黄志平
- 作品数：4 被引量：6H指数：2
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- 水基磁流体联合融合蛋白RGD-tTF双靶向诱发肿瘤组织血管栓塞
- 利用靶向性血栓药物实现对实体瘤血管的选择性栓塞是一种新颖的抗肿瘤策略。该策略以截短的组织因子(truncatedTissueFactor，tTF;也称前凝血因子)为效应因子，结合肿瘤血管靶向载体实现选择性诱发肿瘤组织血管...
- 黄志平
- 关键词：融合蛋白实体瘤血管栓塞
- 文献传递
- 肺癌靶向血栓蛋白hu3D3V_H-tTF的表达及活性鉴定被引量：2
- 2008年
- 目的制备一种用于肺癌血管靶向栓塞治疗的融合蛋白hu3D3VH-tTF,并鉴定其生物学活性。方法利用重叠PCR技术构建tTF与hu3D3VH的融合基因,克隆至表达载体pET22 b(+),在E.coliBL21(DE3)中表达,镍亲和色谱柱纯化目的蛋白。ELISA检测融合蛋白hu3D3VH组分与肺腺癌细胞A549选择性结合活性,凝血实验和FⅩ活化实验鉴定融合蛋白tTF组分的促凝血活性。结果获得序列正确的hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,融合蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达。纯化后的融合蛋白与肺腺癌细胞A549具有选择性结合活性,并能活化FⅩ、有效促发血液凝固。结论成功构建hu3D3VH/tTF/pET22 b(+)重组子,hu3D3VH/tTF融合蛋白具有hu3D3VH的选择性结合能力同时具有TF的促凝血活性,为开展选择性肺肿瘤血管血栓性栓塞研究奠定了基础。
- 颜江华王生育王阶平王勇军黄志平王臻
- 关键词：TTF血栓肺癌
- RGD-tTF水基磁流体的制备及其活性研究被引量：4
- 2008年
- 目的探讨RGD-tTF水基磁流体通过磁场和RGD多肽在体外对内皮细胞双靶向的功能。方法通过化学沉淀法以柠檬酸钠为表面活性剂制备水基磁流体(MnFe2O4),弱酸改性后与重组的RGD-tTF融合蛋白结合,利用H-600透射电镜观测纳米粒径,以SUQID鉴定磁性,用MTT法、因子X活化检测和流式细胞仪检测RGD-tTF磁流体生物活性。结果成功制备出的水基磁流体能在磷酸盐缓冲液中稳定分布且具有生物兼容性,实验表明RGD-tTF与水基磁流体结合后对RGD和tTF生物活性均无显著影响,并证实在磁场的作用下能实现了水基磁流体对RGD-tTF的定位作用。结论一种具有内皮细胞双靶向功能的RGD-tTF水基磁流体已制备成功。
- 颜江华黄志平王生育王勇军李文珠
- 关键词：靶向内皮细胞
- 肺癌靶向通用载体hu3D3／cSA融合蛋白的制备和活性分析
- 2008年
- 目的制备一种新型的肺癌靶向通用载体hu3D3与核心链霉亲和素（core-streptavidin，cSA）的融合蛋白hu3D3／cSA，并鉴定其活性。方法PCR扩增cSA基因，克隆至质粒hu3D3／pET-22b（＋）而获得表达载体hu3D3／cSA／pET-22b（＋），并在E.coli BL21（DE3）中表达，镍亲和层析柱纯化hu3D3／cSA融合蛋白，采用TEA缓冲液进行复性。SDS-PAGE和Westem blot鉴定融合蛋白四聚体的形成。FTTC标记hu3D3／cSA，通过荧光显微镜分析hu3D3组分的抗原反应性和特异性，流式细胞术比较hu3D3／cSA和hu3D3与靶点的结合能力；ELISA和Westem blot鉴定cSA组分结合生物素（biotin）的能力。结果获得序列正确的hu3D3／cSA／pET-22b（＋）重组子，融合基因在E.coli BL21（DE3）中主要以包涵体的形式表达。纯化复性后的融合蛋白能够形成四聚体复合物，保留了cSA结合生物素的活性，hu3D3组分能与肺癌细胞表面抗原结合，且结合能力与单体hu3D3相比有明显增强。结论成功制备了具有结合靶抗原和生物素活性的hu3D3／cSA融合蛋白，同时改善了hu3D3组分结合其靶点的亲合力（avidity）。因此，hu3D3／cSA可以作为一个通用的肺癌靶向载体，与多种生物素化的抗肿瘤药物或试剂联用，有望为多药物联合靶向治疗肺癌提供一种可行的方法。
- 王勇军颜江华王阶平王臻黄志平陈彩霞
- 关键词：单域抗体肺癌
