高洁
- 作品数：1 被引量：0H指数：0
- 供职机构：第四军医大学唐都医院更多>>
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- AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 目的构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体AChR-IgG Fc/pAN1782并在CHOk1细胞中表达AChR-IgG Fc融合蛋白。方法以人烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)α1亚基全序列为模板,以PCR法扩增AChRα1亚基胞外段主要免疫区基因片段Hα1-121,将其插入真核表达载体pAN1782。将构建的新载体转染至CHOk1细胞,建立稳定表达AChR-IgG Fc融合蛋白的CHOk1细胞株,以Western blot法检测AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结果 (1)Hα1-121经PCR法扩增后所获428 bp基因片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与人类基因库中AChRα1亚基胞外段基因片段Hα1-121序列完全一致,未出现点突变或移码突变。所构建的新载体经酶切鉴定证实片段插入正确,载体构建成功。(2)Westernblot法检测结果显示转染新载体的CHOk1细胞培养上清液中有AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结论成功构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体,且该融合蛋白可在转染新载体的CHOk1细胞中稳定表达,为下一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定了初步良好基础。
- 高洁常婷王键李柱一
- 关键词：重症肌无力胆碱能IGGFC段融合蛋白
