蒋洁兰
- 作品数：18 被引量：75H指数：5
- 供职机构：大连海洋大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金辽宁省教育厅高等学校科学研究项目辽宁省教育厅科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学文化科学化学工程更多>>
- 低盐胁迫对红鳍东方鲀幼鱼肝脏的酶活性、组织结构及免疫基因表达的影响被引量：2
- 2017年
- 为探讨低盐胁迫下肝脏在红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)机体免疫中的作用,在肝脏酶活性、组织结构和基因表达水平3个方面进行了研究。结果表明,低盐(盐度4‰)胁迫下红鳍东方鲀肝脏中总超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶(AKP)的酶活性显著高于对照组(P<0.05);肝脏组织结构中肝细胞发生肿大,形状变形;肝脏IL15和TLR3基因的表达量显著升高(P<0.05),而IRF2基因的表达量却未有显著性差异(P>0.05)。
- 孙梦蕾姜志强蒋洁兰王莉苹
- 关键词：红鳍东方鲀肝脏酶活性基因表达
- 太平洋鳕ISG基因的克隆及其早期表达分析
- 太平洋鳕(Gadus macrocephalus),又称大头鳕,具有较高的经济价值。近几年来,由于捕捞量剧增,导致其野生资源不断下降。本实验室的太平洋鳕人工繁育技术不断取得突破,但在早期会出现大量死亡的现象,推测可能是由...
- 毛明光李幸蒋洁兰姜志强
- 太平洋鳕IRF3基因的克隆及绝对定量表达分析被引量：2
- 2015年
- 本研究通过克隆首次得到太平洋鳕(Gadus macrocephalus)干扰素调节因子3(interferon regulatory factor 3,IRF3)的部分序列。该序列长1878 bp,包含长1377 bp的完整开放阅读框(open reading frame,ORF),编码459个氨基酸,其编码的蛋白质分子量约为51 k D。经氨基酸序列比对发现,太平洋鳕IRF3的氨基酸序列包括1个含有5个保守色氨酸残基的DNA结合域(DNA binding domain,DBD)和1个保守的C端IRF关联域(IRF association domain,IAD);系统进化树分析表明,太平洋鳕IRF3与其他物种的IRF3亲缘关系较近。应用绝对荧光定量PCR方法对IRF3在不同组织和不同日龄(days post-hatching,dph)仔鱼的表达水平进行检测,并对干扰素在仔鱼期的免疫作用进行分析。组织表达绝对定量结果显示,性腺,肝和胸腺表达量高于其他组织。不同日龄仔鱼IRF3表达量结果显示,IRF3在受精卵就已经表达,在25 dph表达量大幅提高。本研究的结果为进一步研究太平洋鳕干扰素作用机制以及其在早期发育中的作用奠定了基础。
- 孙航姜志强蒋洁兰温施慧李幸暴宁苏鹏毛明光
- 关键词：干扰素
- 急性低盐胁迫下红鳍东方鲀幼鱼IgM、NKCC1和Hsp70基因的表达被引量：7
- 2017年
- 为探讨红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)耐低盐的分子机制,以自然海水组为对照,利用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)技术,分析红鳍东方鲀幼鱼在盐度16、12、8和4胁迫下,鳃和肾中免疫球蛋白M(immunoglobulin M,IgM)、钠钾氯协同转运蛋白1(Na-K-Cl cotransporter 1,NKCC1)和热休克蛋白70(heat shock protein 70,Hsp70)3个基因的表达情况。结果表明,3个基因在鳃和肾中均有表达,IgM和Hsp70基因在鳃和肾中的表达量均无显著性差异(P>0.05),而NKCC1基因在鳃中的表达量显著高于肾(P<0.05)。同一盐度下,随着时间的增加,鳃中IgM基因的表达量大致呈现先降低后升高的趋势,肾中则呈现先降低后升高再趋于平稳的趋势;同一时间内,鳃中低盐度组与对照组的IgM基因表达量差异比肾中差异更为明显。在鳃中,相同时间内NKCC1基因在各低盐度组的表达量低于对照组,尤其在6h和72h两个时间点时显著低于对照组(P<0.05);肾中各时间点的表达量基本都高于0h表达量。在相同时间内,3h、6h、24h、72h的各低盐度组,在鳃中,Hsp70基因的表达量均与同一时间对照组之间差异明显(P<0.05);在肾中,从6h开始,各低盐组与对照组之间差异性显著(P<0.05)。以上结果表明,红鳍东方鲀幼鱼IgM、NKCC1、Hsp70 3个基因的表达量在不同盐度不同时间下存在差异,由此推测这3个基因对红鳍东方鲀幼鱼的渗透压调节起重要作用。
- 孙梦蕾吕绘倩暴宁司滨陈飞王莉苹蒋洁兰
- 关键词：红鳍东方鲀IGMNKCC1HSP70
- 太平洋鳕抗菌肽Hepcidin基因克隆及体外表达研究被引量：4
- 2020年
- 为揭示太平洋鳕Gadus macrocephalus抗菌肽Hepcidin(GmHep)的分子结构和表达特性,利用qPCR法对平均体质量为2.438 kg鳕不同组织和发育早期的GmHep表达模式进行了探讨,分别构建了原核(pET-32a-GmHep)和真核(pEGFP-GmHep)表达载体,研究了GmHep的体外表达特点。结果表明:GmHep基因开放阅读框长为297 bp,编码98个氨基酸,蛋白相对分子质量为10833.56,该肽N端具22个氨基酸残基的信号肽,成熟肽含有8个半胱氨酸残基、4个二硫键;氨基酸序列比对发现,GmHep与大西洋鳕Hepcidin同源性最高(93%),但与其他鱼类Hepcidin同源性较低(小于60%),预示其功能具有独特性;GmHep在肝脏中的表达量显著高于其他组织(P<0.05),且GmHep在5、10、30、37、40日龄仔稚鱼中均有表达(P<0.05);GmHep体外诱导表达优化条件为IPTG浓度0.01 mmol/L、30℃、诱导4 h;GmHep在EPC细胞系中主要定位在细胞质中。研究表明,本研究成功构建了两种GmHep体外表达载体,确定GmHep为肝分泌型,且在太平洋鳕发育早期发挥一定作用。
- 吴玲梅顾杰温智清贾鹏刘瑞婷蒋洁兰刘荭郑晓聪毛明光
- 关键词：抗菌肽原核表达亚细胞定位
- 太平洋鳕RAG1和IgM基因荧光定量PCR方法的建立及初步应用被引量：2
- 2015年
- 为研究太平洋鳕发育早期特异免疫系统形成的机制,通过RAG1和Ig M基因的转录水平衡量特异免疫系统的发育特点。根据Gen Bank中RAG1和Ig M的序列信息,分别设计1对特异引物,从太平洋鳕头肾中扩增得到RAG1和Ig M的基因片段。将所获基因片段分别插入到克隆载体p MD18-T中,从而构建太平洋鳕RAG1和Ig M基因的质粒标准品。建立并优化太平洋鳕RAG1和Ig M基因绝对荧光定量PCR方法。为进一步验证该方法的可靠性,分别利用绝对定量和相对定量检验目的基因在太平洋鳕早期发育过程不同组织内的表达差异。以优化后的绝对荧光定量PCR方法检测不同发育时期太平洋鳕RAG1和Ig M的表达情况。结果显示,RAG1的回归方程为y=-3.266x+33.77,回归系数R2=0.996;Ig M的回归方程为y=-3.119x+27.61,回归系数R2=0.998。绝对定量和相对定量结果在基因转录趋势上显现出一致性,即RAG1基因在胸腺和头肾中表达,且在胸腺中的表达量显著高于头肾中的表达量,在肝脏和脾脏中无表达;Ig M基因在胸腺、头肾、肝脏和脾脏中均有表达,其中脾脏中表达量最高,其次是头肾。RAG1基因在太平洋鳕发育早期的表达水平很低,到61日龄(days posthatching,dph)至95 dph表达量显著提高;Ig M基因在早期表达水平同样很低,到33 dph至61 dph才有明显表达,在95 dph时表达量显著提高。研究表明,本实验方法可靠,特异性较强,可成功对目标基因转录水平进行检测。
- 李幸温施慧毛明光姜志强蒋洁兰
- 关键词：IGM
- 低盐胁迫下红鳍东方鲀幼鱼鳃、肾和肠组织结构的变化被引量：8
- 2016年
- 对低盐胁迫下体质量(11.34±2.13)g红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)的鳃、肾和肠组织结构进行显微观察,探讨组织结构变化与渗透压的关系。结果表明,低盐胁迫下,鳃丝和鳃小片宽度增大,鳃小片间距缩小,与对照组差异均有统计学意义(P<0.05),鳃小片细胞更为圆润饱满,低盐度组每100μm泌氯细胞数为0.91±0.78,低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);低盐度组的肾小球膨大,饱满充盈,与肾小囊内壁间隙小于对照组,差异有统计学意义(P<0.05),近曲小管和集合管管径增大,近曲小管游离面刷状缘较对照组发达;低盐度组肠绒毛单层柱状上皮厚度为(51.54±2.53)μm,大于对照组(P<0.05),柱状上皮细胞间每100μm杯状细胞数为5.05±0.91,小于对照组(P<0.05),而两组间的杯状细胞大小差异无统计学意义(P>0.05)。水体盐度变化导致红鳍东方鲀鳃、肾和肠发生适应性变化。
- 孙梦蕾蒋洁兰王莉苹陈飞韩雨哲姜志强暴宁司滨
- 关键词：红鳍东方鲀
- 大头鳕TNFSF6基因的结构分析及其在发育早期和病毒暴发时的表达水平被引量：1
- 2019年
- 为揭示大头鳕TNFSF6基因的基本结构与功能及其在大头鳕发育和神经坏死病毒(Pacific cod nervous necrosis virus, PCNNV)暴发时的响应机制,本研究通过基因克隆获得TNFSF6 cDNA开放阅读框序列,并对序列进行生物信息学分析,运用相对荧光定量PCR(qRT-PCR)方法对TNFSF6在不同组织、孵化后不同日龄仔鱼和PCNNV感染前后仔稚鱼中的表达水平进行检测。结果显示,大头鳕TNFSF6 cDNA长1 388 bp,5′UTR占315bp,3′UTR占500 bp,ORF全长573 bp,编码190个氨基酸。qRT-PCR结果显示,TNFSF6在各组织均有表达,但在脾脏和鳃组织中的表达量较高;大头鳕孵化后15、20、37和40 d TNFSF6基因的转录水平分别是其在5 d转录水平的0.28、0.15、0.12和0.13倍。在24 d和46 d PCNNV暴发时,病鱼TNFSF6基因的转录水平高于对照组;在77 d PCNNV暴发时,病鱼TNFSF6转录水平则显著低于对照组。研究表明,TNFSF6基因在大头鳕发育早期和仔鱼暴发PCNNV时发挥了重要的作用。
- 刘瑞婷蒋洁兰毛明光姜志强姜志强矫志伟陈明康孙谦
- 关键词：肿瘤坏死因子发育神经坏死病毒
- 太平洋鳕ATG5基因的克隆及表达分析被引量：4
- 2015年
- ATG5(Autophagy related gene 5)基因是一种自噬相关基因,是形成自噬体的重要基因,ATG5基因的表达对自噬调控的成熟有重要作用。本研究中通过克隆,首次得到太平洋鳕Gadus macrocephalus ATG5c DNA部分序列,该序列长为895 bp,含有完整的开放阅读框(Open reading frame,ORF),编码275个氨基酸,其编码的蛋白质相对分子量约为32 200;经核苷酸序列比对发现,太平洋鳕ATG5核苷酸序列与半滑舌鳎Cynoglossus semilaevis、尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus ATG5核苷酸序列的相似性均高达87.27%;利用太平洋鳕与其他物种ATG5核苷酸序列构建系统进化树,结果显示,ATG5核苷酸序列系统进化树反映的亲缘关系基本符合传统分类学观点;氨基酸序列分析结果显示,ATG5蛋白氨基酸序列具有较高的保守性;利用绝对荧光定量PCR方法对ATG5基因在太平洋鳕各组织中的转录水平进行检测,结果显示,肝、脾和肾中的表达量高于其他组织,鳃、肾、脾、脑、肝和肌肉各组织中的ATG5 mRNA拷贝数分别为11.617 08、20.449 25、19.706 87、4.839 84、27.434 97、2.954 75 copies/ng。本研究结果将为进一步研究太平洋鳕细胞吞噬机制奠定基础,也为太平洋鳕的免疫机理和相关研究提供基础数据。
- 孙航毛明光蒋洁兰姜志强李幸温施慧
- 关键词：克隆
- 红鳍东方鲀GPI基因对急性低盐胁迫的响应机制被引量：2
- 2019年
- 为了获得红鳍东方鲀Takifugu rubripes葡萄糖-6-磷酸异构酶(Glucose-6-Phosphate Isomerase,GPI)的基因信息及其表达特性,研究采用RT-PCR和实时荧光定量PCR (qPCR)技术进行了GPI基因的克隆、组织表达分析及其在急性低盐胁迫下的基因响应研究。结果显示,所获得的红鳍东方鲀GPI基因序列长1736 bp,包含一个完整的开放阅读框(Open Reading Frame,ORF)。ORF由1662个核苷酸组成,编码553个氨基酸;预测的氨基酸序列中有2个糖异构域(Sugar Isomerase Domains),不存在信号肽和跨膜结构域。多序列比对结果表明物种间GPI具有较高的保守性。qPCR结果表明: GPI基因mRNA在红鳍东方鲀鳃、肌肉、脑、肠、肝及肾等组织中均有表达,其中肌肉中表达量最高。在不同盐度胁迫下,在鳃中,各低盐组GPI mRNA相对表达量均呈现先升高后降低又回升的趋势;在肾中,各低盐组GPI mRNA相对表达量变化趋势各有不同。由此推测,GPI基因在红鳍东方鲀对急性低盐胁迫的响应中发挥一定作用。
- 毛明光孙心如蒋洁兰蒋洁兰顾杰姜志强姜志强
- 关键词：红鳍东方鲀葡萄糖-6-磷酸异构酶
