张宏元 作品数:14 被引量:87 H指数:6 供职机构: 国家食品安全风险评估中心 更多>> 发文基金: 北京市自然科学基金 国家自然科学基金 科技基础性工作专项 更多>> 相关领域: 医药卫生 轻工技术与工程 农业科学 生物学 更多>>
鼠伤寒沙门菌婴幼儿分离株耐药基因及毒力基因研究 被引量:11 2016年 目的基于全基因组测序结果,分析鼠伤寒沙门菌耐药表型和耐药基因的关系,研究其耐药发生机制和毒力因子。方法利用美国临床和实验室标准委员会(CLSI)推荐的微量肉汤稀释法对5岁以下腹泻患儿粪便中分离的321株鼠伤寒沙门菌开展药物敏感性试验,从中选择不同耐药表型的3株鼠伤寒沙门菌(S1:敏感;S2:TET耐药;S3:ESBLs阳性,10重耐药)进行全基因组测序,通过与抗生素抗性基因数据库(ARDB)和病原毒力因子数据库(VFDB)比对以及美国国立生物技术信息中心(NCBI)核酸数据库人工检索,对耐药基因和毒力基因进行注释。结果 321株鼠伤寒沙门菌对IPM和MEM均敏感,对TET和AMP的耐药率最高,分别为84.4%(271/321)和83.8%(269/321),206株菌株显示为耐3类以上抗生素(64.2%,206/321),11株CIP-CTX耐药株均为ESBLs阳性(3.4%,11/321);全基因组测序结果显示,S1、S2和S3的全基因组大小依次为4 876 427、4 970 690、5 133 380 bp,预测编码基因数分别为4 825、4 936和5 082个,GC含量依次为52.18%、52.14%、51.87%;对S1、S2和S3基因组中18、20和32个耐药基因进行注释,除共有基因外,S2主要携带tet A和sul2基因,S3主要携带sul1/2/3、tetB、AAC(3)-IV、AAC(6')-I、ANT(2″)-I、ANT(3″)-I、aph A1、bla_(CTX-M-14)、bla_(OXA-1)、catB3、cml_e1和cml_e3基因。与阳性鼠伤寒沙门菌株LT2的gyr A基因进行序列比对发现,S3 gyr A基因第87位密码子由GAC突变为AAC(Asp87→Asn);分别注释S1、S2和S3基因组的130、129和120个毒力基因,发现主要以三型分泌系统和粘附因子为主。结论 5岁以下腹泻患儿粪便样品中鼠伤寒沙门菌耐药现象严重;全基因组测序分析发现耐药基因与耐药表型一致,且存在多种毒力因子;为后续开展耐药基因传播机制和菌株致病性研究,评估其对人群的健康风险,防控鼠伤寒沙门菌感染提供技术支持。 王伟 胡豫杰 徐进 彭子欣 张宏元 赵熙 许学斌 李凤琴关键词:婴幼儿 鼠伤寒沙门菌 耐药基因 全基因组测序 食源性致病菌 山东临沂部分地区2012年产花生真菌污染调查 被引量:9 2013年 目的对山东临沂地区5个花生主产区2012年产花生真菌污染情况进行调查。方法分别采集收获前1个月的花生和土壤样品,及收获期、收获后储存1个月、收获后储存3个月的花生样品,分别以点种法(花生样品)和稀释法(土壤样品)接种于马铃薯葡萄糖琼脂(PDA)平板,于(28±1)℃培养5 d后进行菌落计数并鉴定。结果临沂部分地区花生样品100%受真菌污染。不同地区花生样品污染真菌的菌相不同,同一地区不同采样期花生样品污染的菌相也有差异;但各采样期花生样品中黄曲霉污染水平均较低(平均4.38%)。结论山东临沂部分地区花生样品虽受黄曲霉污染较轻,但其它真菌污染严重,因此应加强花生种植、采摘、贮藏过程的防霉管理。 韩小敏 王伟 李凤琴 李玉伟 张靖 张宏元 赵熙 韩春卉 徐进关键词:真菌 黄曲霉 污染 花生 食品安全 微生物源酶制剂抗菌活性测定方法研究 被引量:1 2013年 目的参考联合国粮农组织/世界卫生组织(FAO/WHO)食品添加剂联合专家委员会推荐的方法,在对包括纸片规格、培养基、标准菌株浓度、阳性对照物浓度等影响酶制剂抗菌活性检测主要因素优化的基础上,建立微生物源酶制剂抗菌活性检测方法。方法以浓度为5.0和10.0μg/片的环丙沙星纸片为阳性对照,在相同的培养温度、培养时间等试验条件下,比较9种不同规格纸片、3种品牌培养基、3个菌液稀释度对6种标准菌株抗菌活性的影响。结果 HZT 2号滤纸、2张叠加的whatman903纸片与商业化抗菌活性测定用纸片Whatman 2017-013效果相当;国产1号和2号胰蛋白胨大豆琼脂(TSA)与进口TSA效果相当;确定5种受试菌培养24 h后菌液的10倍稀释液为工作浓度(化脓链球菌的工作浓度为菌液的20倍稀释液);环丙沙星纸片的工作浓度为5.0μg/片。结论HZT 2号滤纸、2张叠加的Whatman903滤纸或Whatman 2017-013滤纸、国产或进口TSA培养基、受试微生物培养24 h的10倍(化脓链球菌20倍)菌液稀释液、环丙沙星浓度5.0μg/片为微生物源酶制剂抗菌活性测定中优化出的最佳试验条件。 韩小敏 李玉伟 张宏元 张靖 赵熙 韩春卉 李凤琴关键词:酶制剂 抗菌活性 抗菌素 微生物 影响因素 中国饲料原料中真菌污染状况研究 被引量:5 2014年 目的对不同饲料原料中真菌污染状况进行研究。方法从全国不同地区的代表性饲料生产企业采集豆粕、棉籽粕、麦麸和玉米干酒糟及其可溶物(DDGS)4种饲料原料样品,采用平板稀释法接种,对影响真菌分离的关键因素进行筛选,并对各样品的真菌污染状况进行分析。结果含氯霉素0.1g/L的马铃薯葡萄糖琼脂、10-稀释度分别为从饲料中分离真菌的最适培养基和稀释度。饲料原料中真菌污染率范围为31%(DDGS)~88%(麦麸);不同地区同种饲料原料、同一地区不同种类的饲料原料样品受真菌污染的程度各异。不同地区、不同种类饲料原料中重要产毒真菌黄曲霉和镰刀菌的污染水平也各不相同,东北地区黄曲霉和镰刀菌的污染水平最高,华南地区最低;麦麸和棉籽粕污染水平最高,DDGS最低;各种饲料中黄曲霉的平均污染水平(25%)高于镰刀菌(11%)。结论我国饲料原料样品受黄曲霉和镰刀菌的污染值得关注,需在饲料生产加工过程中,加强对真菌污染的控制。 韩小敏 赵熙 张靖 张宏元 余东敏 江涛 李凤琴 韩春卉关键词:饲料原料 真菌 污染 北京市市售牡蛎中诺如病毒核酸检测及定量分析 被引量:12 2017年 目的针对北京市市售牡蛎样品中诺如病毒污染水平及污染浓度进行定量分析研究。方法分离牡蛎消化腺,将消化腺匀浆处理,加入含有蛋白酶K的磷酸盐缓冲液,进行样品前处理,用试剂盒提取病毒RNA,用一步法实时荧光逆转录聚合酶链式反应(real time RT-PCR)检测诺如病毒RNA,并对阳性样品进行定量分析。结果共检测牡蛎样品356份,其中GGI阳性样品12份,GGII阳性样品39份,GGI和GGII同时为阳性的样品6份。对阳性样品中的诺如病毒核酸定量分析,核酸浓度在3.7×10~3~2.8×10~5基因拷贝/g(消化腺)之间。结论北京市市售牡蛎中存在诺如病毒污染的情况,需要加强对牡蛎中诺如病毒的污染监测,并开展污染水平风险评估,保障消费者食用安全,降低由诺如病毒引起的腹泻病的疾病负担。 江涛 韩春卉 张宏元 张靖 王佳慧 李楠 吕涵阳 李凤琴关键词:诺如病毒 牡蛎 食品污染物 抗河豚毒素单克隆抗体联酶前纯化条件优化的研究 被引量:1 2013年 目的了解不同辛酸浓度下盐析法、不同离心力对抗河豚毒素(TTX)单克隆抗体的纯化效果以及纯化后酶标抗体性能的影响,优化出纯化抗TTX单克隆抗体的方法,为免疫学方法检测TTX提供依据。方法在传统辛酸-硫酸铵蛋白纯化方法的基础上进行改进,考察不同的辛酸浓度、不同的离心力对抗TTX单克隆抗体纯化效果的影响,并将纯化后抗体与辣根过氧化物酶(HRP)连接,用间接竞争酶联免疫吸附试验法(ELISA)检测酶标抗体的生物学活性及各项性能指标并比对。结果不同方法纯化获得的抗体及其酶结合物的各项指标参数、活性不同,当腹水稀释液与辛酸体积比为1 000∶11、纯化过程中离心力10 000 r/min时纯化获得的抗体虽然产量有所下降但纯度较高,酶标抗体的生物活性、各项指标均最优。结论经过对抗TTX单克隆抗体纯度、抗体中蛋白含量、酶标抗体各项性能指标的对比,优化出用于抗TTX抗体纯化用腹水稀释液与辛酸比值1 000∶11(V/V)、离心力10 000 r/min的试验条件。 韩春卉 张林 张宏元 李楠 张靖 江涛 李凤琴关键词:河豚毒素 ELISA方法 生孢梭菌代谢产物对ICR小鼠的毒性研究 被引量:6 2014年 目的研究生孢梭菌代谢产物对ICR小鼠的毒性作用。方法将分离自浓缩乳清蛋白粉及其制品样品中的生孢梭菌分别培养在庖肉肉汤及TPGY肉汤培养基中,将过滤除菌及处理后的培养液分别经灌胃和腹腔注射给予ICR小鼠,观察其中毒及死亡情况。结果生孢梭菌培养液及处理后的培养液经腹腔注射ICR小鼠后均对其有毒性作用,中毒症状表现为小鼠急促呼吸后猝死,死亡时间多集中在10 min内,平均为5~7 min,A-F多价抗肉毒毒素诊断血清对小鼠无保护作用。结论生孢梭菌代谢产物中含有不同于肉毒毒素的有毒代谢产物,腹腔注射可导致ICR小鼠猝死。 董银苹 韩春卉 江涛 张宏元 王佳慧 韩小敏 甘辛 白莉 王伟 胡豫杰 李凤琴 徐进关键词:代谢产物 毒性试验 食品安全 ICR小鼠 2013—2014年中国部分地区饲料原料真菌污染状况调查 被引量:1 2016年 目的调查2013—2014年中国部分地区4种常见饲料原料的真菌污染状况。方法从中国部分地区有代表性的饲料生产企业采集豆粕、棉籽粕、麦麸和玉米干酒糟及其可溶物(distillers dried grains with soluble,DDGS)4种饲料原料共计795份,分别参照GB 4789.15—2010《食品微生物学检验霉菌和酵母计数》和GB/T4789.16—2003《食品微生物学检验常见产毒霉菌的鉴定》进行真菌计数和真菌的分离及鉴定。结果共检出25属54种真菌,曲霉属、青霉属和镰刀菌属是饲料原料常见污染真菌。麦麸真菌污染最为严重,四季的真菌检出率均大于84.9%,超过饲用限量标准的样品比例达20.8%。棉籽粕和DDGS的真菌检出率和污染水平相对较低,超过饲用限量标准的样品比例分别为0.9%和1.4%。黄曲霉和串珠镰刀菌的污染存在原料种类、季节和地域差异,麦麸中黄曲霉在四季和全国的检出率均较高,以秋、冬两季和华中地区最高;豆粕中串珠镰刀菌在秋冬两季和华北地区的检出率较高。DDGS中黄曲霉的检出率很低,但串珠镰刀菌的检出率较高,以秋季和华中地区样品中串珠镰刀菌检出率最高,分别达40.4%和50.0%。结论中国饲料原料普遍受到真菌污染,加强夏秋两季、华北和华中地区饲料原料的真菌污染监测是保证饲料原料质量的重要措施。 韩小敏 余东敏 张靖 张宏元 韩春卉 赵熙 江涛 徐进 李凤琴关键词:真菌 饲料原料 污染 我国五省(市)小麦粉中重要镰刀菌毒素的污染调查 被引量:10 2017年 调查我国安徽省、北京市、河南省、吉林省、山东省五省(市)158份小麦粉中单端孢霉烯族化合物和玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEN)等10种重要镰刀菌毒素的污染情况。样品经乙腈-水(84:16,V:V)提取、Multi Sep 226多功能净化柱净化后,分别以含2 mmol/L甲酸铵的0.1%甲酸-甲醇和含0.1%氨水-乙腈作为电喷雾正离子模式和负离子模式检测小麦粉样品的10种重要镰刀菌毒素。结果显示:我国五省(市)小麦粉易受B类单端孢霉烯族化合物和ZEN的污染。其中B类单端孢霉烯族化合物以脱氧雪腐镰刀菌烯醇(deoxynivalenol,DON)的污染最为严重,超出限量标准1 000μg/kg的样品百分比为68%(108/158),阳性样品中DON的平均含量为4 084.8μg/kg;同时还检出3-乙酰基-DON(3-acetyl-DON,3-A-DON)、15-乙酰基-DON(15-acetyl-DON,15-A-DON)及其隐蔽型DON-3-葡萄糖苷(DON-3-glucoside,DON-3-G)。ZEN的超出国家限量标准的百分比为24%(38/158),平均含量为85.8μg/kg。本研究表明我国五省(市)小麦粉受DON和ZEN污染严重,需要加强对其的持续监测。 韩小敏 李凤琴 徐文静 张宏元 张靖 赵熙 徐进 韩春卉关键词:镰刀菌毒素 小麦粉 高效液相色谱-串联质谱 山东地区饲料原料真菌污染状况调查 被引量:1 2015年 目的调查山东地区饲料原料真菌污染状况。方法从山东地区代表性饲料生产企业采集豆粕、棉籽粕、麦麸、可溶性干酒糟(distillers dried grains with soluble,DDGS)和玉米粉5种饲料原料样品,密封送至实验室采用平板稀释法接种分离,并对不同样品的真菌进行鉴定。结果 5种饲料原料的真菌检出率分别为豆粕(76.19%)、棉籽粕(68.75%)、麦麸(85.71%)、DDGS(21.62%)和玉米粉(100%)。玉米粉带菌量最高,达4.75×105 cfu/g;豆粕带菌量最低,均小于103 cfu/g。污染真菌种类多样,共检出曲霉属8种、镰刀菌属3种、青霉属7种、其他真菌19种,其中以黄曲霉、串珠镰刀菌和串珠镰刀菌胶孢变种最为常见。结论山东地区饲料原料受真菌污染较普遍,不同种类饲料原料受真菌污染水平不同。污染的黄曲霉和镰刀菌可能含产毒菌株,值得关注。 韩小敏 李凤琴 韩春卉 张靖 张宏元 赵熙 余东敏 江涛 徐进关键词:饲料原料 真菌 污染