冯莉
- 作品数：22 被引量：51H指数：5
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- 发文基金：四川省应用基础研究计划项目国家自然科学基金四川省教育厅自然科学科研项目更多>>
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- 胱抑素B在肿瘤中的表达特征
- 胱抑素B为溶酶体半胱氨酸蛋白酶内源性抑制物，抑制高活性的半胱氨酸蛋白酶所致细胞外基质的降解和基底膜的破坏，与阻止肿瘤的侵袭和转移有关。先前我们以消减抑制杂交技术从食道癌和癌旁正常组织中筛选差异表达基因时，发现食道癌组织中...
- 任碧轩冯莉谢勇恩王朝莉李丽敬保迁
- 鲍曼不动杆菌三价抗原融合蛋白的制备及其免疫原性研究被引量：1
- 2020年
- 目的制备鲍曼不动杆菌SmpA/Omp22/NlpA(1⁃128)三价抗原融合蛋白,免疫接种Balb/c小鼠后探究其免疫原性。方法通过人工合成结合PCR扩增法获取smpA/omp22/nlpA(1⁃384)融合基因,将该融合基因克隆到质粒载体pColdI中,构建重组质粒pColdI⁃SON。将该重组质粒转化E.coli BL21进行原核表达,并将纯化的重组蛋白与弗氏佐剂混合作为免疫原经背部皮下注射接种Balb/c小鼠,并于初次接种后第14、28天各加强免疫1次,同时设置佐剂对照组和PBS对照组。分别于末次免疫后第7、21天小鼠内眦取血分离血清,ELISA检测抗体滴度。分离免疫小鼠脾淋巴细胞,检测抗原刺激培养后脾细胞增殖活性及IFN⁃γ/IL⁃4的分泌情况。结果所构建的重组质粒大小约为5.9 kb,转化大肠杆菌后诱导表达并纯化出分子量约56 kDa的重组蛋白,免疫接种后在小鼠体内检测到高滴度的抗原特异性IgG抗体,小鼠脾淋巴细胞增殖活性明显高于佐剂及PBS对照组(P<0.001),免疫小鼠脾淋巴细胞经抗原刺激后所产生的IL⁃4水平明显高于对照组(P<0.01),而IFN⁃γ产生水平各组间无显著性差异。结论成功制备了鲍曼不动杆菌SmpA/Omp22/NlpA(1⁃128)融合蛋白,小鼠免疫接种后显示出较强免疫原性。
- 董瑶吕琳曦关丽娜王朝莉冯莉谢勇恩
- 关键词：鲍曼不动杆菌免疫原性融合蛋白
- 重组P_(53)基因在HepG-2中的表达及作用被引量：2
- 1999年
- 为进一步探索正常Ｐ５３ 对肿瘤细胞增殖的抑制作用，本文用磷酸钙ＤＮＡ共沉淀法，将本室构建的ＰＸＴ１Ｐ５３ 真核表达细胞转移至ＨｅｐＧ２ 肝癌细胞系内，经斑点杂交技术和间接免疫荧光技术证实，外源性Ｐ５３ 基因已在ＨｅｐＧ２ 细胞中稳定表达，导入的Ｐ５３基因亦能抑制ＨｅｐＧ２ 肝癌细胞系增殖并诱导其凋亡。实验结果提示正常Ｐ５３ 基因可成为治疗不同肿瘤的重要靶分子之一。
- 任碧轩李仁冯莉唐恩洁杨晓红赵明才杨健张紫福张艳艳魏祥云
- 关键词：HEPG-2细胞肿瘤基因治疗
- 重组杜氏利什曼原虫Pxn1、TryP、假定蛋白CAJ07026和GDPMP蛋白刺激BALB/c小鼠的免疫应答状态被引量：3
- 2017年
- 目的观察重组杜氏利什曼原虫(Leishmania donovani)过氧化物还原酶1(peroxidoxin-1,Pxn1)、锥虫氧化还原过氧化物酶(tryparedoxin peroxidase,Try P)、假定蛋白CAJ07026(hypothetical protein CAJ07026.1,Hyp07026)和甘露糖-1-磷酸胍氨酸转移酶(GDP-mannose pyrophosphorylase,GDPMP)蛋白刺激BALB/c小鼠免疫应答状况。方法逆转录PCR(RT-PCR)分别扩增杜氏利什曼原虫Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因,克隆入质粒p QE30,构建重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP,转化至大肠埃希菌,以异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达。采用NTA-Ni盐凝胶层析柱,自然条件方式纯化重组蛋白rPxn1和rTry P,变性条件方式纯化重组蛋白rHyp07026和rGDPMP。25只BALB/c小鼠随机均分成5组,即rPxn1、rTry P、rHyp07026、rGDPMP免疫组及PBS对照组,免疫组小鼠分别以相应重组蛋白进行免疫,第1周免疫组小鼠皮下注射100μg相应的重组蛋白,隔周以50μg相应的重组蛋白加强免疫3次,对照组小鼠注射等量PBS。第3次加强免疫后1周,将各组小鼠脱颈处死,制备单个脾细胞,提取抗原刺激后小鼠脾细胞总RNA,用q RT-PCR微阵列检测抗原刺激后小鼠脾细胞内反映免疫应答的细胞因子转录水平表达谱。结果Pxn1、Try P、Hyp07026和GDPMP编码基因经PCR扩增,其产物大小分别为570、610、1 040和1 200 bp;经测序证实,与Gen Bank中的相关序列一致。重组质粒p QE30-Pxn1、p QE30-Try P、p QE30-Hyp07026和p QE30-GDPMP经IPTG诱导后均可在大肠埃希菌内高效表达,rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026蛋白相对分子质量(Mr)分别为45 000、22 000、23 000和38 000。rGDPMP、rPXNT1、rTXNT和rHyp07026免疫小鼠的脾细胞内84个细胞因子基因的m RNA表达中,与PBS对照小鼠脾细胞比较,高水平表达的IL-1f6分别是对照组的96.22、271.54、108.51和250.15倍,IL-17f分别是对照组的105.54、35.71、53.38和53.57倍,IL-10分别是对照组的21.68、27.51、24.45�
- 敬保迁谢勇恩胡为民杨健王朝莉冯莉
- 关键词：杜氏利什曼原虫
- S1P5对食管癌细胞Eca109黏附能力的影响被引量：1
- 2010年
- 目的研究S1P5对食管鳞癌Eca109细胞黏附能力的影响。方法从人正常食管黏膜上皮克隆S1P5基因,构建表达载体S1P5-EGFP,转染Eca109细胞,经G418筛选,获得S1P5-EGFP/Eca109稳定细胞株。以对照载体Control-EGFP转染的Eca109细胞作为对照,荧光显微镜下观察细胞的形态,用黏附试验评价其黏附能力。结果成功构建S1P5-EGFP和Control-EGFP载体并转染Eca109细胞获得稳定细胞株。S1P5表达于细胞膜并使细胞略呈梭形改变。S1P5过表达致Eca109细胞黏附能力明显低于对照(P<0.05),并且不受其配体1-磷酸鞘氨醇(S1P)的影响。结论 S1P5组成性抑制Eca109细胞的黏附能力,食管癌细胞可能通过下调S1P5的表达增强其黏附。
- 胡为民李丽唐恩洁敬保迁冯莉王朝莉任碧轩
- 关键词：食管癌ECA109细胞
- bcl-2与GM-CSF的LdsRNA对肿瘤细胞生长的抑制作用
- 2005年
- 目的 探索bcl-2-9GM-CSF的长链dsRNA(Longer doublestrand RNA，LdsRNA)对肿瘤细胞生长的抑制作用。方法使用体外转录法制备地高辛标记的bcl一2和GM—CSF基因的LdsRNA，转染THP1、HL-60和K562髓系白血病细胞系，分别以MTT法、免疫组化、免疫荧光技术和紫外分光光度计检测细胞LdsRNA转染水平，细胞增殖，特异性bcl-2蛋白表达和细胞总蛋白含量。结果LdsRNA能显著抑制THP1细胞增殖(P<0．05)和蛋白质合成，对HL-60和K562细胞系也有一定的抑制作用。结论LdsRNA能抑制肿瘤细胞的增殖，为以后利用LdsRNA用于肿瘤的治疗奠定一定的理论基础。
- 唐恩洁杨健杜冰任碧轩冯莉李丽
- 关键词：肿瘤细胞生长GM-CSFK562细胞系白血病细胞系地高辛标记RNA转染
- 幽门螺杆菌NCTC11637株Hp1501蛋白的原核表达与纯化
- 2011年
- 目的原核表达并纯化幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,H.pylori)NCTC11637株Hp1501蛋白。方法 PCR扩增H.pylori NCTC11637株Hp1501基因编码功能区序列Hp1501a,定向克隆至pQE30载体,构建重组原核表达质粒pQE30-Hp1501a,转化E.coli XL1-blue,IPTG诱导表达,并分析重组蛋白的表达形式。用Ni-NTA His柱对重组蛋白进行纯化。结果重组表达质粒pQE30-Hp1501a经双酶切鉴定构建正确,测序分析表明插入基因序列完全正确;表达的重组蛋白相对分子质量约为37 000,表达量约占菌体总蛋白的21%,主要以包涵体形式存在,可与兔抗His单克隆抗体特异性结合;纯化的重组蛋白纯度达91%。结论成功原核表达并纯化了H.pylori NCTC11637株Hp1501蛋白,为H.pylori外膜蛋白的生物学功能和疫苗的研究奠定了基础。
- 杨继文杨致邦敬保迁于拽拽熊玉霞王朝丽冯莉
- 关键词：幽门螺杆菌生物信息学原核细胞基因表达纯化
- 川北地区胃癌特异性表达基因的克隆被引量：5
- 2011年
- 目的:构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库,筛选胃癌特异表达基因。方法:取胃低分化腺癌组织和癌旁正常黏膜组织,提取总RNA,逆转录cDNA,进行SSH构建消减文库获得序列标签,与载体连接、克隆、筛选、测序及同源性检索。结果:以癌旁正常黏膜组织为driver、胃低分化腺癌组织为tester成功构建cDNA消减文库,测序结果与公共数据库中已知基因和人类EST比较,获得5个特异性序列标签(NBPF1、FAM48A、RXFP2、ACTB和QDPR)。结论:应用SSH法成功构建胃低分化腺癌组织cDNA消减文库,初步筛选胃癌部分表达基因,为寻找川北地区胃癌发生发展的特异性基因奠定基础。
- 王朝莉李丽陈果杨尚君敬保迁任碧轩冯莉
- 关键词：胃癌SSH特异基因
- 南充地区不同叶型半夏的指纹图谱分析被引量：14
- 2007年
- 目的:比较南充地区野生芍药叶型和竹叶型半夏的指纹图谱并鉴定差异分子。方法:采用RAPD扩增、分析不同叶型半夏指纹图谱,并对典型特异扩增条带进行克隆和测序分析。结果:36条随机引物中有22条扩增出清晰条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增出157条带,竹叶型半夏基因组DNA扩增出161条带。芍药叶型半夏基因组DNA扩增的差异带3条,竹叶型半夏基因组DNA扩增的差异带7条。差异条带AOPN-14300经克隆测序证实为非编码区序列,Genbank登记号为EF417577。结论:南充野生不同叶型半夏基因组存在差异,已将部分典型差异基因组DNA片段进行克隆,为从分子水平鉴别本地区半夏奠定基础。
- 任碧轩白权王朝莉陈果李丽敬保迁张大容冯莉唐恩洁
- 关键词：半夏基因组DNARAPD指纹图谱克隆
- 7种不同类型肿瘤组织内胱抑素B表达的比较研究
- 2023年
- 目的:比较7种不同类型的癌组织与相应癌旁组织内胱抑素B(CSTB)的表达情况。方法:收集食管鳞状细胞癌、喉鳞状细胞癌、胃腺癌、肺鳞状细胞癌、肝细胞癌、结肠腺癌和膀胱移行细胞癌患者的癌组织与癌旁组织,体外培养食管癌Eca109细胞株、胃癌SGC7901细胞株、肝癌Hep G2细胞株及肺癌YTLMC-90细胞株,通过Western blot分析食管癌与相应癌旁粘膜组织内的CSTB表达水平,通过免疫组化法检测各组织标本和癌细胞株内CSTB的表达情况。结果:体外培养的癌细胞株中,食管癌Eca109细胞株、胃癌SGC7901细胞株、肝癌Hep G2细胞株及肺癌YTLMC-90均表达CSTB。在癌旁组织中,喉粘膜、食道粘膜、胃粘膜及肝组织表达CSTB,其它癌旁正常组织低表达或不表达CSTB;相应癌组织中,喉鳞状细胞癌、食管鳞状细胞癌及胃腺癌CSTB表达水平低(P<0.05);肝癌组织CSTB表达水平高(P<0.05),而肺鳞状细胞癌、结肠腺癌及膀胱移行细胞癌CSTB表达水平高(P<0.05)。结论:不同类型实体癌内CSTB的表达失调,为进一步阐释不同类型肿瘤发生发展机制提供分子基础。
- 敬昊东冯莉王朝莉李丽谢勇恩胡为民杨健敬保迁
- 关键词：癌症
