鼠迟发型变态反应 (足跖增厚法 )实验和腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验呈免疫低下状态。给予环磷酰胺一周后 ,小鼠免疫状态恢复至正常 ,甚至会出现免疫增强的现象。小鼠的脾脏指数和体液免疫指标对环磷酰胺较敏感。; 李业鹏计融韩春卉李燕俊江涛李玉伟赵熙张靖刘红蕾钟凯陈庭君; 关键词：环磷酰胺小鼠保健食品

海藻糖对单克隆抗体热稳定性保护作用的研究被引量：7: 2001年; 为研究海藻糖在保护单克隆抗体热稳定性方面的作用 ,将海藻糖化单克隆抗体置于室温、37℃、56℃条件下存放 ,采用倍比稀释法对抗体活性进行检测 ,同时还比较不同浓度的海藻糖对单克隆抗体热稳定性的影响。实验结果表明 :海藻糖的浓度为 0 2 50mol L ,且在室温存放的条件下 ,抗体可以存放一年而具有活性。因此 ,海藻糖可以作为一种天然保藏剂 ,有效地提高单克隆抗体的热稳定性。; 计融江涛李业鹏崔生辉李燕俊韩春卉李玉伟刘红蕾张靖赵熙; 关键词：海藻糖单克隆抗体热稳定性

抗河豚毒素单克隆抗体联酶前纯化条件优化的研究被引量：1: 2013年; 目的了解不同辛酸浓度下盐析法、不同离心力对抗河豚毒素(TTX)单克隆抗体的纯化效果以及纯化后酶标抗体性能的影响,优化出纯化抗TTX单克隆抗体的方法,为免疫学方法检测TTX提供依据。方法在传统辛酸-硫酸铵蛋白纯化方法的基础上进行改进,考察不同的辛酸浓度、不同的离心力对抗TTX单克隆抗体纯化效果的影响,并将纯化后抗体与辣根过氧化物酶(HRP)连接,用间接竞争酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测酶标抗体的生物学活性及各项性能指标并比对。结果不同方法纯化获得的抗体及其酶结合物的各项指标参数、活性不同,当腹水稀释液与辛酸体积比为1 000∶11、纯化过程中离心力10 000 r/min时纯化获得的抗体虽然产量有所下降但纯度较高,酶标抗体的生物活性、各项指标均最优。结论经过对抗TTX单克隆抗体纯度、抗体中蛋白含量、酶标抗体各项性能指标的对比,优化出用于抗TTX抗体纯化用腹水稀释液与辛酸比值1 000∶11(V/V)、离心力10 000 r/min的试验条件。; 韩春卉张林张宏元李楠张靖江涛李凤琴; 关键词：河豚毒素 ELISA方法

张靖

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