许世英
- 作品数：4 被引量：21H指数：2
- 供职机构：海南大田国家级自然保护区更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金海南省教育厅高等学校科学研究项目海南省自然科学基金更多>>
- 相关领域：生物学农业科学更多>>
- 海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库的构建被引量：18
- 2008年
- 目的:构建海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库。方法:采用RNAiso Reagent(TAKARA)处理新鲜血液,以总RNA抽提试剂盒(上海华舜)制备总RNA。利用SMART(Switching Mechanismat5’end of RNA Transcript)技术,用PowerscriptTM反转录酶逆转录合成第一链cDNA,LD-PCR扩增获得cDNA双链,SfiⅠ酶切和CHROMA SPIN-400TM柱分级分离后,500bp以上的片段与pDNR-LIB载体连接,电转化入E.coliDH5α,建成原始文库。然后扩增文库并随机挑取单菌落,酶切鉴定重组子插入片段大小。结果:经鉴定,库容量达到1.9×106克隆,原始文库滴度为1.59×1010cfu/mL,重组率接近100%,扩增后的文库滴度为7.4×1012cfu/mL。插入片段大小分布为0.5～2.0kb,平均长度约为1.0kb。结论:所构建文库的各项指标均达到要求,为筛选海南坡鹿已知和未知功能基因提供了材料来源,且为进一步研究基因的结构和功能奠定了重要基础。
- 申明霞刘涛杜丽王凤阳成鹰许世英吴科榜李治深符运南林贤梅满初日嘎祁超
- 关键词：海南坡鹿外周血白细胞CDNA文库SMART技术
- 海南坡鹿HSF1cDNA的克隆与表达被引量：3
- 2009年
- 采用RT-PCR和RACE方法扩增海南坡鹿热休克转录调节因子1(Heat shock transcription factor1,HSF1)cDNA全长,将扩增产物与pMD20-T载体连接,重组质粒经PCR、酶切鉴定后测序并进行生物信息学分析;构建pET28a-hdHSF1表达载体,经IPTG诱导表达后,进行SDS-PAGE和Western blot分析。结果显示,海南坡鹿HSF1cDNA全长为2036bp,含有1个1578bp的开放阅读框,编码525个氨基酸。经生物信息学分析,HSF1是一个等电点为4.93的亲水性蛋白。经IPTG诱导表达后,得到一个带组氨酸标签的约62kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约62kD特异性抗体结合带,表明海南坡鹿HSF1原核表达载体成功构建并表达。
- 成鹰杜丽王凤阳刘涛李治深许世英符运南林贤梅吴科榜林杰材满初日嘎
- 关键词：海南坡鹿克隆
- 海南坡鹿CDC42 cDNA的克隆、原核表达及纯化被引量：1
- 2011年
- 应用RT-PCR方法对海南坡鹿细胞分裂周期蛋白42(Cell division cycle 42,CDC42)编码区进行扩增,将扩增产物与PET-42a载体连接,重组质粒鉴定正确后,进行生物信息学分析;构建pET42a-hdCDC42表达载体,经IPTG诱导表达,将表达产物进行SDS-PAGE、可溶性分析、纯化及Western blot分析。结果表明,海南坡鹿CDC42含有1个576 bp的开放阅读框,编码191个氨基酸。经IPTG诱导表达后,得到一个带有His-tag和GST的约54 kD的融合蛋白,用抗His单克隆抗体进行Western blot,得到一条约54 kD的特异性抗体结合带,表明海南坡鹿CDC42原核表达载体成功构建并表达。
- 张巍陈品林雷明成鹰陈欢曹献英杜丽张冬琳刘涛许世英符运南祁超王凤阳
- 关键词：海南坡鹿CDC42克隆原核表达
- 海南坡鹿HSF1cDNA克隆和功能研究
- 王凤阳许世英吴科榜杜丽成鹰韩新畴满初日嘎林贤梅符运南林杰才倪承结
- 该项目首次建立了海南坡鹿外周血白细胞cDNA文库，克隆了海南坡鹿HSF1cDNA全长，并进行了生物信息学分析，进行了原核表达以及目的蛋白的鉴定，为阐释海南坡鹿热应激相关基因表达的分子机制提供了理论依据。该研究结果对于海南...
- 关键词：
- 关键词：海南坡鹿生物信息学分子机制
