孟庆来
- 作品数：11 被引量：11H指数：2
- 供职机构：中国疾病预防控制中心传染病预防控制国家重点实验室更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金国家高技术研究发展计划上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：农业科学医药卫生生物学更多>>
- 假型病毒的应用研究进展被引量：1
- 2006年
- 一种病毒的核酸被另一种病毒编码的包膜蛋白所包被,称为假型病毒。假型病毒在细胞内只能进行单一周期复制,安全性好,并具有广泛的宿主范围,更高的转染效率,更容易浓缩成高滴度,能抵抗血清补体的攻击,非细胞周期依赖性地高效转染静止细胞等优点,因而假型病毒在研究病毒进入过程、受体鉴定、中和抗体检测、疫苗评价等方面具有重要作用。
- 李深伟孟庆来张晓燕
- 关键词：报告基因中和抗体
- 利用流式细胞术测定CTL活性方法在EIAV免疫学中的应用被引量：4
- 2005年
- 利用PKH-26和CFSE两种荧光染料对靶细胞染色,建立了一种通过流式细胞术进行马传染性贫血症病毒 (Equine infectious anemia virus,EIAV)抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞(Cytotoxic T lymphocytes,CTL)反应的 新方法,避免了经典的Cr51释放法对检测人员的放射线威胁,降低了本底释放,提高了检测的灵敏度。将该检测方 法用于检测EIAV疫苗毒接种马和嵌合克隆接种马的细胞免疫反应变化趋势,数据显示细胞免疫反应在接种后3 个月达到成熟阶段而后保持在较高的反应水平。该方法的成功建立和应用为研究EIAV减毒疫苗的免疫机制提 供了好的研究手段,也为其他病毒的免疫学研究提供了新的参考方法。
- 童骁沈弢梁华孟庆来钟卫洲马燕魏丽丽相文华沈荣显徐建青张晓燕邵一鸣
- 关键词：ANEMIA
- EIAV活疫苗与基因工程疫苗免疫保护比较及生物学研究
- 马传染性贫血病毒(EIAV)是与HIV同科同属的马属动物慢病毒，其病毒形态、基因组结构，病毒编码蛋白的结构和功能及抗原特性等方面与HIV极为相似。中国EIAV减毒活疫苗是目前世界上唯一大规模应用的慢病毒疫苗。因此深入揭示...
- 孟庆来
- 关键词：减毒疫苗基因工程疫苗免疫保护马传染性贫血病毒
- 男男性接触HIV患者中合并病毒性肝炎的状况研究
- 男男性接触者(Men who have sex with men,MSM)人群由于非保护性性交、多性伴、商业性行为等高危行为而处于感染艾滋病的高危险之中。为了更全面了解HIV+MSM人群中甲、乙、丙型肝炎病毒的感染状况。...
- 王万海张晓燕马燕阳凯邓素英孟庆来邵一鸣 杨晔姜树林张晓曦
- 关键词：男男性接触者血清学诊断
- 文献传递网络资源链接
- 马传染性贫血病毒膜蛋白基因的改造及其在真核细胞中的表达被引量：1
- 2008年
- 以马传染性贫血病毒(equine infectious anemia virus,EIAV)天然膜蛋白基因(gp120)为基础设计的DNA疫苗在马体内的表达量很低,这与密码子使用偏嗜性、RNA剪切位点多和导致RNA不稳定性的腺苷丰富区的大量存在有关。为解决这些问题,合成了EIAVgp120基因(Syn-env),使其密码子偏嗜性符合高水平表达的哺乳动物基因。EIAV弱毒疫苗的制备过程中,出现了几个重要而稳定的N-糖基突变位点,以Syn-env为基础,运用重叠延伸PCR定点突变策略获得了6个具有不同N-糖基缺失组合的gp120基因。将突变后的基因克隆到真核表达载体pVRCSV1.0,然后转染Hela细胞,发现这些重组质粒均获得了表达。进而为比较6种质粒诱导机体免疫保护效果,阐明EIAV弱毒疫苗减毒机理奠定了基础。
- 陈新江孟庆来毛洁张晓燕张耀洲
- 关键词：马传染性贫血病毒GP120定点突变真核表达
- 人结直肠活组织HIV-1黏膜感染模型的建立被引量：1
- 2011年
- 目的 建立与HIV-1黏膜感染相关的结直肠活组织体外培养模型,利用假病毒模拟HIV-1进入黏膜建立感染的生物学过程. 方法 在知情同意下,取肿瘤手术患者癌旁正常结直肠组织,保留黏膜层与黏膜下层,钻取成统一大小（直径6 mm）的组织块置于12孔板中培养.HE染色观察培养0 d至13 d时组织形态结构的变化,噻唑蓝法（MTT法）同步检测组织活性.采用单轮复制周期假病毒感染黏膜并持续培养6～7 d,通过检测上清中p24含量验证该模型再现HIV-1黏膜感染的适用性;以进入临床实验的预防HIV-1黏膜感染的第1代微生物杀菌剂壬苯醇醚-9（N-9）为例,验证该模型对黏膜外用药物的反应性. 结果 HE染色观察至5 d时结直肠组织结构良好,13 d时黏膜组织结构依然可见.经MTT法检测黏膜培养4 d时活性高于80%,7 d的活性可保持在50%左右.假病毒感染该活组织模型后半量换液1、4、8 d的培养上清中,检测到p24的含量升高;同时,该组织模型活性可灵敏地反映出N-9浓度的变化. 结论 成功建立一种人体结直肠活组织HIV-1体外感染模型,可模拟人体HIV-1黏膜感染的生物学过程.
- 杨瑜刘爱平孟庆来徐建青张晓燕
- 关键词：肠黏膜HIV感染
- 马传染性贫血病毒gp90蛋白的表达及其在诊断中的潜在应用
- 2009年
- 以质粒pVRCSV1.0-syn-gp90为模板,利用PCR扩增马传染性贫血病毒外膜蛋白基因(gp90),构建了原核表达质粒pET-28a(+)-gp90,然后转化大肠杆菌Rosetta(DE3),诱导表达并纯化该重组蛋白,ELISA和Western blot证明马的阳性血清可以识别该重组蛋白。以纯化的融合蛋白免疫新西兰大白兔制备多克隆抗体,测定的效价为1∶13,000。
- 陈新江毛洁孟庆来张晓燕张耀洲
- 关键词：GP90基因原核表达纯化EIAV
- EIAV减毒疫苗克隆株诱导体液免疫反应的时相研究被引量：3
- 2009年
- 为研究马传染性贫血病毒病(EIAV)减毒疫苗免疫动物后体液免疫反应的成熟时相,选用健康马4匹,2匹接种EIAV感染性克隆减毒疫苗pLGFD3毒后,另2匹接种生理盐水做对照,接种后定期采集血样,采用ELISA方法检测各个时相点血清中gp90,p26的结合抗体滴度,并采用细胞蚀斑染色检测病毒中和抗体滴度,分析抗体反应的规律。结果显示,感染性克隆pLGFD3毒免疫后,针对envgp90和gagp26蛋白均产生了特异性的体液免疫反应,gp90结合抗体在2个半月左右达峰值,随后尽管有轻微的波动,一直维持在较高的水平直至免疫后5～6个月,随后开始轻微回落,在免疫后32个月时仍能检测到抗体的稳定存在,而p26结合抗体在1～2个月左右达峰值后则呈明显回落,在4个月时降至检测水平以下。gp90诱导的特异性中和抗体的水平同样在2个月左右达峰值,在整个观测期内持续稳定存在。结果表明,EIAV感染性克隆减毒疫苗免疫后,能诱导产生特异性的gp90,p26结合抗体以及中和抗体,而且gp90特异性抗体和中和抗体可持续稳定存在,这些抗体可能参与减毒疫苗诱导的免疫保护作用。
- 阳凯孟庆来陈新江马燕相文华张耀洲邵一鸣张晓燕
- 关键词：EIAV减毒疫苗体液免疫
- 痘苗病毒对马属动物细胞的感染性研究
- 2007年
- 目的研究痘苗病毒天坛株是否能够感染马属动物细胞,并诱导免疫马产生免疫反应。方法首先采用重组绿色荧光蛋白(GFP)的痘苗病毒WR株感染驴胎皮肤细胞(FDD)后,通过流式细胞仪定期检测GFP表达水平(病毒感染率),探索最佳感染时间,进而用重组HIV-1 Gag蛋白的痘苗病毒天坛株感染FDD,通过免疫印记实验确认Gag蛋白在细胞内表达,并且进行胞内染色,通过流式细胞仪监测病毒的复制进程;使用痘苗病毒天坛株空载体接种实验马并监测其诱导的免疫反应。结果痘苗病毒感染FDD使产生病变效应,在其内表达外源蛋白,最佳时间为48h;使实验马产生针对病毒的结合抗体。结论痘苗病毒对FDD易感,痘苗病毒天坛株能使实验马感染,提示痘苗病毒重组EIAV抗原的载体疫苗可用于马体接种免疫。
- 马燕孟庆来段丹丽王晓钧刘颖相文华沈容显张晓燕邵一鸣
- 关键词：痘苗病毒天坛株
- T细胞IFN-γ表达水平检测方法的建立及其在马传染性贫血疫苗免疫机理研究中的应用被引量：1
- 2008年
- 【目的】马传染性贫血病毒(EIAV)弱毒疫苗致弱机制和免疫保护机理的研究可以为慢病毒疫苗的研究提供重要的模型。为探讨IFN-γ表达水平与疫苗保护性免疫的关系,本研究旨在建立一种准确、有效地检测EIAV感染马不同T细胞亚型表达IFN-γ水平的方法。【方法】我们将分离的马传贫弱毒疫苗免疫马(FDDV)、强毒感染马(LV)和健康马的外周血单核细胞(PBMC),体外分别经病毒(FDDV)和PMA/Inomycin激活、BFA阻断蛋白分泌、荧光标记马的特异性表面抗体和IFN-γ抗体等过程后,进行流式检测。【结果】疫苗免疫马产生的特异性IFN-γ水平为CD4+1.7±0.9%/CD8+6.1±1.2%,而强毒组则为CD4+0.6±0.1%/CD8+2.4±0.9%。【结论】本研究建立的多荧光参数流式细胞术同时检测细胞内IFN-γ染色和淋巴细胞亚型的方法,具有良好的特异性,稳定性和重复性。为研究EIAV弱毒疫苗免疫保护机制奠定了基础。
- 林跃智邓喜林沈楠赵立平孟庆来马建王君伟邵一鸣周建华
- 关键词：IFN-Γ马传染性贫血病毒流式细胞法
