孙大鹏
- 作品数：15 被引量：31H指数：3
- 供职机构：辽宁医学院附属第一医院更多>>
- 发文基金：辽宁省自然科学基金国家自然科学基金辽宁省科技厅自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 白藜芦醇通过c-FLIP蛋白影响乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长和侵袭被引量：2
- 2015年
- 目的观察白藜芦醇(RES)抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231生长和侵袭的作用是否是通过抑制c-FLIP的表达来实现的。方法重组腺病毒载体Ad-c-FLIP的构建及鉴定、转染乳腺癌细胞,通过qRT-PCR、RT-PCR和Western印迹观察c-FLIP的表达情况;MTT比色法检测空白对照组;RES100μg/ml组;100μmol/L RES+Ad-GFP-c-FLIP组;Ad-GFP-c-FLIP组在24 h,48 h和72 h内对乳腺癌细胞增殖的影响;流式细胞仪和Transwell实验分别检测各组在作用48 h后乳腺癌细胞的凋亡和侵袭情况;Western印迹检测各组在作用48 h后caspase-3、-8、MMP-2、-9的表达情况。结果qRT-PCR、RT-PCR和Western印迹检测结果显示Ad-GFP-c-FLIP明显增强c-FLIP的表达,而与Ad-GFP-c-FLIP组比较RES+Ad-GFP-c-FLIP组明显抑制c-FLIP的表达;与Ad-GFP-c-FLIP组相比RES+Ad-GFP-c-FLIP组乳腺癌细胞的生长明显被抑制(P<0.05),并且随时间的延长抑制作用明显加大;与Ad-GFP-c-FLIP组相比RES+Ad-GFP-c-FLIP组乳腺癌细胞的侵袭能力明显被抑制,而乳腺癌细胞的凋亡明显增加(P<0.05);Western印迹检测结果显示,作用48 h后与Ad-GFP-c-FLIP组比较白藜芦醇+Ad-GFP-c-FLIP组MMP-2,-9表达被抑制,而caspase-3,-8表达被增强。结论 RES可以通过降低c-FLIP的表达来抑制乳腺癌细胞MDA-MB-231的生长和侵袭。
- 孙大鹏李莹韩冠英
- 关键词：C-FLIP白藜芦醇乳腺癌细胞
- 重组腺病毒介导的FOXO/MDA-7对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制
- 2016年
- 目的探讨重组腺病毒介导的FOXO/MDA-7对乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其机制。方法将MDA-MB-231细胞分为Ad-FOXO/MDA-7组、Ad-FOXO组、Ad-MDA-7组和空白对照组,采用Real-time PCR、q RTPCR和Western blot法检测各组细胞中FOXO和MDA-7基因的转录及蛋白表达水平;MTT法检测细胞的增殖活力;流式细胞术检测细胞的凋亡情况;Transwell法检测细胞的侵袭能力;Western blot法检测细胞中Ras、Raf、MEK和ERK蛋白的表达情况。结果与其他各组相比,转染Ad-FOXO/MDA-7后,MDA-MB-231细胞中FOXO和MDA-7的表达明显增强,细胞的增殖活力和侵袭能力明显被抑制(P<0.05),凋亡率明显升高,细胞中Ras、Raf、MEK和ERK蛋白的表达也明显被抑制。结论重组腺病毒Ad-FOXO/MDA-7能明显促进乳腺癌细胞的凋亡,为乳腺癌的基因治疗提供了新的思路。
- 任尧李莹孙大鹏
- 关键词：FOXOMDA-7腺病毒乳腺癌MDA-MB-231细胞
- 全硫代反义寡核苷酸对乳腺癌MDA-MB-231细胞的影响
- 2012年
- 目的本研究探讨全硫代反义寡核苷酸(PS-ASODN)对乳腺癌MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞生长、迁移、侵袭的影响。方法本实验将PS-ASODN经脂质体转染作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞,将实验分为空白对照组、对照正义全硫代寡核苷酸(PS-SODN)组和不同剂量的PS-ASODN组;脂质体介导的PS-ASODN和PS-SODN作用于乳腺癌MDA-MB-231细胞后,分别采用四甲基偶氮唑蓝比色法(MTT)、酶联免疫吸附法(ELISA)、流式细胞术、Transwell小室迁移、侵袭实验检测细胞的体外增殖、端粒酶活性、细胞凋亡、细胞迁移、侵袭能力的影响。结果终浓度为1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞端粒酶活性及细胞的增殖均有抑制作用,与空白对照组比较差异显著(P<0.01),并呈一定剂量依赖性;ELISA法检测结果,1、3及5μmol/L的PS-ASODN对MDA-MB-231细胞作用72 h后端粒酶皆为阴性,表明端粒酶PS-ASODN能够抑制端粒酶活性,对照组端粒酶皆为阳性。1、3及5μmol/L的PS-ASODN作用24 h可以明显抑制MDA-MB-231细胞的迁移和侵袭能力(P<0.01)。结论 PS-ASODN能有效抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞的生长、促进凋亡、抑制其侵袭和迁移能力,其机制可能是通过PS-ASODN降低端粒酶活性而实现。
- 高秀梅孙大鹏张凤香
- 关键词：乳腺肿瘤端粒酶活性
- 大蒜素通过增强转化生长因子β1的表达抑制平滑肌细胞增殖
- 2013年
- 目的观察大蒜素是否能够通过增强转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)的表达抑制血管平滑肌细胞的增殖。方法构建表达TGF-β1 siRNA的载体、转染平滑肌细胞,通过RT-PCR和Western Blot观察TGF-β1的表达情况;通过MTT比色法检测空白组、TGF-β1 siRNA、大蒜素10μg/ml+TGF-β1 siRNA组和大蒜素10μg/ml组在24 h,48 h和72 h内对平滑肌细胞增殖的影响;通过Western Blot检测各组在48 h后TGF-β1、激活蛋白-1(AP1)及增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达情况;通过对细胞内活性氧簇(reactive oxygen species,ROS)生成的检测观察各组在作用48 h后血管壁氧化应激反应情况。结果 RT-PCR和Western blot检测结果显示TGF-β1 siRNA明显下调TGF-β1的表达;与其他组相比Allicin组细胞的生长显著降低(P<0.05),并且随时间的延长抑制作用明显加大,抑制率分别为25.13%、33.12%和43.05%;Western blot检测结果显示与其他组相比大蒜素组TGF-β1表达明显增强,而增殖相关基因AP1和PCNA的表达明显被抑制;作用48 h大蒜素组细胞内ROS为64,与其他组相比大蒜素组ROS生成明显降低。结论大蒜素可以通过增强TGF-β1的表达抑制平滑肌细胞增殖。
- 张凤香关宁李晨光孙大鹏罗俊生
- 关键词：转化生长因子-Β1大蒜素SIRNA血管平滑肌细胞
- MicroRNA-29a对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响被引量：1
- 2013年
- 目的研究MicroRNA-29 a对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和迁移的影响并探讨其可能机制。方法通过MTT法和划痕法分别观察microRNA-29a对VSMCs活力和迁移能力的影响;通过Realtime-PCR和Western印迹检测分别观察micro-RNA-29 a对MMP-9、MMP-2和PCNA表达的影响。结果与阴性对照组和空白对照组相比较,MicroRNA-29 a反义寡核苷酸组VSMC体外增殖能力和迁移能力明显被抑制(P<0.05);Real-time-PCR和Western印迹检测发现与阴性对照组和空白对照组相比较,MicroRNA-29 a反义寡核苷酸组MMP-9、MMP-2和PCNA表达明显降低。结论 microRNA-29a可以影响VSMC增殖和迁移,其机制可能是通过调节MMP-9、MMP-2和PCNA的表达来得以实现的。
- 张凤香关宁李晨光孙大鹏罗俊生
- 关键词：平滑肌细胞迁移增殖
- 大蒜素增强脑胶质瘤细胞株U87对TRAIL敏感性的机制研究
- 2014年
- 目的研究大蒜素是否能通过增加脑胶质瘤细胞U87对肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体(tumor necrosis factor-related apoptosis-inducing ligand,TRAIL)的敏感性来促进U87细胞的凋亡及其相关机制的研究。方法采用MTT法检测大蒜素联合TRAIL对U87细胞活性的影响;流式细胞术(Annexin V/FITC)评估大蒜素联合TRAIL对U87细胞凋亡的影响;Transwell实验进一步检测大蒜素联合TRAIL对U87细胞的侵袭能力的影响;Western-blot、RT-PCR和Q-RT-PCR方法检测大蒜素联合TRAIL对与U87细胞凋亡相关的基因和蛋白的表达影响。结果与其他组比较,大蒜素联合TRAIL明显降低U87细胞活力和侵袭能力,促进U87细胞凋亡。在分子水平上,与单独作用组比较,联合作用组明显增加DR4、DR5、Caspase-3和Caspase-8的活性,而AKT、pFKHR、MMP-2和MMP-9的活性明显被抑制。结论大蒜素能增强脑胶质瘤细胞U87对TRAIL的敏感性,从而促进U87凋亡。
- 张凤香孙大鹏贺成业韩冠英
- 关键词：大蒜素肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体
- c-FLIP-L影响乳腺癌MDA-MB-231细胞对TRAIL致凋亡作用的敏感性被引量：1
- 2014年
- 目的:观察c-FLIP-L对TRAIL诱导乳腺癌MDA-MB-231细胞凋亡的影响及其具体机制。方法:构建靶向c-FLIP-L的siRNA质粒,转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,RT-PCR、Weston blotting验证基因抑制效果。实验分空白对照组、TRAIL组、c-FLIP-L siRNA组和c-FLIP-L siRNA+TRAIL组共4组,MTT法检测各组MDA-MB-231细胞的增殖情况,流式细胞术检测MDA-MB-231细胞凋亡率,Transwell实验检测MDA-MB-231细胞侵袭能力,RT-PCR、Western blotting检测MDA-MB-231细胞中c-FLIP-L、caspase-3、caspase-8、MMP-2、MMP-9的表达。结果:靶向c-FLIP-L的siRNA质粒转染至乳腺癌细胞株可有效抑制c-FLIP-L mRNA[(37.12±3.02)vs(183.21±8.31),(174.65±10.06);P<0.05]及其蛋白的水平。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理MDA-MB-231细胞,与两者单独处理相比,细胞增殖抑制率显著升高[72 h时,(75.51±2.01)%vs(33.75±1.60)%,(34.31±2.01)%;均P<0.05],凋亡率显著升高[72 h时,(76.30±4.11)%vs(38.95±2.14)%,(29.28±1.66)%;均P<0.05],对细胞侵袭能力的抑制也显著增强。c-FLIP-L siRNA和TRAIL联合处理后,与两者单独处理相比,乳腺癌细胞中casepase-3、casepase-8的表达显著增强,而MMP-2、MMP-9的表达明显减弱。结论:抑制c-FLIP-L表达能够增强MDA-MB-231细胞对TRAIL的敏感性,从而提高诱导肿瘤细胞凋亡的能力,其机制可能与caspase-3、caspase-8的表达上调和MMP-2、MMP-9的表达下调有关。
- 孙大鹏贺成业张凤香韩冠英
- 关键词：乳腺癌MDA-MB-231细胞TRAIL凋亡
- 人参皂苷Rg3通过Ca^(2+)/CaM信号系统抑制胃癌BGC-823细胞增殖及其可能的机制被引量：11
- 2015年
- 目的:研究人参皂苷Rg3是否是通过降低钙调蛋白(calmodulin,Ca M)的表达来促进胃癌BGC-823细胞的凋亡及其可能的机制。方法:按加药的不同将BGC-823细胞,分为正常对照组、Rg3(50μg/ml)组、Ad-Ca M组和Rg3(50μg/ml)+Ad-Ca M组。MTT法检测Rg3和/或Ad-Ca M对BGC-823细胞增殖的影响,流式细胞术检测Rg3和/或Ad-Ca M对胃癌BGC-823细胞凋亡的影响,Transwell实验检测Rg3和/或Ad-Ca M对胃癌BGC-823细胞侵袭能力的影响,Western blotting检测Rg3和/或Ad-Ca M对胃癌BGC-823细胞内Ca M、IκB、Ca MKⅡ和NF-κB表达的影响。结果:Rg3组可以明显促进胃癌BGC-823细胞的凋亡和抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和侵袭,而Ad-Ca M组和Rg3+Ad-Ca M组明显抑制胃癌BGC-823细胞的凋亡和促进胃癌BGC-823细胞的生长和侵袭。Rg3组BGC-823细胞内NF-κB和Ca MKⅡ的表达均明显抑制,而IκB的表达明显增强;Ad-Ca M组和Rg3+Ad-Ca M组BGC-823细胞内NF-κB和Ca MKⅡ的表达均明显增强,而IκB的表达均明显抑制。结论:Rg3可能是通过降低Ca M的表达来抑制NF-κB信号通路的活性,进而抑制胃癌BGC-823细胞的增殖和侵袭、促进其凋亡。
- 孙大鹏鲁明明王硕富力
- 关键词：人参皂苷RG3胃癌BGC-823细胞钙调蛋白增殖
- 5-氮胞苷体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向心肌样细胞的分化被引量：6
- 2009年
- 背景:骨髓基质干细胞具有扩增迅速、分化潜能广泛等特点,因此建立骨髓基质干细胞的体外定向诱导模型有利于组织工程学研究。目的:探讨应用5-氮胞苷体外诱导大鼠骨髓基质干细胞向心肌样细胞分化的可能性。设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-06/2008-06在辽宁医学院附属第一医院中心实验室完成。材料:SD大鼠20只,由辽宁医学院实验动物中心提供。5-氮胞苷为Sigma公司产品。方法:大鼠麻醉后,分离股骨和胫骨,全骨髓法+贴壁法分离培养骨髓基质干细胞,待细胞生长融合至90%后传代扩增。取P3代骨髓基质干细胞,以2×104/孔密度接种于24孔培养板,分别加入5,10,15,20μmol/L5-氮胞苷诱导培养,同时设立不加诱导剂的空白对照,诱导24h后更换为正常培养液继续培养至3周。主要观察指标:细胞形态及生长曲线,诱导后细胞形态变化,诱导后细胞连接蛋白43和α-横纹肌肌动蛋白的表达。结果:①培养的骨髓基质干细胞大多呈梭形,有时可见细胞融合,P3代细胞接种后第1,2天为静止生长期,从第3天开始进入对数生长期,第9天达高峰,以后进入平台期,第12天细胞数量开始减少。②5μmol/L5-氮胞苷诱导后,骨髓基质干细胞形态无明显变化;10μmol/L5-氮胞苷诱导后骨髓基质干细胞变长,宽大,并朝一个方向延伸,具有肌管形成细胞的形态特点;15μmol/L5-氮胞苷诱导后,24孔板周边区有少量细胞存活;20μmol/L5-氮胞苷诱导后细胞死亡。③经10μmol/L5-氮胞苷诱导3周后,骨髓基质干细胞胞浆内可见连接蛋白43和α-横纹肌肌动蛋白的表达;空白对照组均呈阴性表达。结论:骨髓基质干细胞自身无法向心肌细胞方向转化,体外经5-氮胞苷诱导后具有向心肌细胞分化的潜能。5-氮胞苷浓度过低不能起到诱导分化作用,浓度过高则会造成细胞大量死亡,10μmol/L为较适宜的诱导浓度。
- 张凤香李树青孙大鹏司忠义
- 关键词：骨髓基质干细胞5-氮胞苷分化
- 钙敏感受体对内皮祖细胞数量及功能的影响被引量：3
- 2016年
- 目的观察钙敏感受体(Ca SR)对人外周血内皮祖细胞(EPCs)数量及功能的影响。方法培养并鉴定EPCs;RT-PCR和Western印迹检测EPCs中Ca SR的表达情况;MTT法观察Ca SR对EPCs增殖能力的影响;Tube形成和迁移实验评价Ca SR对EPCs血管新生能力和迁移能力的影响;Western印迹检测Ca SR对EPCs中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达的影响。结果 RT-PCR和Western印迹结果显示在EPCs中有Ca SR的表达;MTT法、Tube形成和迁移实验检测结果显示与正常对照组相比较,Ca SR激动剂组EPCs增殖、迁移能力和血管形成能力明显增强(P<0.05),而Ca SR抑制剂组EPCs增殖、迁移能力和血管形成能力明显降低(P<0.05);Western印迹检测发现与正常对照组相比较,Ca SR激动剂组VEGF和Ca SR表达明显增强,而Ca SR抑制剂组VEGF和Ca SR表达明显降低。结论 EPCs中有Ca SR的表达,并且Ca SR可以影响EPCs的数量、迁徙和血管形成能力。
- 张凤香贺成业李晨光孙大鹏
- 关键词：钙敏感受体内皮祖细胞血管内皮生长因子
