王键
- 作品数：38 被引量：185H指数：6
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- DO11.10转基因小鼠脊髓损伤后的运动功能恢复被引量：1
- 2010年
- 目的:通过比较两种小鼠-DO11.10和BALB/c小鼠脊髓损伤后不同的运动功能恢复程度和损伤区的形态学变化来分析T淋巴细胞对脊髓损伤修复的影响。方法:建立小鼠脊髓重度夹伤模型,H&E染色,GFAP、CD11b和淋巴细胞免疫组织化学实验分析损伤14 d、21 d后损伤区的变化;在损伤后0 d、7 d、14 d和21 d进行Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)运动评分来评价小鼠运动功能恢复情况。结果:脊髓损伤后21 d,BALB/c小鼠产生了较厚的胶质瘢痕并伴有明显的固缩现象;而DO11.10小鼠中只观察到稀薄的胶质瘢痕形成并没出现明显的固缩。DO11.10小鼠脊髓损伤后14 d,巨噬/小胶质细胞浸润较BALB/c小鼠明显增加。脊髓损伤后21 d,DO11.10小鼠脊髓损伤区中的T淋巴细胞较BALB/c小鼠明显减少。BBB运动评分显示,在损伤后21 d内DO11.10小鼠较BALB/c小鼠有显著的运动功能恢复。结论:脊髓损伤后21 d内,针对神经组织抗原的自身反应性T淋巴细胞的浸润和存在不利于脊髓损伤后的运动功能恢复。
- 王慧郭俊赵宇卞干兰刘芳芳于才勇冯睿鞠躬王键
- 关键词：脊髓损伤BBB评分炎症反应
- 辣椒素对电针调控胃运动的影响作用及意义被引量：3
- 2005年
- 目的探讨辣椒素毁损感觉神经生长的情况下,对电针调控胃运动的影响作用及意义。方法电针刺激经辣椒素干预大鼠足三里穴,采用免疫组织化学方法及电生理的方法,检测原癌基因c fos在中枢延髓的孤束核(NTS)及迷走神经背运动核(DMV)中的表达以及中枢延髓的孤束核及迷走神经背运动核中神经元细胞放电频率的变化情况,同时采用浆膜法观察胃电的变化情况。结果辣椒素针刺组胃电的波幅和频率与生理盐水针刺组存在显著性差异(P <0 .0 1) ,生理盐水针刺组胃电的波幅和频率与单纯生理盐水组胃电的波幅和频率存在显著性差异(P <0 .0 1)。原癌基因c fos在孤束核及迷走神经背运动核中的表达,辣椒素针刺组阳性率与生理盐水针刺组存在显著性差异(P <0 .0 1) ,生理盐水针刺组阳性率与单纯生理盐水组存在显著性差异(P <0 .0 1)。辣椒素针刺组NTS与DMV内神经元细胞放电频率的变化与生理盐水针刺组存在显著性差异(P <0 .0 1)。而与辣椒素非针刺组及单纯生理盐水组未见有明显差异(P >0 .0 5 ) ;同时,生理盐水针刺组NTS与DMV内神经元细胞放电频率与单纯生理盐水组存在显著性差异(P <0 .0 1)。结论电针对胃运动具有调控作用,且电针对穴位的作用性质可能是一种伤害性刺激。
- 王景杰黄裕新秦明王键邱建勇饶志仁
- 关键词：辣椒素C-FOS基因电针胃运动电生理学中枢神经系统
- miR-9和miR-124共表达载体的构建与靶分子鉴定
- 2015年
- 目的构建miR-9和miR-124单独表达和串联共表达的真核表达载体,并鉴定其共同靶分子。方法将pri-miR-9和pri-miR-124的编码序列分别插入或串联后插入真核表达载体p CAG,转染He La细胞后,实时定量PCR鉴定成熟miRNA的表达水平。构建miR-9和miR-124分子完全互补的靶基因萤光素酶报告载体,双萤光素酶报告系统检测表达的成熟miRNA的生物学功能。利用生物信息学软件预测miR-9和miR-124的共同靶分子,将靶分子mRNA的3'非翻译区(UTR)克隆入p GL3luciferase报告基因载体中,观察转染细胞后miRNA对报告基因表达的影响。结果经测序及酶切鉴定证实3种miRNA表达载体构建完全正确,实时定量PCR检测表明这3种表达载体均能正确高表达成熟的miRNA。双萤光素酶报告系统检测证实3种载体表达的miRNA分子具有生物学活性。生物学软件预测发现小分子GTP结合蛋白Ras相关蛋白2a(Rap2a)是miR-9和miR-124的靶基因,成功构建了含有Rap2a 3'UTR的萤光素酶报告基因载体。双萤光素酶报告系统提示miR-9和miR-124均能抑制Rap2a的表达。结论成功构建了miR-9和miR-124的单独表达和共表达载体,并能高表达具有生物学活性的成熟的miR-9和miR-124分子。Rap2a可能是miR-9和miR-124的一个共同靶分子。
- 薛茜王琰张坤赵湘辉田婉莹杨安钢鞠躬王键
- 关键词：MIRNA脊髓损伤
- 大鼠垂体前叶SP-、CGRP-免疫反应阳性神经纤维的起源以及前叶中GAP-43免疫反应阳性神经纤维与垂体前叶腺细胞的关系
- 众所周知，Harris的哺乳动物垂体前叶的“体液调节理论”是神经内分泌学的基石。下丘脑中的促垂体神经元在正中隆起处释放促垂体激素，被门脉血管运输到垂体前叶中去，从而调节垂体前叶腺细胞的功能。垂体前叶中腺细胞并不接受神经纤...
- 王键
- 关键词：垂体前叶逆行追踪
- 文献传递
- 炎性条件下PD-L1敲除小鼠星形胶质细胞的活化和增殖能力降低
- 2016年
- 目的观察炎性条件下程序性死亡蛋白配体1(PD-L1)敲除小鼠皮层来源的星形胶质细胞(AS)的增殖和活化情况。方法制备PD-L1敲除小鼠模型,分离出野生型和PD-L1敲除小鼠皮层AS,用100 ng/m L脂多糖(LPS)联合100 ng/m Lγ-干扰素(IFN-γ)刺激,免疫细胞化学染色和实时定量PCR检测野生型和PD-L1敲除小鼠来源的AS的胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、波形蛋白(vimentin)、S100钙结合蛋白B(S100β)、bystin、神经上皮干细胞蛋白(nestin)、一氧化氮合成酶2(NOS2)、CC趋化因子配体5(CCL5)、白细胞介素6(IL-6)、集落刺激因子2(CSF2)、丝氨酸蛋白酶抑制剂A3n(Serpin A3n)和脂质运载蛋白2(Lcn2)的改变。结果 LPS联合IFN-γ刺激可明显促进AS的PD-L1的表达,PD-L1敲除小鼠AS的骨架结构较野生型AS存在差异。敲除小鼠AS的GFAP、vimentin、S100β、bystin mRNA水平较野生型AS明显下调,nestin mRNA水平无明显差异,但PD-L1敲除小鼠AS的增殖水平低于野生型AS。LPS联合IFN-γ刺激增加NOS2、CCL5、IL-6 mRNA的表达水平、但CSF2、Serpin A3n和Lcn2 mRNA无明显变化。结论炎性条件下PD-L1敲除小鼠星形胶质细胞的活化与增殖水平较野生型AS下降。
- 宋俊许智华田野方超刘芳芳于才勇刘玲王键
- 关键词：星形胶质细胞反应性星形胶质细胞细胞骨架增殖
- 一种红色荧光蛋白转基因小鼠的建立被引量：1
- 2009年
- 目的:建立广泛表达红色荧光蛋白(RFP)的转基因小鼠,便于组织和细胞移植研究.方法:把DsRed基因片段插入到pCAGGS载体的强启动子下游构建转基因载体pCAG-DsRed.经细胞转染验证,受精卵原核注射,建立红色荧光蛋白转基因C57BL/6小鼠.PCR鉴定转基因小鼠的基因型;红色荧光蛋白在组织中的表达情况,则通过荧光显微镜检测小鼠各组织器官冰冻切片.结果:pCAG-DsRed载体可以在真核细胞中表达RFP,经基因型分析和表型观察,得到两只红色荧光蛋白的首建鼠.经荧光显微镜观察各组织冰冻切片发现红色荧光蛋白在多个组织器官中表达,其中在神经系统和肌肉组织中表达量较高.结论:成功建立了一种红色荧光蛋白转基因小鼠,红色荧光蛋白在转基因小鼠的神经系统和肌肉组织等中高表达.
- 于才勇刘芳芳郭俊宫卫东鞠躬王键
- 关键词：红色荧光蛋白
- 带有蛋白转导结构域的Bcr/Abl癌蛋白片段的表达及其跨膜转运被引量：10
- 2001年
- HIV 1编码的反式激活蛋白TAT具有将细胞外蛋白转导进入细胞的基序 ,称为蛋白转导结构域 (PTD) .为研究PTD介导的PTD Bcr Abl融合蛋白的跨膜转运 ,合成了编码PTD的基因片段 ,并与PCR扩增的慢性粒细胞白血病癌蛋白bcr abl基因片段融合 .在大肠杆菌中表达纯化了融合蛋白 ,将纯化的融合蛋白加入培养的HL60细胞和C2C12细胞后 ,发现PTD基序可以介导Bcr Abl蛋白自由从细胞外跨膜转导进入细胞内 .研究结果可能为用外源蛋白负载 (loading)免疫活性细胞如抗原提呈细胞提供新的途径 .
- 梁英民孙强蒋姗姗陈萍王冀姝李荣周鹏王键黄红艳韩骅
- 关键词：蛋白转导结构域BCR/ABL慢性粒细胞白血病癌蛋白
- AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体的构建及表达
- 2010年
- 目的构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体AChR-IgG Fc/pAN1782并在CHOk1细胞中表达AChR-IgG Fc融合蛋白。方法以人烟碱型乙酰胆碱受体(nicotinic acetylcholine receptor,nAChR)α1亚基全序列为模板,以PCR法扩增AChRα1亚基胞外段主要免疫区基因片段Hα1-121,将其插入真核表达载体pAN1782。将构建的新载体转染至CHOk1细胞,建立稳定表达AChR-IgG Fc融合蛋白的CHOk1细胞株,以Western blot法检测AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结果 (1)Hα1-121经PCR法扩增后所获428 bp基因片段大小符合预计结果,测序所得核苷酸序列与人类基因库中AChRα1亚基胞外段基因片段Hα1-121序列完全一致,未出现点突变或移码突变。所构建的新载体经酶切鉴定证实片段插入正确,载体构建成功。(2)Westernblot法检测结果显示转染新载体的CHOk1细胞培养上清液中有AChR-IgG Fc融合蛋白表达。结论成功构建人AChR-IgG Fc段融合蛋白真核表达载体,且该融合蛋白可在转染新载体的CHOk1细胞中稳定表达,为下一步靶向B细胞治疗重症肌无力奠定了初步良好基础。
- 高洁常婷王键李柱一
- 关键词：重症肌无力胆碱能IGGFC段融合蛋白
- BCR/ABL癌蛋白片段的表达、纯化及其抗血清的制备被引量：3
- 2001年
- 目的 克隆并表达 bcr/ abl融合基因片段 ,并制备其抗血清 .方法 PCR扩增包含蛋白融合点的 bcr/ abl癌基因片段 ,序列测定后克隆入带有 His标签的原核表达载体 p ET-16 b,转化宿主菌 BL2 1,IPTG诱导表达 ,SDS- PAGE分析表达结果 ,Ni- NTA树脂亲和纯化 ,皮下多点注射免疫小鼠 ,EL ISA确认抗血清的滴度 .结果 PCR扩增得到大小约 5 2 3bp的目的片段 ,序列测定表明与发表序列完全一致 ;得到了一种新的癌基因 bcr/ abl片段的原核表达载体 p ET- 16 b- bcr/abl,在 BL 2 1中表达可见于 Mr 2 1× 10 3处有一蛋白新生带 ,表达的 BCR/ ABL蛋白免疫小鼠后 ,EL ESA确认抗血清的滴度 >1∶ 2 0 0 0 .结论 成功的克隆、表达了 bcr/ abl融合基因片段 ,并制备了相应的抗血清 .
- 梁英民蒋姗姗孙强吴绒丽陈萍李荣周鹏王键韩骅
- 关键词：BCR/ABL融合蛋白抗血清慢性粒细胞白血病
- LIM结构域蛋白KyoT相互作用分子的筛选被引量：6
- 2002年
- KyoT为LIM结构域蛋白 ,可与转录因子RBP Jk相互作用。为了研究其功能 ,用酵母双杂交法筛选了与KyoT相互作用的蛋白。以KyoT2为诱饵筛选人淋巴结cDNA文库 ,从 5× 10 6 个克隆中共获得 4 2个阳性克隆。提取质粒进行酶切鉴定 ,获得 2 2个非重复克隆。对此 2 2个克隆进行序列分析 ,共获得 13种基因 ,其中包括已知的KyoT相互作用蛋白RBP Jk和两个未知基因。另一种被筛选到的已知基因是激活状态的信号转导物和转录因子 1活化物的抑制蛋白 (proteininhibitorofactivatedsignaltransducerandactivatoroftranscription 1,PIAS1)。由于KyoT在小鼠睾丸中表达较高 ,因此进一步探讨了KyoT2与PIAS1的相互作用。并首先在酵母中证实KyoT2与PIAS1的相互作用并得到阳性结果。进而在大肠杆菌中表达纯化了KyoT2蛋白 ,并以此为抗原制备了抗KyoT2多克隆抗体 ,再用GST pulldown实验验证了KyoT2和PIAS1在体外的相互作用。成功筛选了KyoT相互作用蛋白 ,发现并验证了KyoT与PIAS1的相互作用 。
- 李荣王冀姝孙强王键杨曦黄红燕周鹏韩骅
- 关键词：LIM蛋白酵母双杂交转录
