陈普成
- 作品数：40 被引量：55H指数：4
- 供职机构：中国农业科学院哈尔滨兽医研究所更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项“十二五”国家科技计划农村领域哈尔滨市科技攻关计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学政治法律更多>>
- 编码H5N1亚型禽流感同义血凝素(HA)蛋白以及同义神经氨酸酶(NA)蛋白的基因及其应用
- 本发明提供一种同时表达H5N1亚型禽流感同义血凝素蛋白和同义神经氨酸酶蛋白的重组表达载体，其中所述同义血凝素蛋白的氨基酸序列为SEQ？ID？NO：1，所述同义神经氨酸酶蛋白的氨基酸序列为SEQ？ID？NO：2，所述重组表...
- 姜永萍陈化兰邓国华王靖飞陈普成柳金雄施建忠李雁冰
- 文献传递
- 表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建与评价
- 为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR扩增IBDV的VP2基因,构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并将携带Pec复合启动子的VP2基因表达盒...
- 陈普成李奇蒙姜永萍柳金雄田雨王笑梅胡永浩陈化兰
- 关键词：火鸡疱疹病毒传染性法氏囊病毒基因重组蛋白表达
- 文献传递
- 鸭肠炎病毒疫苗株UL41和UL40基因间隔区作为其复制非必需区的鉴定
- 2022年
- 为探寻鸭肠炎病毒(DEV)基因组中可插入外源基因的复制非必需区,本研究利用CRISPR/Cas9基因编辑技术,构建重组质粒pX459-ul4140和含有红色荧光蛋白(RFP)表达框架的穿梭片段UL41-RFP-UL40,转染后拯救重组病毒,并对其进行噬斑纯化。通过PCR和荧光显微镜观察对重组病毒进行鉴定,结果显示,经拯救得到表达RFP的重组病毒rDEV-ul4140RFP;所有代次的rDEV-ul4140RFP在显微镜下均能观察到红色荧光,表明重组病毒中的RFP基因稳定存在。将rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEFs)后,收集24 h、48 h、72 h、96 h的细胞和上清,检测TCID并绘制生长曲线。结果显示,rDEV-ul4140RFP在CEF中的生长曲线和亲本DEV疫苗株无显著差异。利用SPF鸭对rDEV-ul4140RFP的免疫保护效果进行评价。攻毒保护实验结果显示,rDEV-ul4140RFP和亲本病毒DEV疫苗株均能对SPF鸭提供100%的免疫保护。本研究结果证实DEV基因组UL41和UL40基因间隔区可作为外源基因的插入位点,为以DEV为载体构建相关重组疫苗提供参考依据。
- 刘静赵玉博焦晨晨陈普成胡玉珍姜永萍陈化兰柳金雄
- 关键词：鸭肠炎病毒
- 用于构建双价禽流感DNA疫苗的双目的基因表达质粒的构建及鉴定被引量：3
- 2016年
- 为探索构建禽流感双价或多价DNA疫苗的可行性,本研究以本实验室前期研制的禽流感DNA疫苗p CAGGopti HA5为基础[其中含有禽流感病毒(AIV)A/Goose/Guang Dong/1/96(H5N1)的HA基因],将增强型绿色荧光蛋白(eGFP)报告基因作为第二个目的基因,利用双启动子启动、内部核糖体进入位点(IRES)介导以及通过蛋白Linker编码序列连接融合表达两个目的基因的形式,构建了双启动子重组表达质粒pH5-eGFP、IRES介导的重组表达质粒pHIE以及融合表达重组质粒pH6E。并采用脂质体介导将这3种重组质粒分别转染293T细胞,通过间接免疫荧光试验和western blot方法检测HA和eGFP这两种目的蛋白的瞬时表达情况。结果显示,这3种重组质粒均能够正确表达AIV的HA蛋白和eGFP。其中pH5-eGFP表达出两个独立的目的蛋白,而且互相不影响各自的表达和细胞定位;pH6E则以融合形式表达两种目的蛋白,由于HA蛋白具有膜定位信号,所以融合蛋白主要定位于细胞膜上。本研究结果表明,双启动子表达质粒和双目的蛋白融合表达质粒适合用于构建AIV以及其他相关病原的双价DNA疫苗。
- 黄冬陈普成刘兵唐猛柳金雄姜永萍陈化兰
- 关键词：DNA疫苗EGFP
- 表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒的构建被引量：7
- 2014年
- 为构建表达传染性法氏囊病毒(IBDV)VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒(rHVT-VP2),本研究利用RT-PCR方法扩增IBDV的VP2基因构建了重组真核表达质粒pCAGG-VP2,并采用限制性内切酶将携带Pec复合启动子和CMV增强子的VP2基因表达盒(Pec-VP2)切下,连接于Gateway系统入门质粒pENTR构建pENTR-VP2。采用Gateway LR克隆技术将pENTR-VP2与构建的重组粘粒f5354ccdBK+共同参与基因片段互换反应,构建重组粘粒f5354-VP2。f5354-VP2与其他4个相互重叠覆盖HVT全基因组的粘粒经酶切线性化后共同转染CEF细胞,并拯救出重组病毒rHVT-VP2。将重组病毒在CEF细胞中连续传代20次,每隔5代采用PCR、western blot和间接免疫荧光进行检测,结果表明VP2蛋白均得到稳定地表达。rHVT-VP2的构建为进一步研究其免疫学特性奠定了基础。
- 李奇蒙陈普成柳金雄姜永萍王笑梅田雨胡永浩陈化兰
- 关键词：传染性法氏囊病毒火鸡疱疹病毒VP2
- H5N1亚型禽流感病毒感染SPF鸡脾脏蛋白质组分析
- 2014年
- 为鉴定H5N1亚型禽流感病毒(AIV)感染鸡脾脏的差异表达蛋白,本研究利用双向电泳(2-DE)和质谱(MS)技术相结合的蛋白质组学方法对AIV感染的鸡脾脏蛋白进行检测。通过2-DE图谱分析,获得37个差异表达蛋白点,经MS鉴定出36个差异蛋白点;GO软件注释分析显示差异蛋白参与多种重要的生物学过程,包括代谢、合成、运输、生物调节和免疫反应等;荧光定量PCR(qPCR)验证表明感染组中组织转谷氨酰胺酶(TGM2)、结蛋白(DES)、β-2微球蛋白(B2M)基因呈现上调趋势,而P40核糖体相关蛋白(RPSA)、肌动蛋白相关蛋白(ACTR3)基因与对照组相比表达水平下调,这些基因表达趋势均与2-DE结果一致。本研究结果为进一步研究宿主与病毒相互作用和抗病毒感染的机制奠定了基础。
- 赵玉辉陈普成包红梅王秀荣李广兴
- 关键词：禽流感病毒脾脏双向凝胶电泳蛋白质组
- 表达H5亚型禽流感病毒不同形式HA基因重组鸭瘟病毒的构建及HA表达形式的鉴定被引量：2
- 2016年
- 为研究禽流感病毒(AIV)血凝素(HA)基因的信号肽以及跨膜区对HA蛋白在重组病毒中表达的影响,本研究以鸭瘟病毒(DEV)为载体,在DEV基因组的US7和US8基因之间通过同源重组插入去除信号肽或跨膜区的H5N1亚型AIV HA基因编码序列,分别构建了缺失信号肽HA基因的DEV重组病毒(r DEV-PK)和缺失跨膜区HA基因的DEV重组病毒(r DEV-PSM),并传至20代,经PCR对插入的外源基因编码序列扩增及序列测定,表明外源基因能够在重组病毒基因组中稳定存在;间接免疫荧光和western blot鉴定结果表明去除信号肽的HA蛋白能够在重组病毒感染的鸡胚成纤维细胞浆中正确表达,而去除跨膜区的HA蛋白能够在感染细胞的培养液中检测到。本研究为表达H5N1亚型AIV HA基因重组DEV载体弱毒疫苗在鸭体内免疫机制的进一步研究奠定基础。
- 刘璐丁蕾蕾柳金雄陈普成李爱心胡玉珍姜永萍陈化兰孙晓林
- 关键词：禽流感病毒HA蛋白信号肽跨膜区
- 表达2.3.2.1d分支H5亚型禽流感病毒HA基因重组鸭瘟病毒的构建和评价被引量：3
- 2020年
- 为研究H5亚型禽流感病毒(AIV)HA基因重组鸭瘟病毒(DEV)载体活疫苗,本研究利用DEV疫苗株多片段体外拯救系统,将我国H5亚型AIV 2.3.2.1d分支代表病毒CK/LN/SD007株的血凝素(HA)基因插入DEV基因组中,构建了重组DEV,对其进行PCR、间接免疫荧光实验、western blot和传至15代后的遗传稳定性试验。结果显示,构建了一株表达CK/LN/SD007株HA基因的重组DEV,并且HA基因能够在重组病毒中正确表达并稳定遗传,命名为rDEV H5-12;将rDEV H5-12和亲本病毒DEV疫苗株接种鸡胚成纤维细胞(CEF)后,收集96 h内不同时间点的病毒样品,检测TCID50并绘制生长曲线。结果显示,rDEV H5-12在CEF中的生长曲线和亲本病毒DEV疫苗株无显著差异;rDEV H5-12以105 TCID50免疫SPF鸭2周后,进行DEV和AIV攻毒保护试验。结果显示,rDEV H5-12一次免疫SPF鸭后2周即能诱导对DEV强毒和AIV(CK/LN/SD007)攻击的完全保护,即免疫组SPF鸭在观察期内无排毒,无死亡,对照组SPF鸭在观察期内全部排毒,而且死亡;rDEV H5-12以105 TCID50免疫SPF鸭2次后,每周采集血清进行血凝抑制(HI)抗体效价检测。结果显示,rDEV H5-12首免SPF鸭后2周,多数鸭HI抗体转阳,加强免疫后1周,HI抗体水平达到高峰(HI抗体最高水平为25),随后HI抗体缓慢下降,至加强免疫后第7周,37.5%的鸭HI抗体仍为阳性。以上结果表明,拯救的表达H5亚型AIV HA基因的重组鸭瘟病毒(rDEV H5-12),可作为防控鸭瘟和水禽流感的二联活疫苗候选株。本研究为DE和水禽H5亚型AI的防控提供了新思路。
- 王波赵玉博胡玉珍丁蕾蕾陈普成焦晨晨姜永萍陈化兰柳金雄
- 关键词：禽流感活载体疫苗
- 表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗及应用
- 表达传染性法氏囊病毒VP2蛋白的重组火鸡疱疹病毒疫苗及应用。本发明以连续覆盖火鸡疱疹病毒(HVT)全基因组的Fosmid文库为基础，利用Red ET同源重组技术和Gateway LR克隆技术，将携带Pec复合启动子的VP...
- 陈化兰陈普成柳金雄姜永萍王笑梅
- 文献传递
- 表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗的构建和应用
- 本发明提供一种表达分泌型鸭坦布苏病毒E蛋白的重组鸭病毒性肠炎病毒疫苗，其保藏号为CCTCC V201214，命名为rDEV-TE-tPAS，及其构建方法和应用。具体地，本发明利用重组克隆技术，将包含SV40启动子、鸭坦布...
- 陈化兰柳金雄陈普成姜永萍
- 文献传递
